微生物學(xué)檢驗副溶血弧菌

微生物學(xué)檢驗副溶血弧菌第1頁/共27頁食物中毒微生物檢驗及副溶血弧菌的鑒定第2頁/共27頁實驗要求食物中毒的微生物檢驗掌握副溶血弧菌的生物特性、細菌形態(tài)、生化反應(yīng)及鑒定方法。第3頁/共27頁材料

剩余可疑中毒食物、嘔吐物、糞便中國蘭平板血平板雙糖培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基弧菌微量生化反應(yīng)編碼鑒定管第4頁/共27頁細菌性食物中毒概述

中毒發(fā)生的原因（三個環(huán)節(jié)）1食品被致病菌污染2食品中污染的致病菌有繁殖的機會3食用前未加熱或未徹底加熱第5頁/共27頁標(biāo)本采集可疑食物：采取中毒病人吃過的剩余可疑中毒食物，剩余中毒食物可用滅菌盛裝容器盛裝。也可采可疑食物接觸過的工具、容器涂抹標(biāo)本。原包裝物和半成品或原料均可采樣。做微生物檢驗樣品要用滅菌容器，以無菌手續(xù)采樣。其樣品數(shù)量為：肉及肉制品:從不同部位取500克以上；桶裝食品從上、中、下部取500克以上；腌漬食品采取100—200ml液汁，放入另一容器；魚500克以下，大魚可從2—3個不同部位取樣；流體、半流體食品在充分攪拌后取200ml；洗滌水每份100—200ml。

第6頁/共27頁標(biāo)本采集排泄物：采取何種樣品應(yīng)根據(jù)病人的臨床表現(xiàn)及初步可疑病因診斷檢驗項目而定。吐泄物每份取50—100克，作微生物檢驗時樣品量可為1—5克，或從肛門直腸采樣；洗胃液還要加大樣品量.第7頁/共27頁標(biāo)本采集

血液或尿液：懷疑為感染型細菌性食物中毒時，在急性期可采血進行致病菌檢驗，分離血清，再從恢復(fù)期同一中毒病人采血液分離血清，與檢出可疑病原菌作血清凝集試驗。血樣每份2—5ml。可疑為化學(xué)性食物中毒時（為砷、汞、鉛等）應(yīng)采取病人的尿液送檢。尿液每份100—200ml；如了解一日排毒量，則應(yīng)記錄24小時排尿量。

第8頁/共27頁標(biāo)本采集

解剖標(biāo)本：必要時，征得病人家屬同意，對中毒死亡者作尸體解剖，采取內(nèi)臟標(biāo)本送檢，進行病理、毒物及微生物檢驗。第9頁/共27頁標(biāo)本采集

帶菌者檢查：對食品生產(chǎn)經(jīng)營人員和直接接觸食品的人員作可疑帶菌檢查，可取糞便、鼻咽腔分泌物以及皮膚涂抹等。第10頁/共27頁標(biāo)本采集－樣品送檢

檢樣標(biāo)明樣品名稱，送檢目的、檢驗項目、送檢材料要注明件數(shù)、樣品量、采樣條件、時間、容器滅菌及清潔方法，食物中毒發(fā)生情況及可疑原因等。填寫送檢單。檢驗室接到檢樣后，要檢查樣品及送檢資料后簽字，注明接到時間，立即進行檢驗。檢驗人員根據(jù)檢驗中的發(fā)現(xiàn)，可進行送檢項目外的項目的檢驗。第11頁/共27頁

細菌性食物中毒：①致病菌檢驗：對中毒食物、病人排泄物、血液進行檢驗，作為確定診斷的依據(jù)，對環(huán)境、設(shè)備、工器具、包裝材料等的檢驗，也是診斷的參考依據(jù)，以確定污染環(huán)節(jié)、原因、條件等。②致病菌計數(shù)檢驗：有些食物中毒原因菌的檢驗，需對可疑中毒食品中的活菌數(shù)做測定。

如臘樣芽胞桿菌，只有食品中含菌量≥105個/克時，才能引起食物中毒，病原性大腸埃希氏菌也應(yīng)做“MPN”測定；產(chǎn)氣莢膜梭菌的重點是活菌計數(shù)及確證試驗；葡萄球菌也應(yīng)做菌

數(shù)檢驗。對國際上尚未被公認的食物中毒病原菌如變形桿菌屬，更需要做計數(shù)檢驗。

標(biāo)本采集－樣品送檢

第12頁/共27頁病例2010年10月16日下午4點10分，右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診科接到右江礦務(wù)局出診電話，現(xiàn)有60多人出現(xiàn)腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀

，要求我院馬上出診，對病人進行就治。經(jīng)了解病人在食堂開飯，吃了大量的豆芽及凍魚。我院的治療方案：洗胃，大量輸液，重者血透。第13頁/共27頁第一天實驗操作食物中毒標(biāo)本血平板、SS平板/人老師發(fā)下菌種：1、觀察細菌形態(tài)2、氧化酶試驗3、雙糖4、半固體5、弧菌微量生化反應(yīng)管2人第14頁/共27頁形態(tài)與染色

1、革蘭氏陰性無芽胞多形態(tài)桿菌，單端鞭毛、兩端濃染。桿狀、棒狀、甚至球狀、絲狀等第15頁/共27頁培養(yǎng)特性：1、需氧或兼性厭氧：生長最好2、在2～３%NaCL培養(yǎng)基中生長最好，無鹽或食鹽>10%不能生長。3、最適溫度36℃，PH7.5—7.8（7.7）4、在專用選擇性平板上，菌落呈圓形凸起，混濁不透明，表面光滑，較濕潤，邊緣不整齊。5、血平板：可見溶血環(huán)。

第16頁/共27頁（三）生化特性

1、分解GLU產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖，蔗糖。

2、H2S（－）、V-P（－）、靛基質(zhì)（＋）、精氨酸（－）

3、甲基紅（＋）、賴氨酸（＋）、溶血＋/-第17頁/共27頁細菌運動試驗

在新鮮的標(biāo)本中，細菌游動活躍，呈流星樣穿梭。取新鮮的標(biāo)本，壓滴法觀察細菌運動情況。第18頁/共27頁三、檢驗操作要點

采樣→樣品處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→3.5%氯化鈉雙糖鐵培養(yǎng)基→嗜鹽性試驗→生化鑒定→動物試驗→結(jié)果報告第19頁/共27頁1、采樣：患者糞便、嘔吐物、可凝食品。從海產(chǎn)品的體表面，腸內(nèi)容物，鰓等取樣包裝物，炊具用具?？?，不宜低溫保存。2、增菌培養(yǎng)：Nacl結(jié)晶紫增菌液，37℃8～16小時。第20頁/共27頁3、分離培養(yǎng)：Nacl蔗糖平板：圓形，半透明或不透明，無粘性，(綠)蘭色，直徑2—4mm

嗜鹽選擇性平板：直徑2.5mm，圓整或不齊，隆起混濁，無粘性，無色，濕潤。4、3.5%Nacl-TSI培養(yǎng)37℃24小時5、鏡檢：應(yīng)為革蘭氏陰性，無芽胞多形態(tài)，兩端濃染。第21頁/共27頁第22頁/共27頁

6、嗜鹽性試驗：

將可疑培養(yǎng)物接種于不同鹽濃度的鹽胨水中，37℃24小時，觀查生長情況。鹽含量0、3、7、9、11%

，在3～7%生長良好。０３７９11第23頁/共27頁副溶血弧菌的生化特性葡V葡磷I蛋水蔗甘阿肌賴賴對精精對0%3%6%8%10%＋－＋－＋＋/－－/＋＋－－＋＋－－A液B液靛基質(zhì)第24頁/共27頁實驗報告實驗題目實驗?zāi)康膶嶒炦^程（接種平板、細菌菌落形態(tài)、細菌形態(tài)、生化