β-木糖苷酶試劑盒說明書

QQ1019057849QQ1019057849β-木糖苷酶（β-xylosidase）測(cè)定試劑盒說明書分光光度法50管/24樣注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義：β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理：β-木糖苷酶催化對(duì)硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚，對(duì)硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰，測(cè)定405nm光吸收增加速率，可計(jì)算β-木糖苷酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。試劑一：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提?。航M織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min，取上清待測(cè)。細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表：對(duì)照管測(cè)定管酶液（μL）200200試劑一（μL）50試劑二（μL）400350混勻，45℃水浴20min試劑三（μL）400400混勻，靜置5min，蒸餾水調(diào)零，405nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。β-木糖苷酶活性計(jì)算公式：標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。1、按蛋白濃度計(jì)算酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每毫克蛋白1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。β-木糖苷酶活性（nmol/min/mgprot）=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反總÷（V樣×Cpr）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)÷Cpr2、按樣本質(zhì)量計(jì)算：酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每克樣品1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。β-木糖苷酶活性（nmol/min/g鮮重）=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)÷W3.按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每104個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反總÷V樣×V樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）（4）按液體體積計(jì)算酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每毫升液體1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。β-木糖苷酶活性（nmol/min/mL）=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反總÷V樣÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)V樣總：加入提取液體積，1mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.6mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；1000