病毒與細(xì)胞的相互作用演示文稿

病毒與細(xì)胞的相互作用演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有51頁\編輯于星期五優(yōu)選病毒與細(xì)胞的相互作用現(xiàn)在是2頁\一共有51頁\編輯于星期五目的要求：1、掌握病毒的細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)和方法以及病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)制。

2、了解病毒持續(xù)性感染的機(jī)制和干擾素的產(chǎn)生和作用機(jī)理。

重點(diǎn)：病毒的細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)、方法和病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)理

難點(diǎn)：病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)理和病毒持續(xù)性感染的機(jī)制和干擾素的產(chǎn)生和作用機(jī)理現(xiàn)在是3頁\一共有51頁\編輯于星期五第一節(jié)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)病毒是嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒必須使用細(xì)胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動物（動物接種）、雞胚（雞胚接種）或離體細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)（細(xì)胞培養(yǎng)）?，F(xiàn)在是4頁\一共有51頁\編輯于星期五一、動物接種接種后通常以動物發(fā)病、死亡作為感染的指標(biāo)。按病毒侵襲部位不同選擇適當(dāng)?shù)慕臃N途徑。嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。現(xiàn)在是5頁\一共有51頁\編輯于星期五動物接種的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：⑴不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備；⑵技術(shù)簡單；⑶易成功缺點(diǎn)：⑴個體差異大⑵價格昂貴⑶數(shù)量有限⑷需要隔離畜舍現(xiàn)在是6頁\一共有51頁\編輯于星期五二、雞胚接種一種比較經(jīng)濟(jì)簡便的方法?，F(xiàn)在是7頁\一共有51頁\編輯于星期五現(xiàn)在是8頁\一共有51頁\編輯于星期五雞胚接種的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：技術(shù)簡單、來源充沛、價格低廉、數(shù)量可大，不需特殊設(shè)備缺點(diǎn)：很多病毒不能適應(yīng)，主要是哺乳動物的病毒。現(xiàn)在是9頁\一共有51頁\編輯于星期五三、細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)是指利用機(jī)械、酶或化學(xué)方法使動物組織或傳代細(xì)胞分散成單個乃至2～4個細(xì)胞團(tuán)懸液進(jìn)行培養(yǎng)?，F(xiàn)在是10頁\一共有51頁\編輯于星期五(一)細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：每個細(xì)胞生理特性基本一致，對病毒易感性相等無個體差異，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作細(xì)胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征應(yīng)用空斑技術(shù)可進(jìn)行病毒的克隆化現(xiàn)在是11頁\一共有51頁\編輯于星期五（二）細(xì)胞的類型根據(jù)細(xì)胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型：1.原代細(xì)胞(primarycell)：動物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細(xì)胞分散而獲得的單個細(xì)胞，再生長于培養(yǎng)器皿中。大多數(shù)組織均可制備原代細(xì)胞，但生長的快慢及難易程度不一?，F(xiàn)在是12頁\一共有51頁\編輯于星期五（二）細(xì)胞的類型2.二倍體細(xì)胞(diploidcellstrain)：將長成單層的原代細(xì)胞消化分散成單個細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細(xì)胞一樣，保持其二倍染色體數(shù)目的細(xì)胞，稱為二倍體細(xì)胞。但巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等體外培養(yǎng)時一般不分裂，很難獲得二倍體細(xì)胞株。現(xiàn)在是13頁\一共有51頁\編輯于星期五（二）細(xì)胞的類型3.傳代細(xì)胞系(diploidcellline)：能在體外持續(xù)增殖傳代的細(xì)胞，大多數(shù)由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而成，染色體數(shù)目不正常，為異倍體。優(yōu)點(diǎn)：傳代及培養(yǎng)方便缺點(diǎn)：對有的分離野毒（樣本中的病毒）不敏感由于擔(dān)心致腫瘤的潛在危險，傳代細(xì)胞一般不能用于制備疫苗。常用傳代細(xì)胞系：HeLe(人子宮癌細(xì)胞)，Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)，BHK21(乳倉鼠腎細(xì)胞)，PK15(豬腎細(xì)胞)等現(xiàn)在是14頁\一共有51頁\編輯于星期五（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法常用的有靜置培養(yǎng)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)兩種1.靜置培養(yǎng)(stationaryculture)：實驗室常用。將消化分散的細(xì)胞懸液裝瓶，5%CO2溫箱靜置培養(yǎng)，數(shù)天后細(xì)胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。哺乳動物和禽類的細(xì)胞培養(yǎng)溫度一般為37℃。現(xiàn)在是15頁\一共有51頁\編輯于星期五（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法2.旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)(rollerculture)：大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。細(xì)胞在玻瓶內(nèi)生長時，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細(xì)胞貼附于玻瓶四周，長成單層?；痉椒ㄅc靜置培養(yǎng)基本相同，不同之處是培養(yǎng)的細(xì)胞不斷緩慢旋轉(zhuǎn)（5-10r/h）?，F(xiàn)在是16頁\一共有51頁\編輯于星期五（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法另外為滿足某些特定需要可采取懸浮培養(yǎng)和微載體培養(yǎng)兩種1.懸浮培養(yǎng)(suspensionculture)：攪拌使細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)，并不斷補(bǔ)充營養(yǎng)和矯正PH值，使之生長或存活，適用于不需要貼壁生長的細(xì)胞系。如NS-1（一種骨髓瘤細(xì)胞系）1.微載體培養(yǎng)(microcarrierculture)：在懸浮培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，結(jié)合微載體的培養(yǎng)技術(shù)，微載體直徑在100-200μm的微粒，對細(xì)胞無毒，細(xì)胞附著其上生長成單層，由于單位體積表面積大，所獲得的細(xì)胞數(shù)多。對規(guī)?；?xì)胞生產(chǎn)和疫苗生產(chǎn)有較大吸引力?，F(xiàn)在是17頁\一共有51頁\編輯于星期五第二節(jié)病毒與細(xì)胞的相互作用殺細(xì)胞感染非殺細(xì)胞感染引致持續(xù)感染，對細(xì)胞代謝無影響。產(chǎn)生干擾素現(xiàn)在是18頁\一共有51頁\編輯于星期五病毒的種類千差萬別，宿主的細(xì)胞的種類也多達(dá)200多種，病毒與宿主細(xì)胞之間的作用的表現(xiàn)形式各異。一、病毒與細(xì)胞相互作用的類型病毒感染可分為殺細(xì)胞及非殺細(xì)胞兩大類。并非所有的病毒感染都能產(chǎn)生和釋放子代病毒顆粒。宿主細(xì)胞感染病毒發(fā)生的變化可能是細(xì)胞死亡或細(xì)胞轉(zhuǎn)化，也可能是病毒非生產(chǎn)性感染，或稱頓挫感染。現(xiàn)在是19頁\一共有51頁\編輯于星期五某些種類的細(xì)胞是允許性的，可讓病毒完成復(fù)制過程；而另一些則阻斷了病毒的復(fù)制過程的某個環(huán)節(jié)，此類細(xì)胞稱為非允許性的。病毒感染允許性及非允許性細(xì)胞均可產(chǎn)生細(xì)胞的病理變化。現(xiàn)在是20頁\一共有51頁\編輯于星期五最重要的非生產(chǎn)性的病毒與細(xì)胞的相互作用是持續(xù)感染。持續(xù)感染（persistentinfection）：是指持續(xù)長時間的感染。在感染過程中不形成感染性的病毒顆粒，可能是病毒的基因組被整合到宿主細(xì)胞DNA內(nèi)，或以附加體形式存在。潛伏感染的細(xì)胞在某些情況下并不釋放病毒顆粒，在被激活的情況下則可變?yōu)樯a(chǎn)性的?，F(xiàn)在是21頁\一共有51頁\編輯于星期五二、病毒引致的殺細(xì)胞變化(一)細(xì)胞病變(cytopathiceffect,CPE)由病毒感染導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。CPE能在光學(xué)顯微鏡下觀察。現(xiàn)在是22頁\一共有51頁\編輯于星期五50%組織細(xì)胞感染量（TCID50）能夠使半數(shù)組織細(xì)胞在一定條件下發(fā)生細(xì)胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力。現(xiàn)在是23頁\一共有51頁\編輯于星期五細(xì)胞病變的表現(xiàn)因病毒與細(xì)胞的種類而異，有多種形式①細(xì)胞圓縮：如痘病毒和呼腸孤病毒等；②細(xì)胞聚合：如腺病毒；③形成合胞體：細(xì)胞融合形成，如副粘病毒和皰疹病毒；④細(xì)胞腫大：⑤包涵體：有些病毒可能形成?，F(xiàn)在是24頁\一共有51頁\編輯于星期五CPE細(xì)胞腫大細(xì)胞圓縮形成合胞體現(xiàn)在是25頁\一共有51頁\編輯于星期五正常細(xì)胞CPECPE觀察現(xiàn)在是26頁\一共有51頁\編輯于星期五CPE觀察正常單層A72細(xì)胞接種犬冠狀病毒（CCV）后形成合胞體的的單層A72細(xì)胞現(xiàn)在是27頁\一共有51頁\編輯于星期五細(xì)胞折光性↑，變圓○，局部→全層，死亡脫落，如：腸道病毒?，F(xiàn)在是28頁\一共有51頁\編輯于星期五細(xì)胞聚集成叢，似葡萄串狀，細(xì)胞間常有細(xì)絲狀間橋連接，細(xì)胞變圓或膨大，如：腺病毒。現(xiàn)在是29頁\一共有51頁\編輯于星期五細(xì)胞融合形成多核的巨細(xì)胞，稱為“合胞體”，如副粘、牛白血病病毒等。

現(xiàn)在是30頁\一共有51頁\編輯于星期五胞漿內(nèi)有空泡形成，如：猴病毒SV40、呼腸孤病毒等?，F(xiàn)在是31頁\一共有51頁\編輯于星期五(1)病毒對宿主細(xì)胞膜的影響一些具有有融合活性的表面蛋白的有囊膜病毒能夠啟動細(xì)胞之間的融合，形成多核細(xì)胞如合胞體病毒?，F(xiàn)在是32頁\一共有51頁\編輯于星期五合胞體（syncytia）：是病毒感染后導(dǎo)致感染細(xì)胞及相鄰細(xì)胞細(xì)胞膜融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細(xì)胞的相鄰細(xì)胞膜消失，成為多核巨細(xì)胞?，F(xiàn)在是33頁\一共有51頁\編輯于星期五(2)病毒對細(xì)胞骨架的影響許多病毒的感染會導(dǎo)致細(xì)胞骨架纖維系統(tǒng)（細(xì)胞骨架由維絲、中介絲及維管組成）的瓦解。由于細(xì)胞骨架在維持細(xì)胞形態(tài)中起一定作用，所以病毒引起細(xì)胞骨架的改變是受染細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化的原因之一?，F(xiàn)在是34頁\一共有51頁\編輯于星期五病毒引致的細(xì)胞凋亡和壞死細(xì)胞的死亡則是因病毒感染引起了細(xì)胞的生理性死亡所致，亦即程序性死亡，或稱為凋亡(apoptosis)。凋亡與壞死的細(xì)胞有不同的形態(tài)變化，凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化。內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，將細(xì)胞DNA降解成180-200dp的片段，可在瓊脂糖凝膠電泳時出現(xiàn)特征性的電泳帶，稱之為“梯帶”。壞死的細(xì)胞沒有內(nèi)切酶激活所致的變化。凋亡是宿主細(xì)胞的重要防御機(jī)制，細(xì)胞壞死總是在病毒復(fù)制完成之后發(fā)生。現(xiàn)在是35頁\一共有51頁\編輯于星期五病毒引起的細(xì)胞調(diào)亡現(xiàn)在是36頁\一共有51頁\編輯于星期五空斑試驗將適當(dāng)濃度的病毒懸液加入單層細(xì)胞培養(yǎng)中，當(dāng)病毒吸附細(xì)胞后，再覆蓋一層融化的瓊脂。病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制后產(chǎn)生局限性病灶，病灶逐漸擴(kuò)大，肉眼也能看見，此即空斑試驗?，F(xiàn)在是37頁\一共有51頁\編輯于星期五現(xiàn)在是38頁\一共有51頁\編輯于星期五CELLS空斑是由一個感染性病毒粒子復(fù)制形成的，類似于細(xì)菌的菌落，稱為空斑形成單位(Plaque-formingunit，PFU)。病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU來表示?，F(xiàn)在是39頁\一共有51頁\編輯于星期五現(xiàn)在是40頁\一共有51頁\編輯于星期五現(xiàn)在是41頁\一共有51頁\編輯于星期五空斑試驗的用途：1.測定病毒數(shù)量2.純化病毒單個空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆。3.鑒定病毒不同病毒的空斑具有不同的特征?，F(xiàn)在是42頁\一共有51頁\編輯于星期五三、包涵體(inclusionbody)定義：是某些病毒感染細(xì)胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，在普通光學(xué)顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)，稱為包涵體?，F(xiàn)在是43頁\一共有51頁\編輯于星期五包涵體的性質(zhì)病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的Negri氏體大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體細(xì)胞變性的產(chǎn)物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體現(xiàn)在是44頁\一共有51頁\編輯于星期五意義——診斷（涂片或組織切片）——某些病毒的診斷依據(jù)——發(fā)現(xiàn)包涵體即可確診——狂犬病，小腦或大腦海馬角有內(nèi)基氏小體（圓形或卵圓形的嗜酸性小體）——C漿內(nèi)；喉氣管炎——C核內(nèi)。副流感病毒Ⅲ型，C漿內(nèi)、核內(nèi)都有。現(xiàn)在是45頁\一共有51頁\編輯于星期五現(xiàn)在是46頁\一共有51頁\編輯于星期五現(xiàn)在是47頁\一共有51頁\編輯于星期五狂犬病毒包涵體（Negribody）現(xiàn)在是48頁\一共有51頁\編輯于星期五能產(chǎn)生包涵體的重要的畜禽病毒現(xiàn)在是49頁\一共有51頁\編輯于星期五四、病毒引致的非殺細(xì)胞變化非殺細(xì)胞病毒的感染通常引致持續(xù)感染，對細(xì)胞的新陳代謝并無大礙