實(shí)驗(yàn)五微生物計(jì)數(shù)法

實(shí)驗(yàn)五微生物計(jì)數(shù)法第1頁/共17頁實(shí)驗(yàn)五微生物的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

第2頁/共17頁目的要求了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造、計(jì)數(shù)原理和計(jì)數(shù)方法，掌握顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的技能。第3頁/共17頁實(shí)驗(yàn)材料活材料：釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）培養(yǎng)液。其他器材：顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、蓋玻片、吸水紙、計(jì)數(shù)器、滴管、擦鏡紙。第4頁/共17頁顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。直接計(jì)數(shù)法優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：直觀、快速、操作簡單。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌，所得為總數(shù)；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)原理第5頁/共17頁常用計(jì)菌器常用計(jì)數(shù)器有血球計(jì)數(shù)板(血細(xì)胞計(jì)數(shù)板)、Petroff-Hauser計(jì)菌器以及Hawksley計(jì)菌器等。各種計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理相同，只是血球計(jì)數(shù)板較厚，不能使用油鏡觀察，只能計(jì)數(shù)較大的霉菌孢子和酵母菌；而后兩種計(jì)菌器細(xì)菌，可以使用油鏡觀察，因此可以直接計(jì)數(shù)細(xì)菌。第6頁/共17頁

血球計(jì)數(shù)板Petroff-Hauser計(jì)菌器Hawksley計(jì)菌器第7頁/共17頁

血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各列有一個(gè)方格網(wǎng)。血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造第8頁/共17頁每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格：一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格。無論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，大方格（計(jì)數(shù)室）中的小方格都是400個(gè)。大方格邊長為lmm，則每一個(gè)大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.lmm3(萬分之一毫升)。A.25中格X16小格B.16中格X25小格第9頁/共17頁計(jì)數(shù)方法使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)5個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求每個(gè)中方格的平均值，再乘上大方格（計(jì)數(shù)室）中方格的數(shù)量，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)。數(shù)兩個(gè)大方格總菌數(shù)，平均后，再換算成每毫升菌液中微生物細(xì)胞的數(shù)量。第10頁/共17頁酵母個(gè)體形態(tài)第11頁/共17頁制備適當(dāng)濃度的菌懸液取潔凈的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片靜置3至5分鐘低倍鏡觀察找到位置加樣品用高倍鏡計(jì)數(shù)設(shè)5個(gè)中方格的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B計(jì)數(shù)板為25個(gè)中方格(本次試驗(yàn))

：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×25×104×B計(jì)數(shù)板為16個(gè)中方格：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×16×104×B實(shí)驗(yàn)步驟：酵母菌細(xì)胞總數(shù)的測定用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴(不宜過多)，則菌液自行滲入，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。

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注意事項(xiàng)取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡；一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5-10個(gè)菌體為宜；每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格（4個(gè)角和中央）計(jì)數(shù)；位于格線上的菌體一般數(shù)上不數(shù)下，數(shù)右不數(shù)左；若芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半，則作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。血球計(jì)數(shù)板使用完畢，用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，以免損壞網(wǎng)格刻度；洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機(jī)吹干。第13頁/共17頁1ml菌液中的總菌數(shù)=？

答案：(3+4+4+3+2)／5×25×104=8×105個(gè)/ml25中格X16小格第14頁/共17頁第15頁/共17頁