高效液相色譜儀使用與操作規(guī)程(學(xué)生用)及論大學(xué)生寫作能力

高效液相色譜儀使用與操作規(guī)程(學(xué)生用)高效液相色譜儀

使用與操作規(guī)程Agilent1100HPLCAgilent1100系統(tǒng)組成本系統(tǒng)由溶劑輸送泵（四元泵，標(biāo)配真空脫氣機(jī)）Rheodyne7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥柱溫箱VWD紫外-可見檢測(cè)器Agilent1100色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、不間斷電源等輔助設(shè)備。第一步、準(zhǔn)備1、準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min。2、根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環(huán)。3、配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾。（注意腐蝕性與有機(jī)系的的溶劑）4、檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。接通電源，依次開啟不間斷電源、真空脫氣機(jī)、四元泵、檢測(cè)器，待泵和檢測(cè)器自檢結(jié)束后，打開電腦顯示器、主機(jī)，最后打開色譜工作站。一）參數(shù)設(shè)定1、波長(zhǎng)設(shè)定：2、流速設(shè)定：3、流動(dòng)相比例設(shè)定：4、梯度設(shè)定：

二）更換流動(dòng)相并排氣泡1：將吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中；2：順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)泵的排液閥180°，打開排液閥；3：運(yùn)行泵，泵以3ml/min的流速?zèng)_洗5min（可設(shè)定）后泵流速設(shè)為0ml/min；4：將排液閥逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)適度擰緊，關(guān)閉排液閥。5：如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。三）平衡系統(tǒng)用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積的流動(dòng)相。檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)不超過(guò)1MPa。如超過(guò)則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按檢查管路后再操作。觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移0.01mV/min，噪聲為0.001mV時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。四）進(jìn)樣1、進(jìn)樣前按檢測(cè)器[balance]鍵調(diào)零，按軟件中[零點(diǎn)校正]按鈕校正基線零點(diǎn)，再按一下[查看基線]按鈕使其彈起。2、用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量即可以進(jìn)樣了。3、含量測(cè)定的對(duì)照溶液和樣品供試溶液每份至少注樣2次。五）譜圖的判斷及結(jié)果計(jì)算1、系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：①分離度：一般應(yīng)≥1.5。②重復(fù)性：兩次譜圖的峰面積應(yīng)相差不的過(guò)1%。③理論塔板數(shù)：應(yīng)≥規(guī)定的理論塔板數(shù)目。④拖尾因子：0.95＜T＜1.05⑤保留時(shí)間：對(duì)照與樣品的主成分保留時(shí)間應(yīng)大致一致。⑥RSD：精密度＜3%。2、結(jié)果計(jì)算①外標(biāo)法：②內(nèi)標(biāo)法：第三步、清洗管路及關(guān)機(jī)1、分析完畢后，先關(guān)檢測(cè)器，再用經(jīng)濾過(guò)和脫氣的適當(dāng)溶劑清洗色譜系統(tǒng)，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用過(guò)含鹽流動(dòng)相，則先用水（5%甲醇），然后用甲醇-水沖洗，各種沖洗劑一般沖洗15～30分鐘，最后用甲醇保留色譜柱，特殊情況應(yīng)延長(zhǎng)沖洗時(shí)間。2、沖洗完畢后，逐步降低流速至0，關(guān)泵，進(jìn)樣器也應(yīng)用相應(yīng)溶劑沖洗，可使用進(jìn)樣閥所附專用沖洗接頭。3、關(guān)斷電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期、檢品、色譜柱、流動(dòng)相、柱壓，使用小時(shí)數(shù)，儀器完好狀態(tài)等。第四步、注意事項(xiàng)一、流動(dòng)相1、流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭⒏呒兯螂p蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用，過(guò)濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；2、水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換（一般不超過(guò)2天），防止長(zhǎng)菌變質(zhì)；3、使用雙泵時(shí)，A、B、C、D四相中，若所用流動(dòng)相中有含鹽流動(dòng)相，則A、D（進(jìn)液口位于混合器下方）放置含鹽流動(dòng)相，B、C（進(jìn)液口位于混合器上方）放置不含鹽流動(dòng)相；A、B、C、D四個(gè)儲(chǔ)液器中其中一個(gè)為棕色瓶，用于存放水相流動(dòng)相。二、樣品1、采用過(guò)濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；2、用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱（若為反相柱，則極性比流動(dòng)相大；若為正相柱，則極性比流動(dòng)相小）的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動(dòng)相制備樣品液；3、手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量盡量小，使用定量管定量時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的3～5倍；第四步、注意事項(xiàng)三、色譜柱1、使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說(shuō)明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動(dòng)相類型等；2、使用符合要求的流動(dòng)相；3、使用保護(hù)柱；4、如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。5、色譜柱在不使用時(shí)，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；6、不要高壓沖洗柱子；7、不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；使用過(guò)程中注意輕拿輕放。第四步、注意事項(xiàng)四、操作過(guò)程1、開機(jī)操作：（1）、打開電源，用Harb相連接時(shí)，注意Harb電源，打開計(jì)算機(jī)，打開BootpServer（一般啟動(dòng)時(shí)已打開）；（2）、自上而下打開個(gè)組件電源，BootpServer里顯示有信號(hào)時(shí)（有六行字符），打開工作站（先打開Online）；（3）、打開沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開關(guān)（需用針捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量為準(zhǔn)；（4）、注意各流動(dòng)相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于最低限會(huì)自動(dòng)停泵，注意洗泵溶液的體積，及時(shí)加液；（5）、使用過(guò)程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時(shí)正確處理各種突發(fā)事件。第四步、注意事項(xiàng)2、先以所用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)一定時(shí)間（如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動(dòng)相），正式進(jìn)樣分析前30min左右開啟D燈或W燈，以延長(zhǎng)燈的使用壽命；3、建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果；4、使用手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣時(shí)，在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用洗針液洗凈進(jìn)樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進(jìn)樣前必須用樣品液清洗進(jìn)樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡；5、溶劑瓶中的沙芯過(guò)濾頭容易破碎，在更換流動(dòng)相時(shí)注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過(guò)濾頭變臟或長(zhǎng)菌時(shí)，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌；第四步、注意事項(xiàng)6、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個(gè)管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過(guò)程中關(guān)閉D燈、W燈；7、關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)閉泵、檢測(cè)器等，再關(guān)閉工作站，然后關(guān)機(jī)，最后自下而上關(guān)閉色譜儀各組件，關(guān)閉洗泵溶液的開關(guān)；8、使用者須認(rèn)真履行儀器使用登記制度，出現(xiàn)問題及時(shí)向老師報(bào)告，不要擅自拆卸儀器。未經(jīng)操作培訓(xùn)，不得擅自使用儀器。第四步、注意事項(xiàng)四、使用經(jīng)驗(yàn)交流（1）1、流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑，使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)使用0.45um或更細(xì)的膜過(guò)濾。2、流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。3、不能用純乙腈作為流動(dòng)相，這樣會(huì)使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。4、使用緩沖溶液時(shí)，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí)，然后用甲醇或甲醇水溶液沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對(duì)于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。第四步、注意事項(xiàng)四、使用經(jīng)驗(yàn)交流（2）5.長(zhǎng)時(shí)間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相如甲醇等，因?yàn)榧兯组L(zhǎng)霉。6.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑如甲醇等清洗進(jìn)樣器。7.C18柱絕對(duì)不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品。8.堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法：①以異丙醇作溶劑沖洗；②放在異丙醇中間用超聲波清洗；③用10％稀硝酸清洗。第四步、注意事項(xiàng)四、使用經(jīng)驗(yàn)交流（3）9.氣泡會(huì)致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。10.如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時(shí)，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。11.要注意柱子的PH值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。12.更換流動(dòng)相時(shí)應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊清洗，然后插入新的流動(dòng)相中。更換無(wú)互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過(guò)渡一下。高效液相色譜儀

中常遇見的問題及處理方法一、保留時(shí)間變化1.柱溫變化2.等度與梯度間未能充分平衡3.緩沖液容量不夠4.柱污染5.柱內(nèi)條件變化6.柱快達(dá)到壽命二、保留時(shí)間縮短1.流速增加2.樣品超載3.鍵合相流失4.流動(dòng)相組成變化5.溫度增加三、保留時(shí)間延長(zhǎng)1.流速下降2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化3.鍵合相流失4.流動(dòng)相組成變化5.溫度降低四、出現(xiàn)肩峰或分叉五、鬼峰1.進(jìn)樣閥殘余峰2.樣品中未知物3.柱未平衡4.三氟乙酸TFA氧化肽譜5.水污染反相六、基線噪聲1.氣泡尖銳峰2.污染隨機(jī)噪聲3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲4.電干擾偶然噪聲5.檢測(cè)器中有氣泡七、峰拖尾1.柱超載2.峰干擾3.硅羥基作用4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.柱塌陷或形成短路通道6.死體積或柱外體積過(guò)大7.柱效下降八、峰展寬1.進(jìn)樣體積過(guò)大2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大八、峰展寬5.流動(dòng)相粘度過(guò)高6.檢測(cè)池體積過(guò)大7.保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)8.柱外體積過(guò)大9.樣品過(guò)載江西中醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室江西中醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室第一步第二步第三步第四步準(zhǔn)備開機(jī)注意事項(xiàng)清潔關(guān)機(jī)步驟第二步、開機(jī)1.柱恒溫2.至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱3.用25mmol/

論大學(xué)生寫作能力寫作能力是對(duì)自己所積累的信息進(jìn)行選擇、提取、加工、改造并將之形成為書面文字的能力。積累是寫作的基礎(chǔ)，積累越厚實(shí)，寫作就越有基礎(chǔ)，文章就能根深葉茂開奇葩。沒有積累，胸?zé)o點(diǎn)墨，怎么也不會(huì)寫出作文來(lái)的。寫作能力是每個(gè)大學(xué)生必須具備的能力。從目前高校整體情況上看，大學(xué)生的寫作能力較為欠缺。一、大學(xué)生應(yīng)用文寫作能力的定義那么，大學(xué)生的寫作能力究竟是指什么呢？葉圣陶先生曾經(jīng)說(shuō)過(guò)，“大學(xué)畢業(yè)生不一定能寫小說(shuō)詩(shī)歌，但是一定要寫工作和生活中實(shí)用的文章，而且非寫得既通順又扎實(shí)不可。”對(duì)于大學(xué)生的寫作能力應(yīng)包含什么，可能有多種理解，但從葉圣陶先生的談話中，我認(rèn)為：大學(xué)生寫作能力應(yīng)包括應(yīng)用寫作能力和文學(xué)寫作能力，而前者是必須的，后者是“不一定”要具備，能具備則更好。眾所周知，對(duì)于大學(xué)生來(lái)說(shuō)，是要寫畢業(yè)論文的，我認(rèn)為寫作論文的能力可以包含在應(yīng)用寫作能力之中。大學(xué)生寫作能力的體現(xiàn)，也往往是在撰寫畢業(yè)論文中集中體現(xiàn)出來(lái)的。本科畢業(yè)論文無(wú)論是對(duì)于學(xué)生個(gè)人還是對(duì)于院系和學(xué)校來(lái)說(shuō)，都是十分重要的。如何提高本科畢業(yè)論文的質(zhì)量和水平，就成為教育行政部門和高校都很重視的一個(gè)重要課題。如何提高大學(xué)生的寫作能力的問題必須得到社會(huì)的廣泛關(guān)注，并且提出對(duì)策去實(shí)施解決。二、造成大學(xué)生應(yīng)用文寫作困境的原因：（一）大學(xué)寫作課開設(shè)結(jié)構(gòu)不合理。就目前中國(guó)多數(shù)高校的學(xué)科設(shè)置來(lái)看，除了中文專業(yè)會(huì)系統(tǒng)開設(shè)寫作的系列課程外，其他專業(yè)的學(xué)生都只開設(shè)了普及性的《大學(xué)語(yǔ)文》課。學(xué)生寫作能力的提高是一項(xiàng)艱巨復(fù)雜的任務(wù)，而我們的課程設(shè)置僅把這一任務(wù)交給了大學(xué)語(yǔ)文教師，可大學(xué)語(yǔ)文教師既要在有限課時(shí)時(shí)間內(nèi)普及相關(guān)經(jīng)典名著知識(shí)，又要適度提高學(xué)生的鑒賞能力，且要教會(huì)學(xué)生寫作規(guī)律并提高寫作能力，任務(wù)之重實(shí)難完成。（二）對(duì)實(shí)用寫作的普遍性不重視?！按髮W(xué)語(yǔ)文”教育已經(jīng)被嚴(yán)重地“邊緣化”。目前對(duì)中國(guó)語(yǔ)文的態(tài)度淡漠，而是呈現(xiàn)出全民學(xué)英語(yǔ)的大好勢(shì)頭。中小學(xué)如此，大學(xué)更是如此。對(duì)我們的母語(yǔ)中國(guó)語(yǔ)文，在大學(xué)反而被漠視，沒有相關(guān)的課程的設(shè)置，沒有系統(tǒng)的學(xué)習(xí)實(shí)踐訓(xùn)練。這其實(shí)是國(guó)人的一種偏見。應(yīng)用寫作有它自身的規(guī)律和方法。一個(gè)人學(xué)問很大，會(huì)寫小說(shuō)、詩(shī)歌、戲劇等，但如果不曉得應(yīng)用文寫作的特點(diǎn)和方法，他就寫不好應(yīng)用文。（三）部分大學(xué)生學(xué)習(xí)態(tài)度不端正。很多非中文專業(yè)的大學(xué)生對(duì)寫作的學(xué)習(xí)和訓(xùn)練都只是集中在《大學(xué)語(yǔ)文》這一門課上，大部分學(xué)生只愿意被動(dòng)地接受大學(xué)語(yǔ)文老師所講授的文學(xué)經(jīng)典故事，而對(duì)于需要學(xué)生動(dòng)手動(dòng)腦去寫的作文，卻是盡可能應(yīng)付差事，這樣勢(shì)必不能讓大學(xué)生的寫作水平有所提高。（四）教師的實(shí)踐性教學(xué)不強(qiáng)。學(xué)生寫作能力的提高是一項(xiàng)艱巨復(fù)雜的任務(wù)，但在教學(xué)中有不少教師過(guò)多注重理論知識(shí)，實(shí)踐性教學(xué)環(huán)節(jié)卻往往被忽視。理論講了一大堆，但是實(shí)踐卻幾乎沒有，訓(xùn)練也少得可憐。閱讀與寫作都需要很強(qiáng)的實(shí)踐操作，學(xué)習(xí)理論固然必不可少，但是閱讀方法和寫作技巧的掌握才是最重要的。由于以上的原因，我們的大學(xué)生的寫作水平著實(shí)令人堪憂，那么如何走出這一困境，筆者提出一些建議，希望能對(duì)大學(xué)生寫作水平的提高有所幫助。三、提高大學(xué)生應(yīng)用寫作能力的對(duì)策（一）把《應(yīng)用寫作》課設(shè)置為大學(xué)生的必修課。在中國(guó)的每一所大學(xué)，《應(yīng)用寫作》應(yīng)該成為大學(xué)生的必修課。因?yàn)樵谶@個(gè)被某些人形容為實(shí)用主義、功利主義甚囂塵上的時(shí)代，也是個(gè)人生存競(jìng)爭(zhēng)最激烈的時(shí)代，人們比任何時(shí)代都更需要學(xué)會(huì)寫作實(shí)用性的文章，比如職場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中的求職信，生活中的財(cái)經(jīng)文書、法律文書等，以提高個(gè)人的生存競(jìng)爭(zhēng)能力。（二）端正大學(xué)生的學(xué)習(xí)態(tài)度。首先，要讓大學(xué)生充分認(rèn)識(shí)到實(shí)用寫作課的重要性，這門課關(guān)乎到他人生的每一個(gè)方面，諸如就職，求愛，理財(cái)，人際交往等，是他終生都需要使用的一些基礎(chǔ)性的知識(shí)，也是他必備的一項(xiàng)生存技能。其次，實(shí)用寫作有它自身的規(guī)律和方法。它不是你想怎樣寫都行的，它有嚴(yán)格的格式性的要求，所以需要系統(tǒng)的研究學(xué)習(xí)。最后，實(shí)用寫作課的實(shí)踐性非常強(qiáng)，所以學(xué)生們不能只學(xué)不練，并且要克服手懶的壞習(xí)慣，勤學(xué)勤練，為今后的工作生活打好基礎(chǔ)。（三）注重實(shí)踐課的訓(xùn)練。要提高大學(xué)生的實(shí)用寫作能力，那么實(shí)踐寫作環(huán)節(jié)是必不可少的。要想使學(xué)員真正具備實(shí)用寫作能力，必須重視實(shí)用寫作訓(xùn)練，