免疫實驗室基礎(chǔ)常識課件

免疫實驗室基礎(chǔ)常識

免疫學(xué)檢測方法的簡介基本原理免疫學(xué)檢測方法的應(yīng)用抗原、抗體的定義免疫室檢測的項目感染性疾病檢查項目細胞、體液免疫檢查項目腫瘤標志物電化學(xué)發(fā)光檢測項目自身免疫性疾病檢查項目3/14/20231免疫學(xué)檢測方法的簡介

方法原理免疫間接凝集方法RBC、乳膠顆粒+Ag免疫

沉淀反應(yīng)方法瓊脂板+Ab酶免疫分析技術(shù)（EIA）HRP+Ag或Ab放射免疫方法（RIA）I*125+Ag或Ab免疫光散射比濁分析Ag+Ab=CIC、微粒+Ag免疫膠體金檢測方法膠體金+抗人IgG免疫熒光顯微鏡方法FITC+抗人IgG化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)ABEL+抗CEA電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)[Ru（bpy）3]**+抗AFP3/14/20232免疫學(xué)檢測常用的基本技術(shù)凝集方法MP-IgM、TPPA、Widal、Weil-FASO、RF、CRP、冷凝集實驗等

沉淀方法IgG、A、M、C3、C4、CRP、等酶聯(lián)方法病毒抗體IgG、IgM及蛋白抗原放射方法腫瘤標志物等光散射比濁方法Ig、ASO、RF、微量蛋白膠體金方法TB-Ab、HBsAg、HCG、LP-IgM熒光顯微方法自身抗體、呼吸道V-IgM等化學(xué)發(fā)光技術(shù)腫瘤標志、甲狀腺功能、電化學(xué)發(fā)光技術(shù)肝炎標志、性腺分析等3/14/20233抗原與抗體

一.

抗原、抗體的定義[1]1.

抗原的定義(1)凡是能夠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體的免疫物質(zhì)、并能在體內(nèi)外與抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)稱為抗原。(2)抗原指能與T細胞的TCR何B細胞的BCR結(jié)合，促使其增殖、分化、產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細胞，并能與之結(jié)合，發(fā)揮免疫效應(yīng)的物質(zhì)。（3）抗原兩個特性：免疫原性、抗原性。2.

醫(yī)學(xué)上重要的抗原[2]a.

病原微生物：細菌、病毒、立克次氏體。(表面抗原、核心抗原、鞭毛抗原等)3/14/20235抗原與抗體a.

自身抗原：一般自身組織對機體自身沒有抗原性，但在外傷、感染、電離輻射、藥物等影響下可以發(fā)生變性成為自身抗原，刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)引起自身免疫性疾病，ANA.dsDNA等。a.腫瘤抗原：如AFP、CEA、PSA等。b.同種異體抗原：紅細胞血型抗原、白細胞抗原（人類白細胞抗原又稱HLA）等等。2抗體的定義：（1）抗體是機體在抗原物質(zhì)刺激下所形成的一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的球蛋白。3/14/20236（2）抗體是介導(dǎo)體液免疫的重要分子，是指B細胞識別抗原后增殖分化為漿細胞所產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，主要存在于血清等體液中。能與抗原特異性結(jié)合，具有免疫功能。（3）3/14/20237抗體的基本內(nèi)容用電泳的方法可將血清或血漿蛋白分離成白蛋白和球蛋白兩個組分。大多數(shù)抗體位于r球蛋白區(qū)域內(nèi)。抗體的另一個常用名為免疫球蛋白（Ig），意為r球蛋白中與免疫相關(guān)的組分。抗體在血液中檢出，但它在其他部位存在；細胞質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的膜和B淋巴細胞膜上、NK細胞和肥大細胞的細胞膜上、組織液和血漿中、還在乳汁和分泌液中?？贵w分類；IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。IgG亞類IgG1-4、IgA亞類1-23/14/20239抗體的基本內(nèi)容抗體的功能對有害因子，如毒素、藥物、病毒、細菌、和其它寄生蟲可通過與特出細胞受體結(jié)合而造成機體的損害，而分泌抗體可通過與其結(jié)合了阻止與響應(yīng)受體結(jié)合，起到了中和作用。IgG的調(diào)理作用促進吞噬細胞對抗原的吞噬。IgG、IgE和IgM介導(dǎo)的抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用。（NC、MC、NK細胞）IgE所介導(dǎo)的超敏反應(yīng)IgA介導(dǎo)的粘膜免疫母體的IgG介導(dǎo)的新生兒免疫3/14/202310應(yīng)用抗原抗體結(jié)合原理檢測的項目

感染性疾病檢測項目肝炎病毒篩查：A、B、C、D、E、G、TTV、CMV呼吸道病原體篩查：EB、AD、CB、RSV、MP、CP感染性疾病檢查項目：Uu、CT、NG、USR.TPPA、HIV自身免疫性疾病項目

免疫全項：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA、Ig.C3、C4、CRP、ASO、RF、CIC

肝病自身抗體：ANA、ds-DNA、SMA、AMA、LKM、SLA可溶性肝抗原、LC1抗肝溶質(zhì)Ⅱ型抗原自身抗體：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA腎病自身抗體：ANA,ds-DNA,GBM,ANCN.ENA糖尿病自身抗體：IAA、ICA、GAD3/14/202311應(yīng)用抗原抗體結(jié)合原理檢測的項目

性激素6項參考值黃體生成素

（LH）青春期、成年期卵泡激素

（FSH）、、、、泌乳素

（PRL）3.4--24.1ng/ml雌二醇

（E2）卵泡期、黃體期、絕經(jīng)期孕酮

（PRO）、、、、、、睪酮

（T）0.06-0.82ng/ml糖尿病項目胰島素

C肽3/14/202313

免疫指標與臨床疾病

.HBsAg：急、慢性乙肝無癥狀攜帶者2.HBsAb：疫苗接種后、既往感染后，有免疫力。3.HbeAg：病毒復(fù)制，傳染性強。re-S1：病毒復(fù)制，傳染性強。4.HBeAb：病毒復(fù)制降低或消失，傳染性很弱。5.HbcAb：乙肝感染后產(chǎn)生，持續(xù)性強，可終生不消失。6.HbcIgM：乙肝感染早期，為早期診斷標志。7.HAVAbIgM：急性甲肝，2個月后陽性消失。8.HCV-Ab：感染過丙肝，陽性可持續(xù)1年以上。9.HDV-Ab：感染過丁肝，一般在乙肝感染后出現(xiàn)。10.HEV-IgM：戊肝感染的早期。11.HGV-Ab：感染過庚肝。12.CMV-IgM：感染CMV，偶發(fā)可引起肝細胞炎癥。13.TTV-Ab：感染TTV而引起的肝細胞炎癥。3/14/202314

免疫指標與臨床疾病

乙型肝炎標志物模式分析及臨床意義

臨床診斷、免役接種、臨床分期、傳染判斷、母嬰檢查等常見乙肝的8種模式：sAgsAbeAgeAbcAb臨床意義＋＋＋HBV感染，急、慢性乙肝，傳染性強＋＋＋急、慢性乙肝，傳染性弱，或攜帶者＋＋急慢性乙肝，或攜帶者。查HBV-DNA＋＋既往感染過乙肝病毒，有免疫力＋＋＋既往感染，乙肝恢復(fù)期，有免疫力＋接種乙肝疫苗后，HBV感染后的恢復(fù)＋＋既往感染，乙肝恢復(fù)期基本無傳染＋既往感染，排除檢查HBV-DNA3/14/202315免疫指標與臨床疾病

呼吸道病菌抗體IgM檢測的臨床意義呼吸道病毒并非分類上的名稱，而是習(xí)慣上指由呼吸道傳播并能引起呼吸道感染的病毒總稱。1．

MP-IgM(肺炎支原體抗體IgM)MP通過呼吸道傳播引起原發(fā)性非典型肺炎（肺炎病歷10-20%），可并發(fā)鼻竇炎、皮炎、心包炎、心肌炎等，檢出MP-IgM陽性可判斷進期有的感染。2．

CP-IgM(肺炎衣支體抗體IgM)CP是一類介于細菌和病毒之間的微生物，傳播途徑主要是呼吸道，可引起肺炎有時還侵犯心臟、心包、腦膜、肝臟等部位，檢出CP-IgM陽性可判斷進期有CP的感染。3/14/202317免疫指標與臨床疾病3．

EBV-IgM(EB病毒抗體IgM)EBV是傳染性單核細胞增多癥的病原體，主要通過唾液傳播，EBV對兒童及青少年易感，陽性見于兒童期扁桃體炎和炎頰炎偶發(fā)的病歷，EBV偶發(fā)波及中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝炎，EBV與非洲兒童惡性淋巴瘤和鼻煙癌密切相關(guān)。4．

CBV-IgM(柯薩奇病毒抗體IgM)CBV可經(jīng)口或呼吸道侵入人體，在局部繁殖，通過病毒血癥擴散，除局部癥狀外可產(chǎn)生一系列綜合癥，如感冒、急性心肌炎、心包炎、無菌性腦膜炎、皰疹性咽炎、皮炎、肝炎等疾病。3/14/202318免疫指標與臨床疾病5．

ADV-IgM(腺病毒抗體IgM)ADV從脾體細胞分離而得名，能引起呼吸道和眼部的疾患，急性病為發(fā)熱、咽炎、咳漱，常有角、結(jié)膜炎、鼻炎、氣管炎、非典型肺炎等，并伴有全身癥狀，檢出ADV-IgM陽性可判斷進期有ADV的感染。6．

RSV-IgM(合胞病毒抗體IgM)RSV是引起嬰幼兒下呼吸道感染的病原體，也是肺炎和支氣管炎的病因，成年多表現(xiàn)發(fā)熱性感冒，老年人可使氣管炎和肺氣腫加重，檢出RSV-IgM陽性可判斷進期有RSV的感染。3/14/202319應(yīng)用抗原抗體結(jié)合原理檢測的項目外裴氏（Weil-Felix）反應(yīng)變形桿菌OX19與斑疹傷寒病原體有共同抗原變形桿菌OXk與恙蟲病病原體有共同抗原變形桿菌OX2與落磯山斑疹熱病原體有共同抗原診斷與鑒別診斷立克次氏體?。ǜ邿岬纫幌盗邪Y狀）感染性疾病檢查項目：Uu、CT、NG、USR、TPHA、HIV3/14/202321抗鏈球溶血素O(ASO)A群溶血性鏈球菌的代謝產(chǎn)物刺激機體產(chǎn)生的抗體。ASO升高見于A群溶血性鏈球菌感染及感染后免疫反應(yīng)所致的疾病，如：感染性心內(nèi)膜炎、扁桃體炎、風(fēng)濕熱、鏈球菌感染后急性腎小球腎炎。ASO在溶血性鏈球菌感染后一周開始升高，4～6周達高峰，并持續(xù)數(shù)月，故ASO增高提示曾有溶血性鏈球菌感染，但不一定是近期感染。鏈球菌感染后ASO動態(tài)升高，結(jié)合CRP升高及血沉陽性，有利于風(fēng)濕熱的診斷。高膽固醇血癥、巨球蛋白血癥、多發(fā)行骨髓瘤患者，ASO也可升高。3/14/202322類風(fēng)濕因子(RF)RF是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，RF可分為IgM、IgG、IgA、IgE四型。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者的陽性率為70％～80％，其中尤其以病變廣泛、病情嚴重、病程長、活動期及有關(guān)節(jié)外病變者的陽性率高、滴度高并長久存在。除類風(fēng)濕外，ＲＦ還見于正常人和其他疾病，例如正常人，尤其老年人，陽性率占５％－１０％；各種感染性疾病如乙肝、結(jié)核病、亞急性細菌性心內(nèi)膜炎和慢性支氣管炎等；結(jié)締組織病如紅斑狼瘡、干燥綜合征、皮肌炎、血管炎、硬皮病、預(yù)防接種后以及某些惡性疾病。在這些疾病中，ＲＦ的陽性率可達１０％－７０％。因此，在RA的診斷上，一般認為RF只有參考價值而無特異性診斷價值。3/14/202323免疫球蛋白及亞類其濃度在不同年齡段有所差異，在某些疾病情況下，這些指標的濃度將出現(xiàn)升高或降低，從而具有疾病診斷價值。IgG：正常情況下，臍血7.6～17g／L，新生兒7.0～14.8g／L，0.5～6月3～10.0g／L，6月～2歲5～12g／L，2～6歲5～13g／L，6～12歲7～16.5g／L，12～16歲7～15.5g／L，成人6～16g／L。在慢性肝病，亞急性或慢性感染，結(jié)締組織疾病，ＩｇＧ骨髓瘤，無癥狀性單克?。桑纾遣〉龋霈F(xiàn)增高；在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥，混合性免疫缺陷綜合癥，選擇性ＩｇＧ缺乏癥，蛋白丟失性腸病，腎病綜合癥，強直性肌營養(yǎng)不良，免疫抑制劑治療等降低。

3/14/202325免疫球蛋白及亞類IgA：正常情況下，臍血0～50mg／L，新生兒0～22mg／L，0.5～6月3～820mg／L，7月～2歲140～1080mg／L，2～6歲230～1900mg／L，6～12歲290～2700mg／L，12～16歲810～2320mg／L，成人760～3900mg／L。在慢性肝病，亞急性或慢性感染性疾?。ㄈ缃Y(jié)核、真菌感染等），自身免疫性疾?。ㄈ纾樱蹋拧㈩愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎），囊性纖維化，家族性嗜中性粒細胞減少癥，乳腺癌，ＩｇＡ腎病，ＩｇＡ骨髓瘤等情況下增高；在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥，免疫缺陷病，選擇性ＩｇＡ缺乏癥，無γ－球蛋白血癥，蛋白丟失性腸病，燒傷等?？梗桑纾量贵w現(xiàn)象，免疫抑制劑治療，妊娠后期等情況下降低。

3/14/202326補體C3和C4正常情況下，C3(β1C-球蛋白)800～1550mg／L，C4(β1E-球蛋白)130～370mg／L，血液補體含量與活度在許多病理情況下都會發(fā)生變化。所以，臨床上應(yīng)動態(tài)觀察補體水平的變化。補體含量下降并不一定代表免疫功能障礙或免疫缺陷，因為在缺血、凝固性壞死和中毒性壞死時，組織能釋放較多的蛋白分解酶，導(dǎo)致補體溶血活度和補體組分的下降。血補體濃度升高：見于各種炎癥性疾病及阻塞性黃疸，急性心肌梗塞，潰瘍性結(jié)腸炎，糖尿病，急性痛風(fēng)，急性和急性甲狀腺炎，急性風(fēng)濕熱，皮肌炎，多發(fā)性肌炎，混合性結(jié)締組織病，結(jié)節(jié)性動脈周圍炎等。3/14/202329一腫瘤標志物的簡介（一）腫瘤標志物概念3/14/202330

所謂腫瘤標志物(tumormarker，TM)，是指由腫瘤組織產(chǎn)生的存在于腫瘤組織本身，或分泌至血液或其他體液，或因腫瘤組織刺激，由宿主細胞產(chǎn)生而含量明顯高于正常參考值的一類物質(zhì)。3/14/202331（二）腫瘤標志物的分類腫瘤胚胎性抗原標志物該類蛋白質(zhì)即癌變時因返祖現(xiàn)象的出現(xiàn)，而產(chǎn)生的腫瘤標志物。例：甲胎蛋白(AFP）癌胚抗原(CEA)糖類抗原標志物該類物質(zhì)是腫瘤細胞表面的抗原物質(zhì)，或腫瘤細胞所分泌的物質(zhì)。該類標志物又可分為兩類1，糖類高分子粘蛋白抗原例：癌抗原CA125癌抗原CAl5-33/14/2023322，血型類抗原例：癌抗原CAl9-9、癌抗原CA50酶類標志物例：前列腺特異性抗原(prostatespecificantigen，PSA)神經(jīng)原特異性烯醇化酶(neuron·specificenolase，NSE)激素類標志物例：人絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonagotropin，HCG)人胎盤催乳素(PL)

3/14/202333其它蛋白質(zhì)類標志物例：?2-微球蛋白(?2-microglobulin，?2-MG)血清鐵蛋白(SerumFerritin，SF)

3/14/202334（三）腫瘤標志物的臨床應(yīng)用

1.甲胎蛋白（AFP）原發(fā)性肝癌的診斷急慢性肝炎和肝硬化的鑒別診斷先天性胎兒畸形診斷惡性畸胎瘤的診斷

3/14/2023352.癌胚抗原(CEA)胃腸道等空腔臟器腫瘤診斷。肺癌、乳腺癌、卵巢癌也升高，大多顯示為腫瘤浸潤，70%為轉(zhuǎn)移性癌。腫瘤手術(shù)評價。動態(tài)監(jiān)測提示腫瘤預(yù)后。連續(xù)隨訪監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)。3/14/2023363.糖類抗原19-9（CA19-9）

CA19-9是腫瘤細胞膜上的糖脂質(zhì)，因由鼠與骨髓瘤雜交制備的116NS19-9單克隆抗體識別而命名，是一種異質(zhì)性的高分子量粘糖蛋白。在消化道腺癌中明顯升高，又稱胃腸癌抗原。胰腺癌、膽管細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結(jié)直腸癌的診斷。術(shù)前水平與預(yù)后有關(guān)。監(jiān)測病情的進展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。急性胰腺炎、膽汁淤積性膽管炎、急性肝炎、肝硬化短暫的升高。

3/14/2023374.糖類抗原50（CA50）CA50是由單抗C-50識別的一種糖類抗原，其抗原決定簇存在于糖脂和高分子糖蛋白中。胰腺癌、膽囊癌、肝癌、結(jié)直腸癌的診斷。卵巢癌、子宮癌的診斷。監(jiān)測病情的進展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。3/14/2023385.糖類抗原242（CA242）CA242是由單抗C-242識別的一種糖類抗原。胰腺癌、膽道癌、胃癌、結(jié)直腸癌可增高。3/14/2023396.糖類抗原125（CA125）CA125因從人卵巢漿液囊泡腺癌抗原可被單克隆抗體OC125識別而命名，是一種卵巢癌相關(guān)抗原。卵巢癌的早期篩查，比臨床診斷至少提前一年。連續(xù)監(jiān)測鑒別腫瘤良性還是惡性生長。判斷病理類型及臨床分期：漿液性卵巢上皮癌陽性率89%，粘液性癌16%，卵巢內(nèi)胚竇瘤不升高。療效評價，動態(tài)監(jiān)測復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。妊娠頭3個月、月經(jīng)期、子宮內(nèi)膜炎可升高，注意鑒別。3/14/2023407.糖類抗原15-3（CA15-3）

用人乳脂球上分離的糖蛋白MAM-6和肝轉(zhuǎn)移的乳腺癌細胞免疫小鼠，制成針對相應(yīng)抗原的單克隆抗體：115-D8和DF-3，這兩株抗體識別的抗原是上皮細胞上的一種粘蛋白MUC-1的唾液酸糖抗原，該抗原命名為CA15-3。乳腺癌診斷，Ⅰ期水平正常，Ⅱ、Ⅲ期升高。術(shù)前水平與預(yù)后相關(guān)。治療后動態(tài)監(jiān)測提示體內(nèi)殘余腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)。慢性肝炎、結(jié)核、自身免疫病可輕度升高。3/14/2023418.人絨毛膜促性腺激素（HCG）

是由胎盤的滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白激素。正常妊娠檢測。檢測異位妊娠。正確指導(dǎo)人工流產(chǎn)。檢測亞臨床自然流產(chǎn)。葡萄胎、絨癌的診斷及動態(tài)監(jiān)測治療和預(yù)后。3/14/2023429.神經(jīng)原特異烯醇化酶（NSE）

在神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)的高酸蛋白，僅存在于神經(jīng)組織中。肺小細胞性肺癌（SCLC）的診斷，SCLC患者陽性率70%，其他組織型肺癌僅10-20%。神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤血NSE升高。腦組織機械性損傷時，腦脊液NSE升高，升高幅度與速度與損傷程度及部位密切相關(guān)。部分腦梗塞、一過性腦缺血病人腦脊液NSE升高。3/14/20234310.細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）鱗癌型肺癌病人血中明顯升高（50-701%）。結(jié)腸癌、胃癌僅輕度升高。非腫瘤性疾病一般不升高。

3/14/202344

11.前列腺特異抗原（PSA）

PSA是由人前列腺上皮細胞合成并分泌至精漿中的一種糖蛋白。前列腺癌時，PSA升高。早期診斷可提前4年。前列腺炎、前列腺按摩、前列腺活檢、膀胱鏡操作、直腸指檢PSA也升高。fPSA/tPSA比值>25%前列腺癌可能性?。?lt;10%），fPSA/tPSA比值<10%前列腺癌可能性增加（80%）。連續(xù)觀察PSA上升速度，若>0.75ng/mL/年，前列腺癌可能性增加。3/14/20234512.血清鐵蛋白（SF）

是一種儲鐵蛋白。SF升高見于肺癌、胰癌、白血病、肝臟疾病。SF減低見于缺鐵性貧血、大量失血、長期腹瀉。3/14/202346部分腫瘤標志物的陽性順序項目名稱主診陽性順序CA50廣譜胰、肝、卵巢、腸、胃、肺CA125卵巢卵巢、胰、肺、乳、腸CA15-3乳房乳房CA19-9消化道胰、膽、胃、腸MGAg/CA724胃胃、腸、肺、乳SCC/CYFRA211鱗癌肺、食道、上顎、宮頸、皮膚

3/14/202347腫瘤標志物檢測圖譜十

腫瘤標志物檢測圖譜癌腫部位腫瘤標志物選擇順序肝AFPCEASF結(jié)直腸CEACA19-9CA242CA50胰腺CA19-9CA242CEACA50胃MGAgCA724CEACA19-9食道SCC肺NSECYFRA21-1SCCCEA乳房CA15-3CA125CEA卵巢CA125β-HCGCEAAFP子宮SCCSFβ-HCG前列腺fPSAPSA甲狀腺HTGCEACA19-9血液病SFβ2-MG3/14/202348自身抗體的分類及命名

1、以抗體在細胞或組織中存在的位置進行命名：ANA、AMA、LKM等。2、以靶細胞或靶組織進行命名：抗骨骼肌抗體、抗胰島細胞抗體等。3、以首先被檢測到該抗體的患者名字的縮寫進行命名：抗Sm、抗Ro、抗La等。4、以相關(guān)疾病的名字的縮寫進行命名：抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B等。5、以抗原的化學(xué)性質(zhì)進行分類命名：抗RNP、抗ss-DNA、抗dsDNA等。

3/14/202349自身免疫性疾病項目免疫全項：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA、IgC3、C4、CR