急性眼刺激試驗

急性毒性試驗動物急性毒性試驗研究動物一次或24小時內(nèi)多次給予受試物后，一定時間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。擬用于人體的藥物通常需要進行動物急性毒性試驗。要求采用嚙齒類或非嚙齒類兩種動物。通常為小鼠或大鼠采用經(jīng)口、吸入或經(jīng)皮染毒途徑。急性毒性試驗主要測定半數(shù)致死量（濃度），觀察急性中毒表現(xiàn)，經(jīng)皮膚吸收能力以及對皮膚、粘膜和眼有無局部刺激作用等，急性毒性試驗處在藥物毒理研究的早期階段，對闡明藥物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意義。急性毒性試驗所獲得的信息對長期毒性試驗劑量的設(shè)計和某些藥物I期臨床試驗起始劑量的選擇具有重要參考價值，并能提供一些與人類藥物過量急性中毒相關(guān)的信息。急性眼睛刺激性/眼睛腐蝕性試驗（巴豆油或甲醛）定義：眼睛刺激性：指眼球表面接觸受試樣品后產(chǎn)生的可逆性炎性變化。眼睛腐蝕性：指眼球表面接觸受試樣品后引起的不可逆性組織損傷試驗基本原則：1受試樣品以一次劑量滴入每只實驗動物的一側(cè)眼睛結(jié)膜囊內(nèi)，以未作處理的另一側(cè)眼睛作為自身對照；2在規(guī)定的時間間隔內(nèi)，觀察對動物眼睛的刺激和腐蝕作用程度并評分，以此評價受試樣品對眼睛的刺激作用。觀察時間應(yīng)能足以評價刺激效應(yīng)的可逆性和不可逆性。觀察時間最少72h，但一般不超過21d；3當(dāng)動物出現(xiàn)嚴(yán)重和持久的痛苦跡象時，以適當(dāng)?shù)姆绞綄游锾幩溃?強酸或強堿物質(zhì)如pHW2或pHN11.5，由于其可預(yù)見的腐蝕特性，不必做本試驗；5已在皮膚試驗中證實具有腐蝕或嚴(yán)重刺激毒性的物質(zhì)不必進行眼刺激試驗，可以推測該物質(zhì)對眼睛將會引起相似的嚴(yán)重結(jié)果；6在充分并公認(rèn)的體外試驗結(jié)果中確定可能產(chǎn)生刺激性或腐蝕性的物質(zhì)不必進行體內(nèi)試驗。目的：檢測外來化合物對實驗動物眼和粘膜得原發(fā)性刺激和腐蝕作用的急性試驗，為人類眼和粘膜接觸該受試物的潛在危害提供資料。實驗動物：首選成年白色家兔（如果使用其它的哺乳動物做試驗，試驗者應(yīng)提供選擇的依據(jù)【應(yīng)選擇與人類皮膚、粘膜反應(yīng)比較相近的動物，常用的動物有家兔、豚鼠。動物種屬的選擇應(yīng)依據(jù)要觀察的指標(biāo)和模型的合理性。通常一個試驗類型選擇一種動物進行評價?！浚?，體重2?3kg，至少3只（如果受試樣品的顯著效應(yīng)是可預(yù)見的，可以考慮用一只動物。如果用一只動物試驗得出的結(jié)果提示受試樣品有嚴(yán)重的刺激性和腐蝕性，則不必進行進一步的試驗。如果結(jié)果相反，則至少需要3只家兔。有時，在增加動物的進一步試驗中應(yīng)該適當(dāng)?shù)年U明可疑反應(yīng)。）。試驗前動物要在動物實驗室環(huán)境中至少適應(yīng)3d時間。試驗前24h，要對實驗動物的兩只眼睛進行常規(guī)檢查。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷或結(jié)膜損傷的動物不能用于試驗。受試藥物：對于液態(tài)受試樣品，一般不需稀釋，可直接使用原液，染毒量為0.5ml。若受試樣品為固態(tài)或顆粒狀，應(yīng)將其研磨成細(xì)粉狀，過200目篩，染毒量應(yīng)為100mg。氣溶膠產(chǎn)品需噴至容器中，收集其液體再使用。對揮發(fā)性物質(zhì)，劑量可以通過使用前后稱量容器質(zhì)量進行估計。操作程序：（1）固定兔子，輕輕拉開兔子右眼眼睛的下眼瞼，給予受試樣品0.5ml（100mg）滴入（或放入）結(jié)膜囊中，使上、下眼簾被動閉合30s，以防止受試樣品丟失，未處理的另一側(cè)眼睛作為自身對照或滴入溶媒。（2）（正常操作：滴入受試樣品24h內(nèi)不沖洗眼睛，如果認(rèn)為必要，在24h時可進行沖洗。如果受試樣品有明顯的刺激征象，另選3只動物進行沖洗試驗。在滴入受試樣品30s后，用生理鹽水沖洗5min，水的流量和流速都不應(yīng)導(dǎo)致眼損傷。）滴入30s后用生理鹽水沖洗。在滴入受試樣品后的第10min、0.5h、1h、1.5h（正常實驗方法：1h,24h,48h，72h和4d,7d）對眼睛進行檢查，如果72h時未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，可終止試驗。如果發(fā)現(xiàn)累及角膜或有其它眼刺激作用，7d內(nèi)不恢復(fù)者，為確定該損害的可逆性或不可逆性需延長觀察時間，一般不超過21d。除了對角膜、虹膜、結(jié)膜進行觀察外，其它損害效應(yīng)都應(yīng)記錄并報告。在24h觀察和記錄結(jié)束后，可使用2%熒光素鈉溶液或裂隙燈、放大鏡檢查角膜及虹膜變化。在每次檢查中均應(yīng)按表1記錄眼的刺激反應(yīng)，并按表2進行眼刺激強度評價。評價規(guī)定：按表2-13對家兔眼角膜、虹膜和結(jié)膜的急性刺激反應(yīng)進行評分，并分別計算每只動物在三個不同觀察時間（本次試驗：0.5h、1h、1.5h）（正常實驗方法：24h、48h和72h）角膜損害、虹膜損害、結(jié)膜充血和結(jié)膜水腫四方面的“平均評分”（本次試驗：即每只動物的0.5h、1h、1.5h評分之和除以觀察數(shù)3）（正常實驗方法：即每只動物的24h、48h和72h評分之和除以觀察數(shù)3）。分別以動物眼角膜、虹膜和結(jié)膜充血、水腫的平均評分和恢復(fù)時間進行，按表2-14、表2-15眼刺激反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)判定受試物對眼睛的刺激強度鑒定報告：除一般鑒定報告的內(nèi)容外，還應(yīng)包括以下方面：1表格記錄每只動物每個時間點（本次試驗：10min、0.5h、1h、1.5h）（正常實驗方法：如1h,24h,48h，72h和4d,7d）的刺激反應(yīng)；2具體描述除眼部以外的其它作用；3刺激/腐蝕程度和性質(zhì)的描述；4描述在各觀察時點積分時的檢查方法（如裂隙燈、生物顯微鏡、熒光素染色）；5結(jié)論試驗結(jié)果的解釋：急性眼刺激試驗結(jié)果從動物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其它品系動物進行試驗時也得到類似結(jié)果，則會增加從動物外推到人的可靠性。

表眼刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)觀察項目刺激反應(yīng)判斷符號分值無渾濁0備瞄渾汕（IJM散在或彌漫渾濁、虹膜清晰可見+1角膜渾濁（以最札宓立心方頭屐、半透明區(qū)易分辨、虹膜模糊不清++2致密部位為準(zhǔn)）出現(xiàn)灰色透明區(qū)、虹膜細(xì)節(jié)不清、瞳孔大小勉強看清+++3角膜不透明、由于渾濁、虹膜無法辨認(rèn)++++4正常0褶皺明顯加深、充血、腫脹、角膜周圍輕度充血、瞳虹膜孔對光仍有反應(yīng)+1出血、肉眼可見壞死、對光無反應(yīng)（或出現(xiàn)其中一種++2反應(yīng)）血管正常0結(jié)膜充血（指瞼血管充血呈鮮紅色+1結(jié)膜、球結(jié)膜部血管充血呈深紅色、血管不易分辨++2位）彌漫性充血呈紫紅色+++3無水腫0輕微水腫（包括瞬膜）+1水腫明顯水腫、伴有部分眼瞼外翻++2水腫至眼瞼近半閉合+++3