細(xì)菌基礎(chǔ)操作

細(xì)菌培養(yǎng)基礎(chǔ)操作細(xì)菌培養(yǎng)的意義標(biāo)本的采集接種方法介紹菌落鑒定藥敏試驗(yàn)細(xì)菌培養(yǎng)意義

細(xì)菌培養(yǎng)是在無(wú)菌條件下，對(duì)來(lái)自病人的標(biāo)本（采取病人少許的血液、排泄物、分泌物、嘔吐物、體液和脫落細(xì)胞等樣品）在合適培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，分離出致病菌，進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，進(jìn)而指導(dǎo)臨床用藥。

痰、尿、糞便標(biāo)本的采集

1.令患者早上起床后用清水瀨口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在無(wú)菌密閉塑料痰盒中，及時(shí)送檢。

2.先準(zhǔn)備無(wú)菌封閉尿杯，清洗外陰，留取中段尿5—10毫升，及時(shí)送檢

3.取有粘液、膿血部分的糞便置玻璃大便專用管中，如為稀水便，可直接收集于玻璃管中

標(biāo)本的采集標(biāo)本的采集其它標(biāo)本的采集

除上述四種標(biāo)本外，還有傷口分泌物、膿液和腦積液等標(biāo)本亦可進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，需保證標(biāo)本采集和保存的無(wú)菌。其中腦脊液可按血液標(biāo)本方法操作。

接種工具

酒精燈、接種環(huán)、加樣器、棉棒、培養(yǎng)板等

接種方法接種方法

2.接種環(huán)境接種罩、無(wú)菌工作室、超凈工作臺(tái)接種方法

細(xì)菌的接種方法有很多種，如劃線法、涂布法、傾注法、斜面接種法、液體培養(yǎng)基接種法。

根據(jù)樣本形態(tài)和目的用途，選取合適的接種方法。接種方法1.涂布法先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無(wú)菌平板中，然后用無(wú)菌吸管吸取0.1ml菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無(wú)菌L型玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻，將涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征。缺點(diǎn)：接種前需梯度稀釋，吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。接種方法

3.

斜面接種法

用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內(nèi)，挑取用來(lái)移種的菌落。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi)，先從斜面底部到頂端拖一條接種線，再自下而上蜿蜒劃線，或直接自下而上地蜿蜒劃線。接種完成之后，用火焰滅菌培養(yǎng)管口，并塞上棉塞，置于37℃培養(yǎng)。主要用于純種移植，以進(jìn)一步鑒定或保存菌種。接種方法接種方法

4.液體培養(yǎng)基接種法

用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本，在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌均勻得散落在液體培養(yǎng)基中。可觀察到細(xì)菌不同的生長(zhǎng)現(xiàn)象接種方法Clicktoaddtitle

5.半固體穿刺接種法可用于保存細(xì)菌和觀察細(xì)菌動(dòng)力

接種方法Clicktoaddtitle說(shuō)明性文字接種方法6.劃線法

接種環(huán)沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。

優(yōu)點(diǎn)：可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離。

缺點(diǎn)：不能用于菌落計(jì)數(shù)接種方法3、燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留細(xì)菌，待冷（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），作連續(xù)平行劃線，此線需與初次劃線尾部相交三到四次，約占平板表面五分之一左右，再次燒灼接種環(huán)，以同樣方法作第三次劃線，與第二次劃線尾部相交三到四次。4.劃線完畢，蓋上平皿蓋，底面向上，用標(biāo)簽或臘筆注明接種者信息，置37℃孵育培養(yǎng)二十四小時(shí)后觀察結(jié)果接種方法

連續(xù)劃線分離法此法常用于含菌量不多的標(biāo)本或培養(yǎng)物中的細(xì)菌分離培養(yǎng)，方法是先將接種物在瓊脂平板上五分之一處輕輕涂抹，然后用接種環(huán)或釋子在平板表面曲線連續(xù)劃線接種，直至畫(huà)滿瓊脂平板表面接種方法尿液接種用無(wú)菌5ul微量移液器吸取尿液加于血平板上呈一直線，再用滅菌接種環(huán)經(jīng)圓心劃成直徑，接種環(huán)滅菌，之后沿直徑向兩邊涂抹，讓存在于5ul尿液標(biāo)本中的細(xì)菌完全平蒲于整個(gè)瓊脂表面上（充分利用表面積而不留下空隙）。盡量利用平板瓊脂表面積讓標(biāo)本中的細(xì)菌完全平蒲開(kāi)來(lái)。細(xì)菌鑒定

細(xì)菌鑒定首先觀察菌落形態(tài)，生長(zhǎng)情況，再進(jìn)一步用生理鹽水稀釋，在顯微鏡下觀測(cè)，判斷細(xì)菌菌屬，是否需要進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)用藥敏實(shí)驗(yàn)進(jìn)行藥物敏感度的測(cè)定，以便準(zhǔn)確有效