無菌檢查方法的驗證

無菌檢查方法的驗證和準確的基礎,因此各個主要國家的GMP或藥典都對無菌檢查方法的驗證提出了嚴格的要求，2010GMP驗證要求與方法無菌檢查方法驗證一般分為前驗證和再驗證兩種。前驗證，也稱預驗證，指在無菌分析方法正式使用前，按照預定驗證方案進行的驗證。如果沒有充分的理由,任何檢查方法必須進行前驗證。預處理方式、檢查過程、培養(yǎng)條件等均不影響樣品中微生物的生長。這里,驗證的重點環(huán)節(jié)包括：前處理方法直接影響后續(xù)步驟的效果和重現(xiàn)性，應是驗證的重點.供試品中抑菌活性的去除是當前驗證工作的重點具體的驗證方法如下：菌種的選擇無菌檢查方法驗證中通常選擇以下6501金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26[CMCC（B）64941］代表厭氧菌、大腸埃希菌［CMCC（B）44102］代表革蘭陰性菌、白色念珠菌［CMCC(F）98001]［CMCC(F）98003]代表霉菌。菌液的制備℃培養(yǎng)18~24h28℃培養(yǎng)24~480.91ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸23~28℃培養(yǎng)5~75ml0.05％(ml/ml)聚ft800.9方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%（ml/ml)聚ft800.9%無菌氯化鈉溶液1ml100cfu樣品的前處理即可，而不必像樣品日常檢測中按規(guī)定的容器數(shù)取樣。消除樣品抑菌性的方法稀釋，用直接接種法驗證，常用中性稀釋液或淋洗液。（。常用的消除樣品抑菌活性的方法如下：稀釋法：利用降低供試品的相對濃度，將樣品稀釋至最低抑菌濃度下進行。如：取規(guī)定量的樣品溶液至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內的樣品含量減少，至不含抑菌作用。薄膜過濾法：利用體積差異分離，通過薄膜過濾，微生物被截于濾膜無微生物生長。通常薄膜孔徑應不大于。45μm,直徑一般為50?mm，若采用其他直徑的濾供試液經(jīng)過濾膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100?ml?？倹_洗量不得超過1000ml?；瘜W中和法：利用化學（生物卵磷脂、聚ft-80β-內酰胺酶。強的中西藥制劑。其次按照以下要求制備3組樣品：樣品組：選擇以上適當?shù)姆椒ㄖ泻蜆悠?，加入少量驗證微生物（接種量少于100？cfu）.對照組:0。1%蛋白胨或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，加少量微生物(接種量少于100？cfu）。陽性對照組：將試驗菌株直接接種于培養(yǎng)基中（接種量少于100cfu）。最后結果分析如下:樣品組與對照組微生物生長數(shù)量相似為考查驗證方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，驗證至少需3個不同批次的同類樣品，分別進行3次驗證試驗。無菌檢查方法驗證試驗設計洗,在最后一次的沖洗液中加入小于100cfu8管，分別接入100cfu24100？cfu211結果判斷新GMP檢查重點無菌檢查方法驗證的硬件是否具備及是否已經(jīng)進行了相關的確認情況等，智能集菌器、全封閉無菌試驗過濾培養(yǎng)器的型號、性能，濾膜是否符合規(guī)定等。無菌檢查中偏差的處理是否真的找到了根本原因新檢查并依據(jù)新的檢查結果放行產(chǎn)品。驗證的方法與無菌檢查操作規(guī)程和無菌檢查記錄是否完全一致檢查環(huán)境、試驗耗材均需與實際檢查操作規(guī)程及驗證過程完全相符。為了考查驗證方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，驗證時是否至少采用了3個不同批次的同類樣3使用新的濾膜或過濾器（不同廠家或批號、型號）是否重新進行樣品試驗組照組和陽性對照組的驗證確認。除非樣品不能采用過濾的方法(難溶解),企業(yè)是否采用全封閉的薄膜過濾法。菌液的保存條件和保存期限是否符合藥典的要求料。無菌檢查的注意事項培養(yǎng)基的適用性檢查包括培養(yǎng)基的無菌性檢查和培養(yǎng)基的靈敏度檢查。仍然容易忽略。大量的樣品；工作菌株的傳代次數(shù)不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌種變異的風險。這里“代”的定義是指,活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉種或傳代一次.（如檢查陽性菌液通過濾筒的實驗室菌種的處理和保存的程序應標準化，以盡可能減少菌種污染和變異。間不能太長。菌液制備后若在室溫下放置，應在2？h內使用，若保存在2～8℃，可在24?h內使用.黑