實驗一培養(yǎng)基的制備、消毒與滅菌及超凈工作臺的使用

微生物實驗課注意事項課程簡介：必修課，24學(xué)時考試成績按以下公式計算：平時（60％）＋操作考試（40％）當(dāng)前1頁，總共22頁。課堂紀(jì)律嚴(yán)格遵守實驗室規(guī)章制度嚴(yán)肅課堂紀(jì)律不允許無故曠課、早退（1次）遲到（3次）不能做與實驗無關(guān)的事當(dāng)前2頁，總共22頁。實驗室安全和衛(wèi)生安全實驗室嚴(yán)禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學(xué)試劑和儀器衛(wèi)生每次實驗需留下6位同學(xué)值日，協(xié)助保持實驗室清潔當(dāng)前3頁，總共22頁。1、了解培養(yǎng)基的概念、種類和用途，明確培養(yǎng)基的配制原理。2、學(xué)習(xí)掌握培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟。3、掌握高壓蒸汽滅菌的原理和方法步驟。實驗?zāi)康囊?、培養(yǎng)基的配制當(dāng)前4頁，總共22頁。

培養(yǎng)基(culturemedium)是指人工配制的、適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。自然界中微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加之實驗和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，不同種類的培養(yǎng)基一般都應(yīng)含有微生物生長所需的碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因子和水六大營養(yǎng)要素，且各成分比例應(yīng)合適。為了滿足微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的要求，還必須控制培養(yǎng)基合適的pH。

實驗原理當(dāng)前5頁，總共22頁。常用凝固劑是瓊脂，固體培養(yǎng)基瓊脂加量通常為1.5%-2%；半固體培養(yǎng)基瓊脂加量為0.5%-0.8%。實驗原理常用培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng)；高氏一號培養(yǎng)基用于培養(yǎng)放線菌；麥芽汁培養(yǎng)基和豆芽汁培養(yǎng)基通常用于酵母菌的培養(yǎng)；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)霉菌。當(dāng)前6頁，總共22頁。實驗分組安排5-6人一組，配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基每組配500mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基斜面1支（每人），其余分裝在兩個500mL三角瓶。

當(dāng)前7頁，總共22頁。當(dāng)前8頁，總共22頁。當(dāng)前9頁，總共22頁。當(dāng)前10頁，總共22頁。當(dāng)前11頁，總共22頁。包扎：

加塞后，試管通常每7支一起，包上一層牛皮紙或兩層報紙，用線繩扎緊。三角瓶加塞后也用牛皮紙包扎。

以活結(jié)形式扎緊，以便使用時容易解開。

用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、配制人或?qū)嶒灲M。滅菌時包牛皮紙、報紙當(dāng)前12頁，總共22頁。滅菌：

培養(yǎng)基滅菌一般采用壓力蒸汽滅菌

通常滅菌條件為1.05kg/cm2,121℃滅菌20-30分鐘；含糖量高的培養(yǎng)基，如馬丁氏培養(yǎng)基則為0.56kg/cm2,115℃滅菌30分鐘。當(dāng)前13頁，總共22頁。二、消毒與滅菌當(dāng)前14頁，總共22頁。當(dāng)前15頁，總共22頁。當(dāng)前16頁，總共22頁。紫外線滅菌----紫外線波長在200-300nm,具有殺菌作用，其中以265-266nm殺菌力最強。無菌室或無菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。當(dāng)前17頁，總共22頁。干熱滅菌電烤箱1、干熱滅菌2、壓力蒸汽滅菌當(dāng)前18頁，總共22頁。干熱滅菌1、裝入待滅菌物品2、升溫：接通電源，加熱升溫至160-170℃。3、恒溫：保持160-170℃2小時。4、降溫：切斷電源，自然降溫。5、開箱取物：待烤箱溫度降到70℃以下以后，方可打開箱門，取出物品。箱內(nèi)溫度高于7