NY-T 4225-2022 天然生膠 脂肪酸含量的測定 氣相色譜法

NY/T４２２５—２０２２前言本文件按照GB/T１１—２０２０?標準化工作導則第１部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則?的規(guī)定起草.請注意本文件的某些內(nèi)容有可能涉及專利.本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任.本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)墾局提出.本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶作物及制品標準化技術(shù)委員會歸口.本文件起草單位:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所、海南省天然橡膠質(zhì)量檢驗站.本文件主要起草人:王兵兵、潘琪、張福全、黃世清、廖祿生、盧光、李一民.ⅠNY/T４２２５—２０２２天然生膠脂肪酸含量的測定氣相色譜法警示———使用本文件的人員應有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗.本文件并未指出所有可能的安全問題.使用者有責任采取適當?shù)陌踩徒】荡胧?并保證符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件.１范圍本文件描述了天然生膠中脂肪酸含量的測定方法.本文件適用于天然生膠中肉豆蔻酸、棕櫚酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、花生酸７的測定.種脂肪酸含量２規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款.其中,注日期的引用文件,僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件.GB/T６６８２分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T１５３４０天然、合成生膠取樣及其制樣方法３術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義.４原理天然生膠中的長鏈脂肪酸(碳原子數(shù)≥１４)經(jīng)過甲酯化反應后,再進行萃取,然后對萃取物進行氣相色譜分析,采用內(nèi)標法定量計算各種脂肪酸的含量.５試劑警示———處理甲苯溶液應在通風櫥內(nèi)進行.除非另有規(guī)定,僅使用確認的分析純試劑.５１水,GB/T６６８２,二級.５２甲苯(CAS１０８Ｇ８８Ｇ３),＝０８６６g/cm３,含量不低于９９５％(質(zhì)量分數(shù)).ρ５３甲醇(CAS６７Ｇ５６Ｇ１),＝０７９１g/cm３,含量不低于９９５％(質(zhì)量分數(shù)).ρ５４濃硫酸(CAS７６６４Ｇ９３Ｇ９),＝１８４g/cm,含量不低于９８０％(質(zhì)量分數(shù)).３ρ５５無水硫酸鈉(CAS７７５７Ｇ８２Ｇ６),＝２６８g/cm３,含量不低于９９０％(質(zhì)量分數(shù)).ρ５６碳酸氫鈉(CAS１４４Ｇ５５Ｇ８),＝２１６g/cm３,含量不低于９９８％(質(zhì)量分數(shù)).ρ５７二氯甲烷(CAS７５Ｇ０９Ｇ２),色譜純,＝１３２５ρg/cm,含量不低于９９９％(質(zhì)量分數(shù)),含５０mg/kg~３/１５０mgkg異戊烯穩(wěn)定劑.５８脂肪酸標準品,肉豆蔻酸(C１４H２８０２,CAS５７６７７Ｇ５２Ｇ８)、十五烷酸(C１５H３０O２,CAS１００２Ｇ８４Ｇ２)(內(nèi)標物)、棕櫚酸(C１６H３２O２,CAS５７Ｇ１０Ｇ３)、十七烷酸(C１７H３４O２,CAS５０６Ｇ１２Ｇ７)、硬脂酸(C１８H３６O２,CAS５７Ｇ１１Ｇ４)、油酸(C１８H３４０２,CAS１１２Ｇ８０Ｇ１)、亞油酸(C１８H３２O２,CAS６０Ｇ３３Ｇ３)、花生酸(C２０:０,CAS５０６Ｇ３０Ｇ９),純度不低于９９％(質(zhì)量分數(shù)).５９甲苯/甲醇共沸混合溶劑,將２７６mL甲苯(５２)置于１０００mL單標線容量瓶(６９)中,并用甲醇(５３)稀釋至１０００mL,制得甲苯/甲醇共沸混合溶劑.１??

NY/T４２２５—２０２２５１０飽和碳酸氫鈉溶液,稱?。叮礸碳酸氫鈉(５６),精確至０１g,置于５００mL廣口錐形燒瓶(６８)中,加入４００mL溫度為６０℃的蒸餾水,攪拌溶解冷卻后,制得飽和碳酸氫鈉溶液.５１１內(nèi)標十五烷酸溶液,準確稱取(１２５０±０００１)g的十五烷酸標準品,置于２５０mL單標線容量瓶(６９)中,并用甲苯/甲醇共沸混合溶劑(５９)稀釋至２５０mL,制得內(nèi)標十五烷酸溶液.６儀器設備實驗室常規(guī)儀器及以下儀器設備.６１實驗室開煉機.６２水浴鍋,(７５±０２)℃.６３電子天平,精確至０１mg.６４氣相色譜儀,帶有氫火焰離子化FID檢測器.６５蛇形回流冷凝器,長度為３００mm,磨口為２４/４０.６６圓底燒瓶,容量為１００mL,磨口為２４/４０.６７錐形分液漏斗,容量為２５０mL.６８廣口錐形燒瓶,容積為５００mL.６９單標線容量瓶,容量分別為５０mL、２５０mL和１０００mL.６１０高形燒杯,容量為１００mL.６１１玻璃止沸珠.６１２一次性無菌注射針管,規(guī)格為１０mL.６１３有機相濾膜,材質(zhì)為尼龍６６,孔徑為０４５μm.７試驗步驟警示———甲酯化萃取操作應在通風櫥內(nèi)進行.７１取樣和試樣制備按GB/T１５３４０的規(guī)定取樣并對生膠樣品進行均勻化.稱取均勻化樣品(１０±２)g,在()下２７±３℃通過實驗室開煉機(６１)過輥１０次;每次過輥時,應將膠片打卷或?qū)φ?調(diào)節(jié)輥距,使膠片最終厚度約２５mm,再剪成小細條(約１mm×１０mm)狀試樣待測備用.進行雙份平行測定.７２試樣的甲酯化反應準確稱取均勻化處理后的細條狀生膠試樣３０g(m０)(精確至０１mg),置于１００mL圓底燒瓶中,然后依次加入３個玻璃止沸珠()、６１１５５mL甲苯/甲醇共沸混合溶劑(５９)、１mL內(nèi)標十五烷酸溶液(５１１)和０５ml濃硫酸(５４),再將圓底燒瓶(６６)置于水浴鍋(６２)中并將其與蛇形回流冷凝器(６５)連接(調(diào)整冷凝水流速,以確?；亓魍耆?,打開水浴鍋使試樣溶液在７５℃下回流反應１８h,得到試樣的甲酯化溶液.回流冷凝器裝置如圖１所示.７３脂肪酸標準品的甲酯化反應準確稱取每種脂肪酸標準品各００５g(mi)(精確到０１mg),置于圓底燒瓶中作為校準標準品,然后依次加入標引序號說明:３個玻璃止沸珠(６１１５５mL甲苯/甲醇共沸混合溶劑１———冷凝水進口;２———冷凝水出口.)、(５９)、１mL內(nèi)標十五烷酸溶液(５１１)和０５mL濃硫酸圖１回流冷凝器裝置圖(５４),在７５℃下的水浴鍋內(nèi)回流反應１８h,得到校準標準２??NY/T４２２５—２０２２品混合物的甲酯化溶液.７４甲酯化產(chǎn)物的萃取將７２和７３所得到的甲酯化溶液分別轉(zhuǎn)移至高型燒杯(６１０)中,加熱濃縮至２０mL左右,加入６７５７１０mL飽和碳酸氫鈉溶液(５１０),搖勻倒入２５０mL錐形分液漏斗();將１０mL二氯甲烷()和２mL水加入燒杯(促進溶液快速萃取分層),潤洗后倒入分液漏斗.待溶液完全分層后,用干凈的１００mL高形燒杯回收底相溶液(P１),再次加入１０mL二氯甲烷和２mL水進行二次萃取,用同一只燒杯回收二次萃取溶液的底相溶液(P２),得到混合底相溶液(P１＋P２)后,再加入５g無水硫酸鈉(５５),旋轉(zhuǎn)燒杯確保水分被完全吸干.將脫水后的混合底相溶液轉(zhuǎn)移至５０mL單標線容量瓶(６９)中,使用二氯甲烷稀釋至刻度,靜置澄清后,用１０mL一次性無菌注射針管(６１２)抽取約９mL澄清液,取下注射針頭,換上０４５μm有機相濾膜(６１３),推動注射器,分別過濾并收集所得試樣與脂肪酸標準品的萃取待測溶液.７５氣相色譜分析７５１氣相色譜參考條件７５１１色譜柱,甲基聚硅氧烷非極性毛細管柱.７５１２載氣,氮氣,流速１mL/min,分流比２５∶１.７５１３進樣口溫度,２３０℃.７５１４檢測器溫度,２５０℃.７５１５柱溫箱溫度,初始溫度１５０℃,以２℃/min升溫至２１０℃后保持５min,再以５０℃/min升溫至２３０℃后保持５min.７５１６進樣量,１μL.７５２標準品的測定移?。瞞L校準標準品混合物萃取待測溶液(７４)至進樣瓶,按７５１的色譜條件進行氣相色譜檢測,得到內(nèi)標十五烷酸甲酯的峰面積(An),各個標準品脂肪酸甲酯的峰面積(Ai)及各脂肪酸標準品的相應出峰時間(見附錄A).７５３樣品的測定移?。瞞L試樣萃取待測溶液(７４)至進樣瓶,每個試樣萃取液使用氣相色譜法進行雙份平行測定,得到生膠試樣萃取溶液中內(nèi)標十五烷酸甲酯的峰面積(Bn),各個脂肪酸甲酯的峰面積(Bi).通過與校準標準品混合物圖譜比對定性,與內(nèi)標物十五烷酸的峰面積比對定量,計算出試樣中各個脂肪酸甲酯的含量(Wi).８結(jié)果表示８１標準品的校準響應因子按式()１計算各標準品脂肪酸甲酯的響應因子(Rfi).Rfi＝An×mi()１Ai×mn式中:Rfi———脂肪酸甲酯i的響應因子;An———校準標準品混合物萃取溶液中內(nèi)標十五烷酸甲酯的峰面積;mi———校準標準品混合物萃取溶液中脂肪酸甲酯i的質(zhì)量數(shù)值,單位為克();gAi———校準標準品混合物萃取溶液中脂肪酸甲酯i的峰面積;mn———校準標準品混合溶液中內(nèi)標十五烷酸甲酯的質(zhì)量數(shù)值,單位為克(g).８２試樣中每種脂肪酸的含量生膠試樣中脂肪酸i的含量(Wi),按式()２計算.Wi＝Bi×mn×Rfi()２Bn×m０式中:３??NY/T４２２５—２０２２Wi———生膠試樣中脂肪酸i的含量數(shù)值,單位為百分號(％);Bi———生膠試樣萃取溶液中脂肪酸甲酯i的峰面積;mn———生膠試樣萃取溶液中內(nèi)標十五烷酸甲酯的質(zhì)量數(shù)值,單位為克(g);Rfi———脂肪酸甲酯i的響應因子;Bn———生膠試樣萃取溶液中內(nèi)標十五烷酸甲酯的峰面積;m０———生膠試樣的質(zhì)量數(shù)值,單位為克(g).雙份平行測定結(jié)果的相對偏差不應大于１０％.試驗結(jié)果以雙份平行測定結(jié)果的平均值表示,數(shù)值精確至小數(shù)點后兩位.８３試樣中總脂肪酸的含量生膠試樣中脂肪酸的總含量(W),按式()３計算.∑Wi()３W＝式中:W———生膠試樣中脂肪酸的總含量數(shù)值,單位為百分號(％);Wi———生膠試樣中脂肪酸i的含量數(shù)值,單位為百分號(％).雙份平行測定結(jié)果的相對偏差不應大于１０％.試驗結(jié)果以雙份平行測定結(jié)果的平均值表示,數(shù)值精確至小數(shù)點后兩位.９試驗報告試驗報告應包括下列內(nèi)容:a)本文件編號;b)標識樣品的所有詳細內(nèi)容;c)測定結(jié)果;d)可能影響試驗結(jié)果的任何異常現(xiàn)象;e)試驗日期.４??

NY/T４２２５—２０２２附錄A(資料性)８種脂肪酸甲酯標準溶液參考圖譜標引序號說明:１———肉豆蔻酸;２———十五烷酸;３———棕櫚酸;４———十七烷酸;５———亞油酸;６———油酸;７———硬脂酸;８———花生酸.圖A１８種脂肪酸甲酯標準溶液參考色譜圖５??NY/T４２２５—２０２２參考文獻[]１IchiharaK,FukubayashiYPreparationoffattyacidmethylestersforgasＧliquidchromatograp