(56)-11.5.3染色體疾病的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

臨床分子生物學(xué)與檢驗(yàn)11.5.3染色體疾病的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)1.FISH熒光原位雜交檢測技術(shù)它是分子生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)結(jié)合的一種原位雜交技術(shù)，在染色體核型分析基礎(chǔ)上進(jìn)一步針對特定的核酸分子序列進(jìn)行分析原理：通過觀察熒光信號在染色體上的位置來反映相應(yīng)基因的情況。示例：左圖是利用21號染色體特異性探針對一位高齡妊娠婦女進(jìn)行產(chǎn)前診斷，用沒有培養(yǎng)的羊水細(xì)胞進(jìn)行熒光原位雜交,圖上顯示檢測的細(xì)胞都有3個雜交信號,后來經(jīng)選擇性人工流產(chǎn)后確診為21三體綜合征的患兒。2.MLPA技術(shù)多重連接依賴性探針擴(kuò)增檢測技術(shù)它是利用多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)，檢測與探針雜交和連接反應(yīng)的組合，可以在同一反應(yīng)管內(nèi)同時檢測被檢樣本40-50個不同的DNA或RNA序列的拷貝數(shù)變化1.變性&2雜交PCR上游引物雜交序列PCR下游引物上下游雜交探針彼此相鄰，由熱穩(wěn)定的連接酶連接。3.連接目標(biāo)序列BX5’5’3’YX

5’5’3’目標(biāo)序列AY5’3’目標(biāo)序列A目標(biāo)序列B5’3’間隔序列(對于不同探針長短不同)4.PCR每種探針的擴(kuò)增產(chǎn)物都有自己特異的標(biāo)志性長度（130-480bp）。5’3’5’3’XY5’3’XY5’3’所有連接產(chǎn)物均由同一對引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。5.毛細(xì)管電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物

通過與對照DNA標(biāo)本比較相同片段長度峰高的不同來確定目標(biāo)序列的對拷貝數(shù)變化。Schouten,J.P.etal.Nucl.AcidRes.30,e57.5’5’5’特點(diǎn)：靈敏度高特異性和重現(xiàn)性高檢測分辨率寬方法簡便有比較高的檢測通量3.CGH比較基因組雜交檢測技術(shù)只需要一次雜交就可以對細(xì)胞全套染色體或整個基因組DNA拷貝數(shù)異常進(jìn)行全面的監(jiān)測，同時對異常位點(diǎn)進(jìn)行初步染色體定位它是在熒光原位雜交基礎(chǔ)上，結(jié)合消減雜交技術(shù)而發(fā)展起來的技術(shù)，主要用于腫瘤的檢測及其基因組分析優(yōu)點(diǎn)：快捷檢測中期、間期基因組，不需預(yù)先知道DNA發(fā)生改變的部位，一次實(shí)驗(yàn)就可以檢出待測樣本整個基因組拷貝數(shù)的增減。缺點(diǎn)：精度有限,對微小的擴(kuò)增或缺失檢測不出,僅僅適用于對整個基因組進(jìn)行篩查；也無法發(fā)現(xiàn)平衡染色體易位。Array-CGH4.引物原位雜交技術(shù)（PRINS技術(shù)）