凝集效價(jià)及吸收試驗(yàn)

凝集效價(jià)及吸收試驗(yàn)第一頁，共十二頁，2022年，8月28日凝集效價(jià)的測定1.取20支小試管，分兩排放置于試管架上，前排標(biāo)明A,后排標(biāo)明B,再將各排由左而右注明號碼。2.各管均加生理鹽水0.2ml。3.吸取A型被測血清0.2ml,加入A排第1管中，混勻，吸出0.2ml加入第2管中，如此稀釋至第10管，從第10管吸出得0.2ml棄掉，用同樣的方法取B型被測血清在B排中稀釋，最后兩排管的血清稀釋倍數(shù)分別為第二頁，共十二頁，2022年，8月28日凝集效價(jià)的測定1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1024.4.A排管各加B型2%RBC生理鹽水懸液0.2ml;B排管各加A型2%RBC生理鹽水懸液0.2ml;混勻。5.放置室溫1~2h觀察結(jié)果，以稀釋倍數(shù)最高而又顯凝集者為其凝集效價(jià)。第三頁，共十二頁，2022年，8月28日吸收試驗(yàn)概述本實(shí)驗(yàn)用以間接證明RBC上的血型抗原及其強(qiáng)度。常用于ABO亞型的鑒定、全凝集或多凝集RBC的定型以及多種原因引起RBC血型抗原減弱時(shí)的定型及法醫(yī)學(xué)檢查等。第四頁，共十二頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)原理將被檢RBC或含有血型物質(zhì)的唾液、毛發(fā)等被檢測品加入已知效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)抗A及抗B血清后，若RBC或其他被檢品中含有相應(yīng)的抗原，變吸收血清中的抗體。吸收后血清以已知抗原的RBC來滴定效價(jià)，比吸收前血清效價(jià)顯著下降或完全消失，便可證明受檢RBC上或被檢物中有與標(biāo)準(zhǔn)血清中抗體相對應(yīng)的抗原。從而間接推知被檢RBC或毛發(fā)等的血型及其亞型的種類。第五頁，共十二頁，2022年，8月28日儀器及用具試管、吸管、4℃冰箱、離心機(jī)、顯微鏡等。試劑抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)分型血清、2%A型B型標(biāo)準(zhǔn)RBC鹽水懸液。標(biāo)本受檢RBC。第六頁，共十二頁，2022年，8月28日操作

分離血標(biāo)本，將血清和紅細(xì)胞分別做好標(biāo)記。將受檢RBC分成兩管，用等滲鹽水洗滌3次，然后除盡鹽水。將標(biāo)準(zhǔn)抗-A、抗-B血清倍比稀釋，分別加入等量2%A型B型標(biāo)準(zhǔn)RBC鹽水懸液，室溫下放置15min后，1000r/min，1min離心，觀察凝集結(jié)果。選擇出凝集程度最高1管稀釋度作為標(biāo)定血清。第七頁，共十二頁，2022年，8月28日抗體吸收取2支小試管，分別標(biāo)記抗-A、抗-B；并分別加入相應(yīng)標(biāo)定血清0.5ml;再分別加入等量壓積RBC；混合，放4℃冰箱中至少1h，每10min混合1次，使RBC充分吸收抗體。然后1000r/min離心，取上清液，標(biāo)記為抗-A、抗-B吸收液。第八頁，共十二頁，2022年，8月28日于試管架上排列小試管4排，每排5支，每管各加生理鹽水0.2ml，第1、3兩排第1管分別各加抗-A、抗-B吸收液0.2ml；第2、4排第1管分別各加未吸收抗-A及抗-B血清0.2ml。然后，分別用1：2倍稀釋法稀釋至1：32.第九頁，共十二頁，2022年，8月28日在第1、2兩排試管中每管各加2%A型紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.2ml，第3、4排每管中加入2%B型紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.2ml；充分混勻，1000r/min離心1min。第十頁，共十二頁，2022年，8月28日觀察結(jié)果吸收后抗體效價(jià)較吸收前降低2個(gè)滴度以上者為陽性。吸收后抗-A效價(jià)較未吸收抗A效價(jià)顯著降低或消失為A型；吸收后抗B效價(jià)較未吸收抗B效價(jià)顯著降低或消失為B型；吸收后抗A及抗B效價(jià)效價(jià)較未吸收抗A及抗B效價(jià)顯著降低或消失為AB型；吸收后抗A及抗B效價(jià)效價(jià)較未吸收抗A及抗B效價(jià)無明顯差異者為O型。第十一頁，共十二頁，2022年，8月28日質(zhì)量控制1.本試驗(yàn)中所用的抗-A、抗-B血清效價(jià)不宜過高，應(yīng)先將抗血清效價(jià)稀釋到32為宜。因?yàn)槿绻寡逍r(jià)太高，抗血清被A亞型RBC吸收后，效價(jià)下降不明顯，難以判斷結(jié)果。2.RBC經(jīng)洗滌壓積，鹽水應(yīng)盡量去盡，以免抗血清被