食用菌菌種的制作與保藏

食用菌菌種的制作與保藏孢子菇體組織菌絲體菌種培養(yǎng)基質(zhì)萌發(fā)分離食用菌栽培一般包含幾個步驟：第一節(jié)食用菌菌種概述一、菌種概念二、菌種類型三、優(yōu)良菌種的標(biāo)準(zhǔn)返回本章一、菌種的概念

菌種（廣義）：是指以保藏、試驗、栽培和其它用途為目的，具有繁衍能力，遺傳特性相對穩(wěn)定的孢子、組織或菌絲體及其營養(yǎng)性或非營養(yǎng)性的載體。菌種（狹義）：是指以適宜的培養(yǎng)基為載體進(jìn)行純培養(yǎng)的菌絲體，也就是培養(yǎng)基質(zhì)和菌絲體的聯(lián)合體?；蛘哒f是指人工培養(yǎng)，并供進(jìn)一步繁殖的食用菌的純菌絲體。返回二、菌種類型使用目的的不同保藏用菌種

實驗用菌種

生產(chǎn)用菌種培養(yǎng)對象和培養(yǎng)料的不同木質(zhì)菌種草質(zhì)菌種外觀形態(tài)顆粒狀菌種片狀菌種磚狀菌種物理性狀固化菌種固體菌種液體菌種培養(yǎng)容器袋裝菌種瓶裝菌種菌種類型培養(yǎng)基的主料糞草菌種谷粒菌種木塊菌種木屑菌種菌種類型顆粒菌種枝條菌種菌種按生產(chǎn)程序一級種(母種）

二級種（原種）三級種(栽培種）菌種類型返回本節(jié)

用固體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種固體

菌種概念特點設(shè)備、工藝簡單

菌齡長而不一

發(fā)酵率較低用液體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種液體

菌種概念特點設(shè)備、工藝較復(fù)雜

菌齡短而一致

發(fā)酵率高

易老化和自溶生長勢的區(qū)別液體菌種固體菌種返回本節(jié)三、優(yōu)良菌種的標(biāo)準(zhǔn)1、無雜菌污染2、菌種內(nèi)有足夠的菌絲量3、菌種的菌絲體狀態(tài)正常4、菌齡適中返回本節(jié)第二節(jié)食用菌制種的條件一、食用菌制種程序二、制種的設(shè)備和條件返回本章一、制種程序

返回本節(jié)二、制種的設(shè)備和條件1、配料設(shè)備2、滅菌消毒條件3、接種條件4、培養(yǎng)條件5、菌種保藏設(shè)備6、菌種廠的布局

返回本節(jié)切片機(jī)

切片機(jī)是將本材切成規(guī)格木片的專用機(jī)械，是食用菌培養(yǎng)基質(zhì)粉碎處理的預(yù)前工序設(shè)備。

粉碎機(jī)是將木片、秸稈等原料粉碎成一定粗細(xì)度碎屑的專用機(jī)械。粉碎機(jī)切片粉碎兩用機(jī)

攪拌機(jī)是將培養(yǎng)料通過攪拌使其分布充分均勻的專業(yè)機(jī)械。自動上料加水原料攪拌機(jī)攪拌機(jī)裝袋機(jī)裝瓶機(jī)菌種袋頸圈菌種瓶返回2、滅菌和消毒條件

（1）滅菌設(shè)備

高壓蒸汽滅菌鍋

常壓蒸汽滅菌灶（2）消毒條件返回手提式高壓滅菌鍋

手提式高壓滅菌鍋的容積小，適用于試管培養(yǎng)基、三角瓶或平皿、無菌水、少量菌種瓶及一些器皿的滅菌。立式高壓滅菌鍋容量大，可用于菌種瓶、罐頭瓶及塑料袋裝培養(yǎng)基的滅菌。立式高壓滅菌鍋

臥式高壓滅菌鍋容量大、盛物多，滅菌徹底，效果好。

臥式高壓滅菌鍋返回常壓蒸汽滅菌灶返回植物細(xì)胞培養(yǎng)及產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用無菌室（接種室）接種室超凈工作臺雙人單人接種箱

接種箱是用木材與玻璃制成密閉箱。有單人式或雙人對接式。接種箱前后斜面為玻璃窗，便于操作時觀察，可開啟，以便取放物品。玻璃窗下的木板有一對橢圓形開孔，操作孔裝有白布袖套，一端固定在圓孔上，另一端套口用松緊帶箍住操作者的手腕·，以防雜菌進(jìn)入。箱內(nèi)可安裝20W日光燈和30W紫外線燈管。觀察窗紫外燈操作孔接種箱返回本節(jié)A、接種針B、接種鉤C、接種環(huán)D、接種鏟E、接種鋤F、接種耙G、接種刀H、接種勺I、接種鑷接種工具

固

體

菌

種

接

種

槍液體菌種接種槍返回培養(yǎng)室培養(yǎng)架

在制作一級種和少量二級種時，可采用電熱恒溫箱或隔水式電熱恒溫箱，目的是控制溫度，適溫培養(yǎng)。

恒溫培養(yǎng)箱返回貯藏室遠(yuǎn)離污染源低溫（4~8℃）干燥、通風(fēng)、遮光

用前要嚴(yán)格消毒殺蟲地面常撒石灰粉保藏原種、栽培種：五、菌種保藏設(shè)備

保藏母種：冰箱（4℃）左右返回六、菌種廠的布局

根據(jù)菌種生產(chǎn)流程合理設(shè)置倉庫配料室滅菌室接種室培養(yǎng)室辦公室栽培棚門口曬料場返回一、菌種分離概念二、菌種分離方法三、菌種分離提純四、出菇試驗第三節(jié)食用菌菌種分離返回本章概念：將子實體的局部組織或孢子移接在斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操作稱為菌種分離。菌種分離主要指一級種(母種)的分離。

有些與高等植物共生的菌根菌，如紅菇、松菇以及有些要在動物（如白蟻）存在下才產(chǎn)生子實體的菌類，因營養(yǎng)條件復(fù)雜，在目前實驗條件下，較難在簡單的培養(yǎng)基上獲得純菌種。

一、菌種分離概念返回菌種分離菇木分離法

二、菌種分離的方法

組織分離法

子實體分離法

菌核分離法

菌索分離法

孢子分離法

菌褶涂抹法

孢子印分離法

孢子彈射分離法

整菇插種法鉤懸法貼附法單孢子分離法

平板稀釋法連續(xù)稀釋法返回空中孢子捕捉法（一）孢子分離法

無菌操作條件下使孢子在適宜的培養(yǎng)基上萌發(fā)，長成菌絲體而獲得純菌種的方法稱為孢子分離法。

特點

菌絲菌齡短，因是有性繁殖產(chǎn)物，其菌絲生命力強(qiáng)。

侵染病毒的菌類可用孢子分離法脫毒。

種菇的選擇

在生產(chǎn)中必須選擇優(yōu)良品系中的優(yōu)良個體作分離材料。

選取八、九分成熟的，健壯無雜的第一或第二茬的子實體。（一）孢子分離法

返回1、孢子彈射分離法

它是利用孢子能自動彈射出子實體層的特性來收集孢子。

（1）整菇插種法

孢子收集器來收集孢子

2-3天后孢子散落在培養(yǎng)皿中，加入無菌水，用針筒吸取孢子液，接種在斜面培養(yǎng)基中央，置于22-26℃恒溫箱中培養(yǎng)即可。（1）整菇插種法

在生產(chǎn)上，采集木耳、銀耳孢子常用此法，傘菌也可采用此法。

先將新鮮成熟的耳片用無菌水沖洗，然后用無菌紗布將水吸干，取一小片掛在滅菌的鉤子上(傘菌消毒后掛上），鉤子的另一端掛在三角瓶口。

（2）鉤懸法

瓶內(nèi)裝有培養(yǎng)基，在25℃下，培養(yǎng)24h。孢子落到培養(yǎng)基上后，取出耳片，塞上棉塞繼續(xù)培養(yǎng)，然后再轉(zhuǎn)入試管中培養(yǎng)。

（2）鉤懸法

取一小塊成熟的菌褶或小塊菌蓋，用溶化的瓊脂或膠水、漿糊(需先滅菌)貼附在試管斜面的上方或培養(yǎng)皿皿蓋上，經(jīng)6—12h，待孢子落下后，立即將試管或培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基移到另一消毒過的空試管或培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）貼附法

返回2、菌褶涂抹法

將傘菌子實體用75％酒精表面消毒，按無菌操作用接種環(huán)直接插入兩片菌褶之間，輕輕地抹過褶片表面，然后用劃線法涂抹于試管培養(yǎng)基上。

3、孢子印分離法

取成熟子實體經(jīng)表面消毒后，切去菌柄，將菌褶向下放置于滅過菌的有色紙上，在20-24℃靜置一天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在試管培養(yǎng)基上培養(yǎng)。返回4、單孢子分離法

進(jìn)行單孢子分離后，在人工控制的條件下，使兩個優(yōu)良品系的單孢子進(jìn)行雜交，從而培育出新品種。

挑取少許孢子在無菌水中形成孢子懸浮液，取幾滴涂于培養(yǎng)基上，用無菌玻璃三角架推平。經(jīng)48-72h后，鏡檢孢子萌發(fā)情況。在單個孢子旁做好標(biāo)記，然后將其轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，待菌落長到lcm左右時進(jìn)行鏡檢，觀察有無鎖狀聯(lián)合；初步確定是否是單核菌絲。

（1）平板稀釋法

（2）連續(xù)稀釋法

返回

傘菌的孢子（如平菇、香菇、金針菇等）大量彈射時，子實體周圍可以看到“孢子云”，可在“孢子云”飄去的上方倒放瓊脂平板，使孢子附在其上，再蓋上皿蓋，用塑料膠水紙封好培養(yǎng)，整個過程動作要盡可能迅速敏捷。5、空中孢子捕捉法

返回（二）組織分離法

組織分離法是利用子實體內(nèi)部菌肉組織來獲得菌種的一種最簡便的方法，是生產(chǎn)上常用的一種分離菌種的方法。

組織分離是一種無性繁殖過程，所得到的菌種是營養(yǎng)后代，后代不易變異，菌株可保持原品種的優(yōu)良品質(zhì)。但如采用感染病毒的子實體進(jìn)行組織分離時，常得到帶病毒的菌絲體。

返回1、子實體分離法

分離的方法和步驟：種菇的選擇—→種菇的消毒—→切塊接種—→培養(yǎng)純化—→出菇試驗—→母種1、子實體分離法

返回

它是從食用菌菌核分離培養(yǎng)獲得純菌絲的一種方法。如豬苓、茯苓、雷丸等食用兼藥用菌的子實體不易采集到，而其營養(yǎng)貯藏器官——菌核則較易獲得。菌核分離與子實體組織分離的方法很相似。即把菌核表面洗凈，放入經(jīng)滅菌消毒的接種箱中或超凈工作臺上，用0.1%升汞溶液或75%酒精浸泡0.5~1min，用無菌水沖洗數(shù)次，再用無菌解剖刀把菌核從中切成兩半，在中心位置挑取黃豆大一小塊組織，接在斜面培養(yǎng)基中央，在25℃下培養(yǎng)。當(dāng)接種塊萌發(fā)出菌絲后，挑取無雜菌、長勢旺的菌絲體轉(zhuǎn)管培養(yǎng)后即作母種。由于菌核是食用菌的營養(yǎng)貯藏器官，其中大部分是多糖物質(zhì)，有少部分的菌絲，因此接種塊應(yīng)挑取得大些，否則有時就長不出菌絲體來。

2、菌核分離法

返回

它是從食用菌菌索種分離培養(yǎng)得到純菌絲的方法。如蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌等食用菌在人工培養(yǎng)條件下不易形成子實體，也不產(chǎn)生菌核，它們是以特殊結(jié)構(gòu)的菌索來進(jìn)行繁殖的，因此這類菌可用菌索分離菌種。將風(fēng)干的菌索放入滅菌消毒過的接種箱中或超凈工作臺上，挑取生命力旺盛的菌索尖端部分，用75%酒精棉球擦洗表面，以無菌的解剖刀除去菌索的黑色的外皮層（即菌鞘），抽出其白色菌髓部分，將其剪成小段，移接到培養(yǎng)基中央。在25℃左右的條件下培養(yǎng)，菌絲生長出來后，經(jīng)幾次提純轉(zhuǎn)管后即可制成母種。菌索是生長在枯木或埋在土中的，為了預(yù)防雜菌污染，在配制培養(yǎng)基時，常加入青霉素或鏈霉素，濃度為40mg/kg左右，以抑制細(xì)菌的生長繁殖，從而提高分離的成功率。

3、菌索分離法

返回第四節(jié)食用菌菌種制作

菌種分母種、原種和栽培種。通常也稱一級種、二級種、三級種。一、母種制作二、原種與栽培種制作返回本章一、母種制作1、培養(yǎng)基制備2、接菌3、培養(yǎng)檢驗返回本節(jié)接種母種返回母種培養(yǎng)基配制方法配方馬鈴薯－葡萄糖－瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）馬鈴薯200克葡萄糖20克瓊脂20克水1000毫升pH5.5－61、稱量配制方法2、土豆加熱煮沸3、添加其它營養(yǎng)物質(zhì)，調(diào)節(jié)pH值4、分裝試管5、塞棉塞6、滅菌7、擺斜面返回土豆削皮切塊切塊稱量土豆返回添加土豆煮沸過濾過濾返回稱量葡萄糖稱量瓊脂添加瓊脂返回加熱分裝試管分裝好的試管返回塞棉塞返回包扎裝鍋放氣返回擺斜面擺斜面返回返回母種

培養(yǎng)及時挑揀污染管分離的母種要純化→出菇試驗→使用控制菌齡（即將長滿斜面）培養(yǎng)時間5~10天母種培養(yǎng)細(xì)菌污染返回木霉污染二、原種與栽培種制作（一）培養(yǎng)基制備1、配制原則2、配制方法配方-配料-拌料-裝袋（瓶）-滅菌（二）接菌（三）培養(yǎng)、檢驗返回本節(jié)培養(yǎng)基常用的配方

1．木屑培養(yǎng)基：闊葉樹木屑78%，麩皮(或米糠)20%，石膏2%。這是常見的木屑培養(yǎng)基配方。適于制作香菇、平菇、黑木耳、金針菇、滑菇、靈芝、猴頭菇等多種木腐型菌種。2．棉籽殼培養(yǎng)基：棉籽殼78%，麩皮(或米糠)20%，石膏2%。適用于制作金針菇、平菇、鳳尾菇、草菇、銀耳、黑木耳、猴頭菇等菌種。

3、谷粒培養(yǎng)基：玉米?；蛐←溋?00%。麥粒種原種及栽培種培養(yǎng)基原料裝袋（瓶）原料裝袋（瓶）栽培種的裝袋原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌高壓滅菌1.5kg/cm2（152kpa、128.1℃）滅菌1~2h

滅菌池常壓滅菌100℃滅菌10h左右→再悶12h要求攻頭、控中、保尾母種原種接原種用接種耙取蠶豆大母種

放于瓶中料面上接栽培種用接種匙（鑷、鏟）取棗大原種放于袋的兩端或瓶中料面上注意表面老菌絲及

老種塊勿接入栽培種接種

原種

栽培種

的培養(yǎng)培養(yǎng)時間：約30天勿堆放過擠及時挑揀污染瓶（袋）栽培種的菌袋缺氧時可刺孔增氧控制菌齡（菌絲長滿后7~10天使用）刺孔點查看菌絲生長情況鏈孢霉曲霉根霉毛霉木霉繼續(xù)培養(yǎng)……返回本節(jié)第五節(jié)菌種質(zhì)量的鑒定形態(tài)特征、生理特性、

栽培性狀、經(jīng)濟(jì)效益等鑒定

項目（一）母種質(zhì)量的鑒定、菌絲白、整齊、粗壯、

有彈性、萌發(fā)快等。1.外觀好差菌絲干燥、收縮、自溶

產(chǎn)生紅褐色液體等。返回本章退化母種好母種2.鑒定耐干濕性試驗接入母種→正常生長原種

培養(yǎng)基

含水量＜50%＞70%耐高溫性試驗仍正常生長適溫培養(yǎng)7天

30~35℃鍛煉24h

再適溫培養(yǎng)出菇試驗栽培出菇快

產(chǎn)量高

品質(zhì)好

抗逆性強(qiáng)返回本節(jié)（二）原種、栽培種質(zhì)量的鑒定

具有菌絲白（符合該菌種的顏色）

均勻、粗壯、有菇香味

接種后萌發(fā)快菌種種類品種名稱菌種級別代時生產(chǎn)廠家接種日期合格菌種用于生產(chǎn)沒有無雜色、無黃水、無結(jié)皮、無原基、無干縮脫壁等現(xiàn)象產(chǎn)生原基黃水污染返回本章第六節(jié)菌種保藏與復(fù)壯一、菌種保藏

（一）保藏目的及原理

（二）常用保藏法

（三）保藏注意

二、菌種復(fù)壯

(一）菌種的衰退

（二）復(fù)壯方法

（三）防衰措施返回本章一、菌種保藏（一）保藏目的及原理目的原理創(chuàng)造不利于菌種生長的一切條件，

使其代謝處于休眠狀態(tài)。使菌種不生長不死亡不污染不降低或不喪失其優(yōu)良性以盡量延長使用時間使菌種不生長不死亡不污染不降低或不喪失其優(yōu)良性以盡量延長使用時間低溫干燥無氧缺營養(yǎng)不利

條件（二）常用保藏法以母種形式保藏特點簡便

保藏時間短

易污染及退化

不適于草菇等菌類1.斜面低溫法

斜面菌種置4~6℃冰箱中（3~6個月）2.礦油保藏法無菌檢驗？注入種管淹沒斜面約1cm礦油

處理滅菌：152kpa、30min

去水：40~50℃烘至無色透明口堵膠塞用時轉(zhuǎn)管再轉(zhuǎn)管3.自然基質(zhì)保藏法基質(zhì)的處理麥粒浸透、煮熟

麩皮拌濕裝管防衰老

保藏時間長

轉(zhuǎn)接后生長旺

易污染，滅菌要徹底特點滅菌接種培養(yǎng)干燥器去水（三）保藏注意用保種培養(yǎng)基及時保藏（菌絲占斜面2/3）最好換膠塞用時活化嚴(yán)防棉塞受潮二、菌種的復(fù)壯概念確?；蚧謴?fù)菌種優(yōu)良性能的措施（一）菌種的衰退形態(tài)改變