微生物的生長新

微生物的生長新第1頁/共91頁2第5章微生物的生長5.1微生物的生長及其特性5.2微生物的生存因子5.3其他不利環(huán)境因子對微生物的影響第2頁/共91頁35.1.1生長與繁殖的概念何謂生長？同化作用大于異化作用時，細胞質(zhì)的量增加，表現(xiàn)在細胞體積或重量的不斷增加，這種現(xiàn)象稱生長何謂繁殖？生長一定程度后細胞分裂，這就是細菌的繁殖5.1微生物的生長及其特性第3頁/共91頁41單細胞微生物生長：細胞物質(zhì)增加，體積增大繁殖：細胞數(shù)目的增加生長：細胞物質(zhì)增加，體積增大，細胞數(shù)目增加

繁殖：生命個體數(shù)目的增加5.1.1生長與繁殖的概念2

多細胞微生物第4頁/共91頁5個體的生長和繁殖體現(xiàn)為群體的生長（微生物重量或數(shù)目的增加）

群體生長＝個體生長＋個體繁殖在微生物學中“只有群體的重復(fù)”才更有意義，因此“生長”一般指群體生長第5頁/共91頁61、間歇培養(yǎng)（Batchcultivation）

和生長曲線（growthcurve）接種間歇培養(yǎng)：將一定量細菌接種于封閉的、一定量的液體培養(yǎng)基內(nèi)，在一定條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)過程不投加或取出任何東西。這種培養(yǎng)方式也叫分批培養(yǎng)。生長曲線：細胞量隨時間的變化曲線稱生長曲線5.1.2細菌的生長特性第6頁/共91頁7總細胞數(shù)細菌的典型生長曲線：以時間為橫坐標，以細菌數(shù)為縱坐標，做出一條菌數(shù)隨時間變化的曲線，即為生長曲線

活細胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細胞個數(shù)第7頁/共91頁800時間細菌數(shù)生長速度緩慢期對數(shù)期穩(wěn)定期衰老期活菌數(shù)總菌數(shù)細菌生長曲線（按細菌數(shù)目的對數(shù)繪制）第8頁/共91頁9時間活細菌重量生長率上升階段生長率下降階段內(nèi)源呼吸階段細菌生長曲線(按細菌重量繪制)第9頁/共91頁10停滯期、適應(yīng)期（lagphase）影響停滯期長短的因素：

?接種齡：種子(inoculum)處于什么生長期Ⅰ、Ⅳ>Ⅲ>Ⅱ

?接種量：即初期微生物濃度與基質(zhì)濃度的比

?培養(yǎng)基成分：總細胞數(shù)活細胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細胞個數(shù)特點：生長速率常數(shù)近于零，數(shù)目變化不大細胞形態(tài)變大

rRNA含量增高合成代謝較活躍第10頁/共91頁11產(chǎn)生停滯期的原因：

?缺乏分解有關(guān)基質(zhì)的酶

?缺乏充足的代謝中間產(chǎn)物總細胞數(shù)活細胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細胞個數(shù)停滯期、適應(yīng)期（lagphase）第11頁/共91頁122）指數(shù)期（exponentialphase）對數(shù)期（stationaryphase）最短總細胞數(shù)活細胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細胞個數(shù)細胞數(shù)(量)以指數(shù)形式增加的時間段

特點：

?生長速率最大,世代時間（generationtime）倍加時間（doublingtime）?酶系活躍、代謝旺盛?細胞進行平衡生長，體內(nèi)各成分最為均勻

教學實驗和發(fā)酵工業(yè)都用對數(shù)期的細胞做實驗材料,或“種子”第12頁/共91頁13代時(generationtime):細胞數(shù)目增長1倍所需時間

Nt=2nNo

No

——起始細胞數(shù)

Nt——t時細胞數(shù)

n——

世代數(shù)

lgNt=lgNo+nlg2

n=(lgNt-lgNo)/lg2k=n/t平均生長速度：世代數(shù)/小時

g=t/n

平均代時(繁殖一代所需時間）指數(shù)期的數(shù)學描述第13頁/共91頁14某些微生物的代時細菌：大腸桿菌40C0.35h

枯草芽孢桿菌40C0.43h藻類：蛋白核小球藻25C7.75h原生動物：尾狀核草履蟲26C10.4h真菌:釀酒酵母30C2h第14頁/共91頁153）穩(wěn)定期（stationaryphase）：恒定期、最高生長期、生長下降期特點：凈增長速度為零繁殖與死亡速度相等正生長與負生長相等出現(xiàn)穩(wěn)定期的原因：

營養(yǎng)物尤其是生長因子耗盡營養(yǎng)物比例失調(diào)代謝物的積累

pH、DO、氧化還原電位的變化第15頁/共91頁164）衰亡期（declinephase,deathphase）內(nèi)源呼吸期（endogenousrespirationphase）內(nèi)源呼吸:體內(nèi)貯藏物質(zhì)酶等一部分細胞物質(zhì)的氧化特點:細胞形態(tài)多型化細胞會發(fā)生自溶現(xiàn)象(autolysis)

出現(xiàn)死亡期的原因：營養(yǎng)物不足（代謝產(chǎn)物的積累）外界條件惡化總細胞數(shù)活細胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細胞個數(shù)第一節(jié)細菌的生長及其特性第16頁/共91頁175.1.3生長研究微生物生長的方法1同步培養(yǎng)是使群體細胞能處于同一生長階段，并同時進行分裂的生長方式是將一定量的微生物接種在一個封閉的、盛有一定量液體培養(yǎng)基的容器中，不補加新營養(yǎng)物質(zhì),不排出產(chǎn)物,保持一定的溫度、PH和溶解氧，微生物在其中生長,也叫間歇培養(yǎng)2

分批培養(yǎng)第17頁/共91頁185.1.3生長研究微生物生長的方法3連續(xù)培養(yǎng)在微生物的整個培養(yǎng)期間，通過一定的方式使微生物能以恒定的比生長速率生長并能持續(xù)生長下去的一種培養(yǎng)方法恒化器：營養(yǎng)物質(zhì)濃度恒定恒濁器：光電系統(tǒng)控制培養(yǎng)中菌體濃度恒定第18頁/共91頁19連續(xù)培養(yǎng)示意裝置圖第19頁/共91頁20連續(xù)培養(yǎng)的稀釋率例:20ml/h的流速連續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)液體積1000ml,求稀釋率:D=20ml/h1000ml=0.02/h稀釋率：D=f/vF——培養(yǎng)基流速（ml/h）V——

培養(yǎng)液體積（ml）第20頁/共91頁21連續(xù)培養(yǎng)廣泛用于﹡酵母菌的生產(chǎn)(含糖廢液)﹡乙醇發(fā)酵(糖蜜)﹡乳酸發(fā)酵﹡石油脫臘﹡污水處理第21頁/共91頁22

菌種退化、設(shè)備要求高、原料利用略低、回用問題連續(xù)培養(yǎng)優(yōu)點與缺點優(yōu)點:﹡簡化了裝料、滅菌（節(jié)省動力）、清洗等（蒸汽、人力）單元操作；﹡減少非生產(chǎn)時間；提高設(shè)備利用率；﹡便于自動控制﹡產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定缺點：第22頁/共91頁23（活性污泥等的混合微生物群，也有類似的生長曲線)

水處理中如何避免延滯期對數(shù)期或代謝旺盛的污泥增加接種量污泥馴化（以后詳細講）

微生物維持到對數(shù)期可獲得高的處理能力，即分解速度，但處理效果不一定好菌活力大，不易凝聚和沉淀需要充足的營養(yǎng)物，故得不到好的水質(zhì)第一節(jié)細菌的生長及其特性5.1.4細菌的生長曲線與廢水的生物處理第23頁/共91頁24處于穩(wěn)定期污泥雖然生長速度有所下降，但有一定的代謝活性，絮凝沉降性能好。

故傳統(tǒng)的活性污泥法常運行在這個范圍

衰亡期只出現(xiàn)在某些特殊的水處理場合

如延時曝氣及污泥消化第一節(jié)細菌的生長及其特性第24頁/共91頁25食料/微生物代謝速率內(nèi)源呼吸階段生長率下降階段生長率上升階段（沉降性能好）（沉降性能差）大多數(shù)活性污泥處理系統(tǒng)運行范圍延時曝氣，污泥消化注意：各個階段的食物/菌量比(F/M)發(fā)生變化，相當于活性污泥系統(tǒng)的污泥負荷第一節(jié)細菌的生長及其特性微生物代謝速率與食料/微生物的關(guān)系第25頁/共91頁26

此法通常用來測定樣品中所含細菌、孢子、酵母菌等單細胞微生物的數(shù)量。計數(shù)法又分為直接計數(shù)和間接計數(shù)兩類。1、計數(shù)法5.1.5微生物生長量的測定方法第26頁/共91頁27這類方法是利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。此法的缺點不能區(qū)分死菌與活菌﹡

直接計數(shù)每毫升原液所含細菌數(shù)

＝每小格平均細菌數(shù)×400×l000×稀釋倍數(shù)1、計數(shù)法第27頁/共91頁28第28頁/共91頁29第29頁/共91頁30此法又稱活菌計數(shù)法，其原理是每個活細菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落﹡間接計數(shù)每毫升原菌液活菌數(shù)＝同一稀釋度三個以上重復(fù)平皿菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)1、計數(shù)法第30頁/共91頁31第31頁/共91頁32﹡例:稀釋度10-6/ml,

形成150個菌落,即1.5x108/ml細胞凝聚不能有效地分散平板計數(shù)：﹡稀釋樣品,涂于平板表面,通過計算菌落數(shù)即可知道樣品中活菌數(shù).﹡實驗要求稀釋度:30-300個菌落/皿﹡平板計數(shù)得到結(jié)果稱為菌落形成單位CFU(colonyformingunit)﹡下列因素導(dǎo)致計數(shù)偏低不能保證每個菌落來源于一個細胞第32頁/共91頁33?然后再把膜放到具有培養(yǎng)液的墊上或培養(yǎng)基上濾膜培養(yǎng)：?膜過濾,截流細菌?培養(yǎng)一定時間計算菌落第33頁/共91頁34實驗過程0.5um第34頁/共91頁35濾膜培養(yǎng)應(yīng)用特定的培養(yǎng)基,可得到選擇的微生物糞便大腸桿菌培養(yǎng)基麥芽汁瓊脂長出酵母和霉菌遠藤氏瓊脂普通培養(yǎng)基第35頁/共91頁36﹡

DNA含量

此法的原理是根據(jù)每個細胞有一定的重量而設(shè)計的。它可以用于單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定﹡微生物濕重﹡微生物干重﹡蛋白質(zhì)總量2、重量法第36頁/共91頁37蛋白質(zhì)總量＝含氮量×6.25蛋白質(zhì)總量細胞總量＝蛋白質(zhì)總量÷(50%～80%(或65%))≈蛋白質(zhì)總量×1.54DNA含量

核酸DNA是微生物的重要遺傳物質(zhì)，每個細菌的DNA含量相當恒定，平均為8.4×10-5ng.

第37頁/共91頁38§5.2

微生物的生存因子◆

溫度對微生物生長的影響：酶的活性；細胞膜的流動性；物質(zhì)的溶解度◆微生物對溫度變化很敏感◆高過極限導(dǎo)致死亡：酶、運輸載體被破壞，膜崩解；低溫：功能受到影響，但化學組分和結(jié)構(gòu)不一定全受到影響5.2.1溫度第38頁/共91頁39◆微生物有各自的最低、最適和最高生長溫度范圍◆

據(jù)微生物對溫度的生長需求，將微生物分四大類，嗜冷菌、嗜中溫菌、嗜熱菌和嗜超熱菌5.2.1溫度基本溫度

cardinaltemperature：最低溫度最適溫度最高溫度第39頁/共91頁40

一種生活在蚊子消化道內(nèi)的原生動物，22-27C在簡單培養(yǎng)基中就可以生長,但在33-34C下,必須向培養(yǎng)基中加金屬、氨基酸、維生素才能生長。一種微生物三個基本溫度并非不變，依賴于其他因素：5.2.1溫度第40頁/共91頁41溫度對生長速度影響最適溫度靠近最高溫度,而非最低溫度第41頁/共91頁42微生物生長溫度范圍舉例微生物

最低溫度

最適溫度

最高溫度嗜冷芽孢桿菌

-1023-2428-30

大腸桿菌

103744嗜酸熱硫化葉菌

608085卓越聚球藍細菌

707984假絲酵母

04-1515釀酒酵母

1-32840犁型四膜蟲

6-720-2533

第42頁/共91頁43五種類型微生物生長溫度和最適溫度第43頁/共91頁44嗜冷菌

psychrophile﹡來源：海洋近年來在南極洲發(fā)現(xiàn)古生菌產(chǎn)甲烷菌基本特征：﹡

0oC可生長﹡最適生長溫度等于、低于15C﹡最高生長溫度20C﹡細胞膜含有大量的不飽和脂肪酸第44頁/共91頁45兼性嗜冷菌

pschrotroph﹡

0-7C生長﹡最適生長溫度20-30C﹡最高生長溫度35C﹡污染冷凍食品基本特征：第45頁/共91頁46嗜溫菌

mesophile﹡最低生長溫度15-20C生長﹡最適生長溫度20-45C﹡最高生長溫度約45C基本特征：大多數(shù)微生物屬于這個范圍，人類致病菌都是嗜溫菌，宿主環(huán)境37C第46頁/共91頁47嗜熱菌

thermophile具有高溫下發(fā)揮功能的熱穩(wěn)定酶和蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，細胞膜脂類物質(zhì)飽和度高（相比嗜溫菌）基本特征：﹡最低生長溫度約45C生長﹡最適生長溫度55-65C﹡最高生長溫度

70C﹡堆肥、自我升溫的干草堆、熱水管道、溫泉等處生長第47頁/共91頁48超嗜熱菌

hyperthermophile﹡低于55C通常不能生長﹡少數(shù)能在90C以上溫度生長；﹡80-113C下生長的原始生物成為超嗜熱菌基本特征：第48頁/共91頁49100C以上溫度條件下的微生物有證據(jù)表明，113C下生長繁殖；很可能在更高的溫度下生長繁殖；265p/460C海水不沸騰超嗜熱菌研究科學和應(yīng)用價值極大第49頁/共91頁50細菌：中性或偏堿性pH6.5-7.5放線菌：中性偏堿性pH7.0-8.0酵母菌霉菌：酸性pH5.0-6.0污水凈化處理：瀑氣池pH

6.5—8.5有機固體廢物：

pH

5—8

嗜酸菌acidophilepH0-5.5

嗜中性菌neutrophilepH5.5-8.0

嗜堿菌alkalophilepH8.5-11.5每種微生物都有其生長pH范圍和最適pH5.2.2pH第50頁/共91頁51一般好氧微生物：0.3—0.4伏，〉0.1伏兼性厭氧：〉0.1伏，好氧；〈0.1伏，厭氧專性厭氧：-0.2—-0.25伏，產(chǎn)甲烷菌：-0.3—-0.4伏影響因素：氧分壓環(huán)境中的pH

可用一些還原劑控制5.2.3氧化還原電位第51頁/共91頁521專性好氧微生物:氧分壓為0.2個大氣壓2微量好氧微生物:氧分壓為0.003-0.2個大氣壓3耐氧厭氧微生物：4兼性厭氧微生物：5厭氧微生物：氧分壓小于0.005個大氣壓5.2.4溶解氧5.2.5太陽輻射5.2.6水的活度與滲透壓5.2.7表面張力第52頁/共91頁53§5.3其它不利因素對微生物影響（2）電離輻射：能使被照射的物質(zhì)產(chǎn)生電離作用1紫外輻射和電離輻射（1）紫外輻射●

以260nm左右紫外線的殺菌力最強●

殺菌機理是作用核酸●

穿透力差●

光復(fù)活現(xiàn)象輻射機理引起水分子的分解5.3.1物理因素第53頁/共91頁54

極端高度：殺死微生物極端低溫：抑制微生物生長應(yīng)用：高溫殺菌2超聲波：頻率大于20,000赫茲，人耳聽不見●具有強烈的生物學作用，幾乎所有的細菌都能被超聲波破壞●

殺菌機理●應(yīng)用3極端溫度:超高溫、超低溫,主指超高溫的影響4干燥第54頁/共91頁551重金屬2極端pH3若干有機物

醇、醛和表面活性劑4抗生素對微生物的影響5.3.2化學因素對微生物的影響第55頁/共91頁56微生物的分離和純培養(yǎng)(供實驗課)無菌技術(shù)用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)單細胞(單孢子)分離選擇培養(yǎng)分離二元培養(yǎng)物微生物的保藏技術(shù)

第56頁/共91頁57無菌技術(shù)

微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且無處不在。因此，在微生物的研究及應(yīng)用中，不僅需要通過分離純化技術(shù)從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物，而且還必須隨時注意保持微生物純培養(yǎng)物的“純潔”，防止其他微生物的混入。在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時防止其被其他微生物污染的技術(shù)被稱為無菌技術(shù)(aseptictechnique)，它是保證微生物學研究正常進行的關(guān)鍵。

第57頁/共91頁58微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌①試管、玻璃燒瓶、平皿(culturedish，petridish)等是最為常用的培養(yǎng)微生物的器具，在使用前必須先行滅菌，使容器中不含任何生物。②培養(yǎng)微生物的營養(yǎng)物質(zhì)[稱為培養(yǎng)基(culturemedium)]可以加到器皿中后一起滅菌，也可在單獨滅菌后加到無菌的器具中。第58頁/共91頁59③最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。④有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌第59頁/共91頁60⑤為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。⑥平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。第60頁/共91頁61接種操作用接種環(huán)或接種針分離微生物，或在無菌條件下把微生物由一個培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)接到另一個培養(yǎng)容器進行培養(yǎng)，是微生物學研究中最常用的基本操作。由于打開器皿就可能引起器皿內(nèi)部被環(huán)境中的其他微生物污染，因此微生物實驗的所有操作均應(yīng)在無菌條件下進行，其要點是在火焰附近進行熟練的無菌操作，或在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進行操作第61頁/共91頁62用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)

不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征，可以成為對該微生物進行分類、鑒定的重要依據(jù)。大多數(shù)細菌、酵母菌，以及許多真菌和單細胞藻類能在固體培養(yǎng)基上形成孤立的菌落，采用適宜的平板分離法很容易得到純培養(yǎng)第62頁/共91頁63所謂平板，即培養(yǎng)平板(cultureplate)的簡稱，它是指熔化的固體培養(yǎng)基倒入無菌平皿，冷卻凝固后，盛有固體培養(yǎng)基的平皿。固體培養(yǎng)方法可將單個微生物分離和固定在固體培養(yǎng)基表面或里面。第63頁/共91頁64固體培養(yǎng)基(用瓊脂或其他凝膠物質(zhì)固化的培養(yǎng)基)，可使每個孤立的活微生物體生長、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分離、培養(yǎng)微生物的固體培養(yǎng)基是瓊脂固體培養(yǎng)基平板。Koch建立的平板分離微生物純培養(yǎng)的技術(shù)簡便易行，100多年來一直是各種菌種分離的最常用手段。第64頁/共91頁65稀釋倒平板法(pourplatemethod)

涂布平板法(spreadplatemethod)

平板劃線分離法(streakplatemethod)稀釋搖管法(dilutionshakeculturemethod)第65頁/共91頁66稀釋倒平板法

待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋，取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間，可能出現(xiàn)在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。第66頁/共91頁67涂布平板法在微生物學研究中更常用的純種分離方法是涂布平板法。其做法是先將已熔化的培養(yǎng)基倒人無菌平皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個菌落。第67頁/共91頁68第68頁/共91頁69第69頁/共91頁70平板劃線分離法

用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。第70頁/共91頁71第71頁/共91頁72第72頁/共91頁73第73頁/共91頁74第74頁/共91頁75稀釋搖管法

對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養(yǎng)的分離則可采用稀釋搖管培養(yǎng)法進行。將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱使瓊脂熔化后，冷卻并保持在50℃左右，用這些試管進行梯度稀釋待分離材料，試管均勻，冷凝，傾注一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養(yǎng)基和空氣隔開。培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間，挑取和移植單菌落。第75頁/共91頁76第76頁/共91頁77用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)

接種物在液體培養(yǎng)基中依序稀釋，以達高度稀釋的效果，使一支試管中分配不到一個微生物。如果稀釋后的多數(shù)試管中沒有微生物生長，則有微生物生長的試管得到的培養(yǎng)物可能就是純培養(yǎng)物。采用稀釋法進行液體分離，必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，大多數(shù)(一般應(yīng)超過95%)表現(xiàn)為不生長。第77頁/共91頁78單細胞(單孢子)分離

采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)，稱為單細胞(單孢子)分離法。單細胞分離法的難度與細胞或個體的大小成反比，較大的微生物如藻類、原生動物較容易，個體很小的細菌則較難。單細胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求，多限于高度專業(yè)化的科學研究中采用。

第78頁/共91頁79選擇培養(yǎng)分離如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設(shè)計一套特定環(huán)境使之特別適合這種微生物的生長，因而能夠從自然界混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來，即使在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。這種通過選擇培養(yǎng)進行微生物純培養(yǎng)分離的技術(shù)稱為選擇培養(yǎng)分離。可利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離或富集培養(yǎng)。

第79頁/共91頁80利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離主要根據(jù)待分離微生物的特點選擇不同的培養(yǎng)條件,得到純培養(yǎng)物。富集培養(yǎng)主要是指利用不同微生物間生命活動特點的不同，制定特定的環(huán)境條件，使僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集條件可據(jù)分離的微生物的特點從物理、化學、生物及綜合多個方面進行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等等許多方面。

第80頁/共91頁81二元培養(yǎng)物

只有一種微生物的培養(yǎng)物稱為純培養(yǎng)物，含有二種以上微生物的培養(yǎng)物稱為混合培養(yǎng)物，而如果培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識地保持二者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物稱為二元培養(yǎng)物。例如二元培養(yǎng)物是保存病毒的最有效途徑。對于這些生物，二元培養(yǎng)物是在實驗室控制條件下可能達到的最接近于純培養(yǎng)的培養(yǎng)方法。第81頁/共91頁82微生物的保藏技術(shù)

傳代培養(yǎng)保藏冷凍保藏干燥保藏法 第82頁/共91頁83通過分離純化得到的微生物純培養(yǎng)物，必須通過各種保藏技術(shù)使其在一定時間內(nèi)不死亡，不會被其他微生物污染，不會因發(fā)生變異而丟失重要的生物學性狀，否則就無法真正保證微生物研究和應(yīng)用工作的順利進