實驗直接抗人球蛋白實驗

關于實驗直接抗人球蛋白實驗第一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一第一部分直接抗人球蛋白試驗原理第二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一直接抗人球蛋白試驗原理：

直接抗人球蛋白試驗是檢測紅細胞在體內是否被不完全抗體致敏的實驗。若紅細胞在體內已被不完全抗體所致敏，加入的抗人球蛋白則可與紅細胞表面不完全抗體結合使紅細胞相互連接起來出現凝集現象。

——直接抗人球蛋白試驗陽性

第三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一

致敏紅細胞

抗人球蛋白直接抗人球蛋白試驗第四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一抗球蛋白試劑通常有三種：多特異性抗球蛋白試劑，簡稱多抗，多抗包括了抗-IgG和抗-C3兩種成分，在直抗試驗中常常作為初篩試劑使用。單特異性抗-IgG試劑，簡稱抗-IgG單特異性抗-C3試劑，簡稱抗-C3在直抗試驗中一旦出現陽性結果，通常需要抗-IgG和抗-C3進一步分析。

第五頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一

直接抗人球蛋白試驗臨床意義

檢測體內紅細胞是否被不完全抗體或補體致敏,可用于：

1）新生兒溶血病胎（嬰）兒致敏紅細胞檢測

2）自身免疫溶血性貧血的診斷

3）溶血性輸血反應的研究

第六頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一

第二部分直接抗人球蛋白試驗操作第七頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一直接抗人球蛋白試驗難點：難以獲取致敏紅細胞標本？解決方案：試劑紅細胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)

第八頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一受檢標本紅細胞懸液配制：1.抗凝全血2ml（與抗凝劑混勻）

1000g離心3min分離上層血漿

2.壓積紅細胞的制備：NS洗滌三次，注意離心速度及時間（1000g離心1min）

（注意操作輕柔，防溶血?。?.取壓積紅細胞配成5％的紅細胞懸液（1d壓積紅細胞＋19dNS）第九頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一

人工制備IgG型致敏紅細胞（陽性對照）：1、采集3人份O型RhD陽性抗凝全血，1000g離心3min，分離血漿；紅細胞經生理鹽水（NS）3次洗滌后，取3人份的壓積紅細胞各5滴混勻，備用；2、用一次性吸管取壓積紅細胞3滴于試管中，加入2倍體積的單克隆IgG抗D血清，混勻，置于37℃孵育45min；3、孵育結束取出試管，1000g離心2min，棄上清，用2倍體積的NS洗滌3次（1000g離心1min），最后加入NS配制成約5％的致敏紅細胞懸液（1d壓積紅細胞＋19dNS），備用第十頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一

未致敏紅細胞（陰性對照）：取3滴3人份混合壓積紅細胞，加入57滴NS混勻，備用。（無須單克隆IgG抗D血清致敏）第十一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一標記3支試管，分別為待檢管、陰性對照和陽性對照。按下表加入各反應物：反應物待檢管陰性對照陽性對照5％待檢標本RBC15％陰性對照RBC15％陽性對照RBC1多特異性抗球蛋白試劑111受檢者標本檢測第十二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一混勻，1000g離心15s，觀察凝集反應，記錄結果。如果使用的是多特異性抗球蛋白試劑或抗C3抗球蛋白試劑，將未出現反應的試管置室溫孵育5min，再離心，觀察凝集。實驗結果陰性時，應按照試劑說明書要求驗證陰性結果的正確性。加1滴IgG致敏5％紅細胞懸液于未出現凝集的試管中，1000g離心15s，觀察凝集，記錄結果。

受檢者標本檢測第十三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一如陽性對照凝集，陰性對照不凝集，受檢RBC凝集者直接抗球蛋白試驗為陽性，不凝集者為陰性。結果判定第十四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一標本采集后應盡快進行試驗，試驗延遲或中途停止可能使抗體從細胞上釋放出來。待檢紅細胞一定要用鹽水洗滌至少3次，除去紅細胞懸液中混雜的血清蛋白，以防止假陰性結果。離心時間和離心力要按標準操作。若果要了解在體內致敏紅細胞的免疫球蛋白類型，則可分別以抗IgG、抗IgM或抗C3單特異性抗球蛋白試劑進行試驗。紅細胞上若抗體吸附較少