國內(nèi)外沙門氏菌檢測方法

國內(nèi)外沙門氏菌檢測方法第1頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四DANIELELMERSALMON,(1850-1914)

美國獸醫(yī)微生物和病理學家。是美國授予的第一位獸醫(yī)學博士。1884年任美國農(nóng)業(yè)部畜牧局首任局長。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門氏菌。在醫(yī)學微生物中通用的沙門菌一詞，就是為紀念他而以他的名字命名的。沙門菌（Salmonella）第2頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌（Salmonella）

沙門菌屬（Salmonella）是一大群寄生于人類和動物腸道內(nèi)生化反應和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌統(tǒng)稱為沙門桿菌。第3頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌（Salmonella）

目前至少有67種O抗原和2000個以上血清型，所致疾病稱沙門菌病。腸熱癥：是傷寒病和副傷寒病的總稱，主要由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。

急性腸炎(食物中毒):是最常見的沙門桿菌感染。多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等引起。

敗血癥：常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌、腸炎桿菌等引起。

第4頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四

大小0.6～1.0×2～3um，無芽胞，一般有鞭毛(雞沙門菌除外)，無莢膜，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度為35～37℃，最適pH值為6.8～7.8。沙門菌生物學性狀

第5頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四不分解乳糖（亞利桑那菌除外）。分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒沙門菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）。多數(shù)產(chǎn)生H2S，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長。沙門菌生物學性狀

第6頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌常用生化試驗三糖鐵（TSI）尿素酶試驗陰性（黃）陽性（紅）第7頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌常用生化試驗吲哚試驗陰性（液面黃）陽性（液面紅）

VP試驗陽性（紅色）陰性（不變）第8頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌常用生化試驗賴氨酸脫羧酶試驗對照陽性（紫）陰性（黃）丙二酸鹽試驗陽性（蘭）陰性（不變）第9頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四ONPG試驗陽性（黃）空白沙門菌常用生化試驗第10頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四國內(nèi)外沙門菌檢測方法（傳統(tǒng)方法）

國家標準行業(yè)標準FDA（Food&DrugAdministration）

AOAC(AssociationofOfficialAnalyticalChemists)

FSIS（FOODSAFETYANDINSPECTIONSERVICE）

ISO加拿大官方食品微生物分析方法

第11頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品前增菌法25g＋BPW225mL36℃

±

1℃一般4h，干蛋品18h～24h10mL＋MM（或TTB）100mL10mL＋SC100mL直接增菌法25g＋滅菌生理鹽水25mL檢樣勻液25mL＋MM（或TTB）100mL檢樣勻液25mL

＋SC100mLBSDHL（或HE、WS、SS）TSI（排除A/AH2S－結(jié)果），靛基質(zhì)，尿素，KCN，賴氨酸沙門氏菌血清學試驗甘露醇山梨醇H2S＋靛＋尿－KCN－賴＋H2S－靛－尿－KCN－賴＋/－非如左述的各種反應結(jié)果沙門氏菌血清學試驗ONPG－沙門氏菌非沙門氏菌42℃18h～24h36℃

±

1℃18h～24h42℃18h～24h36℃

±

1℃18h～24h36℃

±

1℃40h～48h36℃

±

1℃18h～24h

微生物學檢驗沙門氏菌檢驗中華人民共和國國家標準GB/T4789.4-2003第12頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四

出口食品沙門氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗方法

肉類、蛋品緩沖胨水（BPW）四硫磺酸鹽煌綠（TTB）亞硒酸鹽胱氨酸（SC）37

℃4hor20～24h直接選擇性增菌亞硒酸鹽胱氨酸（SC）四硫磺酸鹽煌綠（TTB）37℃24±2h

BS&DHL(亞利桑那菌瓊脂)

前增菌37℃24～48hTSI&賴氨酸脫羧酶TSI&尿素酶37℃24～48h生化試驗血清學試驗（“O”抗原，“Vi”抗原）42℃20±2h37℃24～48h結(jié)果判定檢驗檢疫行業(yè)標準SN0170－92第13頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四

樣品（20類）25g225mL乳糖肉湯（LB）or胰酪胨大豆肉湯（TSB）or煌綠溶液（BG）or通用前增菌肉湯（UPB）or營養(yǎng)肉湯（NB）or再造脫脂奶粉or四硫酸鹽煌綠（TT）pH6.8±0.224±2h35℃RVTT

43±0.2℃or35±2.0℃24±2h

24±2h42±0.2℃BS&XLD&HE24±2h35℃TSI&LIA非沙門菌沙門菌非沙門菌LIA+LIA－TSIK/ALIA－TSIA/A&尿素酶，H抗原（多價H抗血清或Spicer-Edwardsflagellar(H)test），賴氨酸脫羧酶，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），O抗原酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MR－VP,西蒙氏檸檬酸鹽5種商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)（API20E,EnterotubeII,

EnterobacteriaceaeII,MICRO-ID,orVitekGNI）&O抗原&H抗原細菌學分析手冊（FDA/BAM）第五章沙門菌屬第14頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四肉、禽和蛋品中沙門菌的分離和鑒定USDA/FSISMLG4.02樣品BPWorBPW（含結(jié)晶紫）35±1℃20-24hBGS&DMLIAorXLT442±0.5℃22~24h0.5±0.05mL＋10mLTT0.1±0.02mL＋10mLmRV42±0.5℃22~24h35±1℃18~24h&48hTSI&LIA血清學試驗商業(yè)生化試劑盒或自動鑒定系統(tǒng)or傳統(tǒng)生化鑒定（AOACOfficialMethod967.27or"EdwardsandEwing'sIdentificationofEnterobacteriaceae"）報告結(jié)果第15頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四肉制品中沙門菌的分離和鑒定FDA&USDA/FSIS乳糖肉湯緩沖蛋白胨水TTB肉湯RV肉湯TTB肉湯RV肉湯BSXLDHEXLT42倍改良LIABGS生化篩選（LIA,TSI）鑒定及確證試驗葡萄糖脲酶試驗衛(wèi)矛醇動力試驗吲哚MR-VP測試氰化鉀粉紅酒石酸鹽瓊脂乳糖水楊苷賴氨酸脫羧酶西蒙氏枸櫞酸鹽丙二酸蔗糖血清學試驗第16頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四AOAC沙門菌檢測方法AOACOfficialMethod967.25SalmonellainFoodsPreparationofCultureMediaandReagentsAOACOfficialMethod967.26SalmonellainProcessedFoodsDetectionAOACOfficialMethod967.27SalmonellainFoodsIdentificationAOACOfficialMethod967.28SalmonellainFoodsSerologicalTests第17頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四食品中的沙門菌檢測方法AOAC967.25－967.28處理樣品1mL+10mLSC1mL+10mLTT35℃24±2hXLD&HE&BS35℃24±2h（BS24h&48h）35℃24±2hTSI&LIA35℃24±2h純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物MACorXLDorHE尿素酶－尿素酶＋非沙門菌H抗原，LIA，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），O抗原吲哚＋&H血清－KCN＋&LIA－非沙門菌非沙門菌補充生化試驗酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MR－VP,西蒙氏檸檬酸鹽非沙門菌沙門菌第18頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四25g樣品225mLBPW35℃or37℃16~20h0.1mL+10mLRV10mL+100mLSC42℃24h35℃or37℃24h&48h酚紅煌綠瓊脂（亮綠瓊脂）&第二種選擇性平板35℃or37℃

20~24h無典型菌落再培養(yǎng)18～24h典型菌落（pinkred）營養(yǎng)瓊脂純化可疑菌落每個平板選5個菌落35℃or37℃

18~24hTSI，尿素酶，賴氨酸脫羧酶，ONPG，VP，吲哚血清學試驗（O抗原，Vi抗原，H抗原）報告結(jié)果送參考實驗室分型ISO6579:1993(E)

微生物－沙門菌檢測的通用方法第19頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四25g樣品營養(yǎng)肉湯or緩沖胨水or煌綠水溶液or胰蛋白酶大豆肉湯35℃18~24h1mL+9mLSC1mL+9mLTBG35℃24±2h42.5℃24±2hBS&BGS35℃24±2h&48±2h純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物MACTSI&LIA&尿素瓊脂O多價血清，H多價血清食品中沙門菌的分離和鑒定加拿大HPB方法商業(yè)生化試劑盒或自動鑒定系統(tǒng)報告MFHPB-20第20頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌儀器檢測法VIDAS（生物梅里埃公司）BAX（杜邦公司）第21頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌儀器檢測法VIDAS

應用酶聯(lián)免疫技術(shù)制造的全自動免疫分析儀，用熒光分析技術(shù)通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗，通過激發(fā)光源檢測，即能自動讀出發(fā)光的陽性標本，其優(yōu)點是檢測靈敏度高，速度快，可以在48小時的時間內(nèi)快速鑒定沙門氏菌、大腸桿菌O157：H7、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等。第22頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四

VIDAS

第23頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四沙門菌儀器檢測法DUPONTQualiconBAXSystem

應用DNA分子核酸探針或基因探針技術(shù)制造的全自動PCR分析儀。將已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標記，加入已變性的被檢DNA樣品中，在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區(qū)段形成雜交雙鏈，從而達到鑒定樣品中DNA的目的。第24頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四

DUPONTQualiconBAXSystem

第25頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四商品化生化鑒定系統(tǒng)VITEKGNI+

應用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進行測試，卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)。先制備一定濃度的欲鑒定菌株的菌懸液，然后將菌懸液接種到各種細菌的小卡上，將其放入具有讀數(shù)功能的孵箱內(nèi)，每隔一定時間，儀器會自動檢測培養(yǎng)基的發(fā)酵情況，并換算成能被計算機所接受的生物編碼。最后由計算機判定，打印出鑒定結(jié)果。第26頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四

VITEK

第27頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四商品化生化鑒定系統(tǒng)API20E

API20E生化鑒定是根據(jù)快速酶促反應及代謝產(chǎn)物的檢測技術(shù)發(fā)展的一種細菌編碼鑒定法，廣泛應用于臨床、食品中革蘭氏陰性桿菌的快速鑒定。第2