微生物培養(yǎng)技術(shù)

關(guān)于微生物培養(yǎng)技術(shù)第一頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一微生物非細胞生物：病毒原核生物：細菌、放線菌、支原體、立克次氏體真核生物：真菌（酵母菌、霉菌）第二頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。第三頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一細菌的營養(yǎng)類型

根據(jù)細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)型:異養(yǎng)型:腐生菌寄生菌光合自養(yǎng)型:光合細菌化能自養(yǎng)型:硝化細菌第四頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一一、微生物的分離和純培養(yǎng)（3項技術(shù)1個案例）

（一）培養(yǎng)基配制技術(shù)（二）無菌技術(shù)（三）接種技術(shù)

案例：大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)

第五頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一1、培養(yǎng)基定義：（課本第2頁）2、營養(yǎng)構(gòu)成：環(huán)境條件：pH、氧氣、二氧化碳、滲透壓等

（一）培養(yǎng)基配制技術(shù)營養(yǎng)成分：水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子第六頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等半固體培養(yǎng)基可觀察微生物的運動液體培養(yǎng)基常用于發(fā)酵工業(yè)。（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。3.培養(yǎng)基的分類第七頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一固體培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基（課本第2頁）斜面培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基中需加入凝固劑，如瓊脂第八頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一半固體培養(yǎng)基無運動有運動

半固體培養(yǎng)基中也需要加入凝固劑瓊脂，但加入量少于固體培養(yǎng)基。第九頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一液體培養(yǎng)基表面生長均勻混濁生長沉淀生長第十頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一選擇培養(yǎng)基（2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:抑制細菌和放線菌的生長，分離酵母菌、霉菌等真菌。

不加氮源的無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌定義（課本第7頁）舉例：加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:分離金黃色葡萄球菌第十一頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一鑒別培養(yǎng)基

根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品配制而成的，用以鑒別不同種類的微生物。

例如：在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍，可以用來鑒別大腸桿菌。如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物就與伊紅和美藍結(jié)合，使菌落呈藍紫色，并帶有金屬光澤。

(課本15頁)第十二頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一

用化學成分已知的化學物質(zhì)配成的，因成分明確，常用于分類、鑒定等合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。合成培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基：（3）按成分分：合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基

用化學成分不明確的天然物質(zhì)配成的，如血清、組織提取液等第十三頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一稱量：準確地稱取各種成分。牛肉膏比較黏稠，可以用玻棒挑取，放在稱量紙上稱量。牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，稱量時動作要迅速，稱后要及時蓋上瓶蓋。4.培養(yǎng)基的配制步驟（第8頁）（1）.計算:根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例，計算配制100mL的培養(yǎng)基時，各種成分的用量。（參考課本83頁培養(yǎng)基配方）（以牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基為例）第十四頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（2）.溶化：①加水加熱熔化牛肉膏

將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯加入少量的水，加熱。當牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙。②加入蛋白胨和氯化鈉，用玻棒攪拌，使其溶解；③加入瓊脂；④用蒸餾水定容到100mL。

整個過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。（3）.調(diào)節(jié)pH（4）.分裝、包扎（5）.滅菌（6）倒平板第十五頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。倒平板①在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰；③左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋。④待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。第十六頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一倒平板技術(shù)第十七頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（二）無菌技術(shù)

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。１、消毒（1）定義：使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）

第十八頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6minB、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min

或80℃下煮15minC、化學藥劑消毒法:用酒精進行皮膚消毒;

氯氣消毒水源D、射線消毒法（2）消毒的方法：第十九頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（1）定義：使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2、滅菌（2）滅菌的方法：A、灼燒滅菌第二十頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一C、高壓蒸汽滅菌：

100kPa、121℃下維持

15-30min.B、干熱滅菌：

160-170℃下加熱1-2h。第二十一頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（三）接種技術(shù)（課本第2頁）1.定義2.平板培養(yǎng)基上接種方法平板劃線法、稀釋涂布平板法、稀釋混合平板法

平板劃線的操作方法連續(xù)劃線法交叉劃線法第二十二頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一第二十三頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一稀釋涂布平板法

將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。

在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。第二十四頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一第二十五頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一第二十六頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一1、微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序（1）器具的滅菌（2）培養(yǎng)基的配制（3）培養(yǎng)基的滅菌（4）倒平板（5）微生物接種（6）恒溫箱中培養(yǎng)（7）菌種的保存（四）案例：大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)第二十七頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一

（1）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2、大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)步驟第二十八頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（2)配制培養(yǎng)基：計算稱量；熔化；調(diào)PH；分裝；滅菌；倒平板（3）接種：平板劃線法；稀釋涂布平板法。（4）培養(yǎng)：倒置，37℃恒溫箱，12和24h。（5）純化培養(yǎng)：倒置，37℃恒溫箱，24h。（6）菌種保藏：臨時、長期保存法。第二十九頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一菌種的保存

1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。

2、長期保存：甘油冷凍管藏法-20℃冷凍箱保存第三十頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一二、培養(yǎng)基對微生物的選擇作用第三十一頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（一）、基礎(chǔ)知識1、纖維素與纖維素酶【案例】分解纖維素的微生物的分離纖維素是一種多糖纖維素酶是一種復合酶纖維素纖維二糖葡萄糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶第三十二頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（二）、篩選1、方法：剛果紅染色法原理：剛果紅（CR）可以與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現(xiàn)

以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。第三十三頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一常用的剛果紅染色法有兩種方法一：在長出菌落的培養(yǎng)基上，覆蓋1mg/mL的CR

溶液，10—15min后，倒去CR溶液，加入

1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液。方法二：配制質(zhì)量濃度為10mg/mL的CR溶液，滅菌后，按照每200mL培養(yǎng)基加入1mL的比例加入

CR溶液，混勻后倒平板。一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應，另一種是在倒平板時就加入剛果紅第三十四頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（1）土壤取樣（2）選擇培養(yǎng)（可省略）

（3）梯度稀釋（4）涂布培養(yǎng)

（5）挑選產(chǎn)生透明圈的菌落（6）微生物培養(yǎng)（純培養(yǎng)）（三）、實驗流程第三十五頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一三、測定微生物的數(shù)量第三十六頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（一）測定微生物數(shù)量的方法1.直接計數(shù)法最常用：顯微鏡直接計數(shù)法（方法、優(yōu)點、缺點、適用條件）一、基礎(chǔ)知識第三十七頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一2、間接計數(shù)法：最常用的是稀釋平板計數(shù)法稀釋平板法稀釋涂布平板法稀釋混合平板法第三十八頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一（一）測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目配制ＥＭＢ培養(yǎng)基倒平板接種（濾膜法）培養(yǎng)觀察記錄二、實踐案例第三十九頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一1、土壤取樣（二）土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)2、配制培養(yǎng)基尿素瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基第四十頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一第四十一頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一3、樣品稀釋細菌：一般選用104

、105

、106倍的稀釋液進行培養(yǎng)放線菌：一般選用103

、104

、105倍的稀釋液真菌：一般選用102

、103、104倍的稀釋液4、取樣及平板接種（涂布平板或混合平板）第四十二頁，共四十五頁，編輯于2023年，星期一

在以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅，就可以準確的鑒定該種細菌能夠分解尿素。5、培養(yǎng)與觀察：細菌：30～370C的溫度下培養(yǎng)1～2d；放線菌：25～280C的溫度下培養(yǎng)5～7d；霉菌：25～280C的