基因表達載體構(gòu)建課件

二基因表達載體的構(gòu)建思考與討論：1基因載體必須具備的基本條件是什么？2基因工程可做載體的結(jié)構(gòu)有那些？最常使用的載體是什么？3請圖示大腸桿菌質(zhì)粒結(jié)構(gòu)。4從蘇云金芽孢桿菌細胞DNA分子中提取得到Bt毒蛋白基因能否直接進入普通棉細胞中？如果把目的基因人工注射到普通棉細胞中，那么該基因在棉細胞中會穩(wěn)定存在，復制和表達嗎？5假如你是一個基因工程操作者，若使目的基因進入棉細胞，并能在棉細胞中遺傳和表達，你應當采取什么辦法？你能說出其中的理由嗎？（一）基因表達載體的構(gòu)建2請你定義：基因表達載體構(gòu)建之含義？1基因工程操作中，構(gòu)建基因表達載體之目的是什么？

將目的基因、啟動子和終止子科學按裝在經(jīng)修飾和改造完備的載體之上。確保目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在、復制、遺傳和表達，使其發(fā)揮作用。請你以質(zhì)粒作載體構(gòu)建基因表達載體之模式圖基因表達載體基因表達載體啟動子復制原點終止子插入目的基因遺傳標記基因4建構(gòu)基因表達載體方法（2）用同種限制酶切割目標DNA分子，截取目的基因，使其產(chǎn)生與質(zhì)粒相同的末端。（1）用某種限制酶如EcoRI限制酶，在基因插入位點切割質(zhì)粒，使質(zhì)粒出現(xiàn)一個切口，露出兩個黏性末端。（3）依據(jù)目的基因表達的特點和位置，用限制酶切割受體細胞相應的控制元件——啟動子和終止子。（4）用限制酶將啟動子和終止子與目的基因連接起來，成為一個整體。（5）將目的基因插入質(zhì)粒切口處，用E?coliDNA連接酶把基因與質(zhì)?？p合起來，成功創(chuàng)建一個重組DNA分子。建議模擬完成建構(gòu)大腸桿菌基因表達載體，并寫出具體步驟。2目的基因?qū)胧荏w細胞遵循的基本原理是什么？通常借鑒細菌或病毒侵染細胞和寄生之途徑。（一）將目的基因?qū)胫参锛毎r(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，在自然條件下易感染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數(shù)單子葉植物沒有感染力。2感染原理：當植物體受到損傷時，傷口處細胞分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細胞，這時農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T—DNA分子可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色DNA分子之上。1農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法目標農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖農(nóng)桿菌目標細胞Ti質(zhì)粒T—DNA核—DNAEcoRI酶DNA重組農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)基因植物侵染轉(zhuǎn)化（三）將目的基因?qū)胛⑸锛毎康幕驅(qū)氪竽c桿菌最常用的轉(zhuǎn)化方法是：1用Ca2+處理大腸桿菌細胞，使細胞處于能夠吸收環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)細胞。2用大腸桿菌質(zhì)粒與目的基因進行重組形成基因——質(zhì)粒重