血型鑒定抗體篩選交叉合血

關(guān)于血型鑒定抗體篩選交叉合血第一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三實驗內(nèi)容血型鑒定抗體篩選交叉配血第二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三血型鑒定第三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三目的掌握紅細(xì)胞ABO血型及Rh血型鑒定第四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三原理ABO血型鑒定：根據(jù)紅細(xì)胞上有無A抗原或（和）B抗原，以及血清中有無抗A及抗B，可以將血型分為A型、B型、AB型、O型四種，利用紅細(xì)胞凝集實驗通過正定型、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。

Rh血型鑒定：IgM型鹽水抗D試劑能夠與D陽性紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中形成肉眼可見的凝集。

第五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三原理第六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三試劑

抗A及抗B血清（商品試劑）5%A型和B型紅細(xì)胞（試管法）10%A型和B型紅細(xì)胞（玻片法）IgM型鹽水抗D試劑標(biāo)本

抗凝靜脈血EDTA-K2

第七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三紅細(xì)胞ABO血型鑒定（試管法正定型）標(biāo)記兩支干凈的試管-A和-B在標(biāo)記為-A的試管中加1滴抗A試劑。在標(biāo)記為-B的試管中加1滴抗B試劑。在每個試管中各加入5%受檢者紅細(xì)胞懸液

(1份壓積紅細(xì)胞+19份0.9%鹽水)輕輕混勻，1000g離心1分鐘。檢查上清液是否有溶血。輕輕重懸細(xì)胞扣，檢查凝集。第八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三紅細(xì)胞ABO血型鑒定（試管法反定型）標(biāo)記兩支干凈的試管Ac和Bc每管加入2滴受檢者血清。在標(biāo)記Ac的試管中加入1滴5%A型試劑紅細(xì)胞。在標(biāo)記Bc的試管中加入1滴5%B型試劑紅細(xì)胞。輕輕混勻，1000g離心1分鐘。檢查上清有無溶血。輕輕重懸細(xì)胞扣，檢查凝集。判斷并記錄結(jié)果。第九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三紅細(xì)胞ABO血型鑒定（玻片法）在標(biāo)記的玻板上分別加一滴抗A、抗B。各加一滴10%受檢者紅細(xì)胞懸液

(1滴壓積紅細(xì)胞+9滴0.9%鹽水)輕輕混勻，室溫放置2-15分鐘。觀察并記錄結(jié)果：凝集為陽性結(jié)果，不凝集為陰性結(jié)果，對結(jié)果有懷疑，應(yīng)用試管法重新實驗。第十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三紅細(xì)胞Rh血型鑒定試管法標(biāo)記一支75×12mm的試管加入抗D血清1滴，加1滴5%的待檢細(xì)胞。輕輕混勻，1000g離心1分鐘，或3000r/min，15秒。檢查是否溶血，然后輕輕重懸細(xì)胞扣，檢查凝集玻片法在玻板上標(biāo)記待檢紅細(xì)胞編號。加入抗D血清1滴于標(biāo)記玻片中。將35－45%的待檢細(xì)胞1滴滴入玻片并混勻。室溫放置2分鐘左右觀察結(jié)果。第十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三結(jié)果判讀（ABO血型鑒定）正定型反定型血型抗A抗BA細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞--++-O+--+-A-++--B++---AB第十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三結(jié)果判讀（Rh血型鑒定）陽性對照陰性對照待檢細(xì)胞結(jié)果+-+++---第十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三報告方式

XXX型，Rh+/-第十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三注意事項玻片、試管都要標(biāo)記?。?！A及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對不能相混,不要依靠用染料顏色標(biāo)記血清。所用玻片、試管實驗前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清液面，一般先加血清，再加紅細(xì)胞懸液，便于核實是否漏加血清。離心時間、速度嚴(yán)格要求。要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時應(yīng)注意觀察凝集強度，有助于A、B亞型的發(fā)現(xiàn)，觀察后立即記錄。第十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三抗體篩選第十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三目的掌握抗體篩選的試驗方法第十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三鹽水試驗法白蛋白介質(zhì)法低離子強度介質(zhì)法（LISS）酶技術(shù)抗球蛋白試驗聚凝胺促凝技術(shù)PEG促凝技術(shù)第十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三原理抗人球蛋白法：IgG類抗體，由于其分子量小，與紅細(xì)胞結(jié)合以后在鹽水介質(zhì)中不發(fā)生肉眼可見的凝集，稱為不完全抗體。但在加入抗-IgG的抗體后，以其搭橋則可出現(xiàn)凝集。第十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三試劑

抗球蛋白試劑陽性對照血清陰性對照血清O型紅細(xì)胞生理鹽水標(biāo)本：抗凝靜脈血（EDTA-K2）第二十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三操作步驟在標(biāo)記好的試管中各加入兩滴血漿和一滴5%的O型紅細(xì)胞，混勻。于370C孵育一小時。用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞4-6次，完全傾盡末次洗滌鹽水。向得到的干細(xì)胞扣中加入1-2滴抗球蛋白試劑。1000rpm，離心1分鐘。檢查凝集并記錄結(jié)果。第二十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三結(jié)果判讀加入抗球蛋白試劑后，如紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集或溶血，則結(jié)果為陽性。加入抗球蛋白試劑后結(jié)果為陰性，而加入直抗陽性對照細(xì)胞后呈陽性反應(yīng)，則結(jié)果為陰性。如加入直抗陽性對照細(xì)胞后呈陰性反應(yīng)，則結(jié)果不可靠，必須重復(fù)檢測。

第二十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三操作步驟陽性對照管待檢管陰性對照管IgG型抗D1待檢血清2陰性對照血清25%O型試劑紅細(xì)胞111在標(biāo)記好的試管中按下表加入試劑及血清。第二十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三ABO血型鑒定不規(guī)則抗體篩選玻片法（正定型）試管法（正定型,反定型）鹽水法聚凝胺法抗人球法第二十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三微柱凝集試驗技術(shù)達(dá)亞美微量定型系統(tǒng)凝膠測試法基于生物化學(xué)凝膠過濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)，抗人球試驗時血細(xì)胞發(fā)生凝集。離心時凝集塊不能通過凝膠間隙而在凝膠上層，呈陽性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心時可通過凝膠間隙而在凝膠底部，呈陰性反應(yīng)。

第二十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三DiaMed卡法結(jié)果判讀4＋在凝膠柱頂端形成單一層凝集細(xì)胞。3＋凝集層主要位于凝膠柱上1/3。2＋凝集位于整個凝膠柱，底部僅有較少細(xì)胞。1＋凝集層位于凝膠柱下1/3。凝膠中細(xì)胞沒有凝集或溶血視為陰性。

第二十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三思考題1.紅細(xì)胞ABO血型鑒定正反定型不一致原因2.導(dǎo)致Rh血型鑒定出現(xiàn)假陽性和假陰性原因3.抗體篩選的臨床意義第二十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三交叉配血

CrossMatch第二十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三目的掌握交叉配血的試驗方法第二十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三原理鹽水法

檢查供受者之間有無ABO血型不合。用于抗體篩選陰性和不同血型骨髓移植患者的輸血。

第三十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三原理凝聚胺法

凝聚胺是一種高價陽離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間的距離減少，能引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集。如果是抗體致敏的紅細(xì)胞被凝聚胺凝集，則凝集不可逆。離心后，加入重懸液，凝聚胺的凝聚作用可通過加入枸櫞酸鈉而中和，使正常紅細(xì)胞的凝聚解散，而抗體引起的凝集仍然存在。

第三十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三試劑

抗A/抗B標(biāo)準(zhǔn)血清A1/B反定型細(xì)胞獻(xiàn)血者血清或血漿以及5%紅細(xì)胞懸液受檢者血清或血漿以及5%紅細(xì)胞懸液BASOpolymatching試劑盒

標(biāo)本：抗凝靜脈血（EDTA-K2）第三十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三操作步驟（鹽水法）標(biāo)記為主側(cè)的試管中加入受者血清或血漿2滴和供者紅細(xì)胞懸液1滴。標(biāo)記為次側(cè)的試管中加入供者血清或血漿2滴和受者紅細(xì)胞懸液1滴。混勻，立即1000g離心1分鐘。檢查是否溶血，輕輕搖動試管檢查凝集。復(fù)查獻(xiàn)血員ABO血型，患者ABO/Rh血型。判斷并記錄結(jié)果。

第三十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三操作步驟（凝聚胺法）取試管2支，標(biāo)記主次側(cè)在主側(cè)管中加入病人血清或血漿2滴，加供血者5%紅細(xì)胞懸液1滴。次側(cè)管加供血者血清或血漿2滴，加入病人5%紅細(xì)胞懸液1滴。各加LIM液0.7ml，混勻，再各加polybrene(凝聚胺)溶液2滴，并混合均勻。第三十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期三操作步驟（凝聚胺法）3400rpm離心10秒，倒掉上清液，管底殘留約0.1ml液體。輕輕搖動試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重作。最后加入懸浮液（Re