2023年度藥典生物樣品定量分析報(bào)告方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則一、范圍準(zhǔn)確測(cè)定生物基質(zhì)〔如全血、血清、血漿、尿〕中的藥物濃度，對(duì)于藥物和記錄應(yīng)用的生物分析方法，以獲得牢靠的結(jié)果。本指導(dǎo)原則二和三主要針對(duì)色譜分析方法，四針對(duì)配體結(jié)合分析方法。GLPGCP二、生物分析方法驗(yàn)證〔一〕分析方法的完整驗(yàn)證當(dāng)基質(zhì)替代，但要說(shuō)明理由。〕、準(zhǔn)確度、周密度、基質(zhì)效應(yīng)、分析物在生物基質(zhì)以及溶液中儲(chǔ)存和處理全過(guò)程中的穩(wěn)定性。分析的原則適用于全部涉及的分析物。比照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中。此外，色譜方法通常使用適當(dāng)?shù)膬?nèi)標(biāo)。不產(chǎn)生干擾。果的偏差。選擇性該分析方法應(yīng)當(dāng)能夠區(qū)分目標(biāo)分析物和內(nèi)標(biāo)與基質(zhì)的內(nèi)源性組分或樣品中6〔動(dòng)物空白基質(zhì)可以不同批次混合205%時(shí)，通常即可以承受。分析物的可能性。殘留殘留不行避開(kāi)，應(yīng)考慮特別措施，在方法驗(yàn)證時(shí)檢驗(yàn)并在試驗(yàn)樣品分析時(shí)應(yīng)白樣品，然后分析下一個(gè)試驗(yàn)樣品。定量下限標(biāo)準(zhǔn)曲線〔和內(nèi)標(biāo)〕到空白基質(zhì)中，制備各濃度的校正標(biāo)樣，其基質(zhì)應(yīng)當(dāng)有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線?！残Ｕ龢?biāo)樣的最高濃度。該范圍應(yīng)當(dāng)足夠描述分析物的藥動(dòng)學(xué)。6〔不含分析物和內(nèi)標(biāo)的處〕和零濃度樣品〔含內(nèi)標(biāo)的處理過(guò)的基質(zhì)〕。每個(gè)校正標(biāo)樣可以被屢次處理和分析。品結(jié)果不應(yīng)參與計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)。3校正標(biāo)樣回算的濃度一般應(yīng)當(dāng)在標(biāo)示值的±15%以內(nèi)，定量下限處應(yīng)當(dāng)在±20756應(yīng)被重評(píng)價(jià)，包括回歸分析。使用預(yù)先配制并儲(chǔ)存的校正標(biāo)樣。準(zhǔn)確度分析方法的準(zhǔn)確度描述該方法測(cè)得值與分析物標(biāo)示濃度的接近程度，表示〔批內(nèi)準(zhǔn)確度〕和不同分析批〔批間準(zhǔn)確度〕獲得質(zhì)控樣品值來(lái)評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度。度，其樣品數(shù)不少于一個(gè)分析批預(yù)期的樣品數(shù)。批內(nèi)準(zhǔn)確度品，每個(gè)濃度至少用5375%處的高濃度質(zhì)控樣品。準(zhǔn)確度均值一般應(yīng)在質(zhì)控樣品標(biāo)示值的±1520%范圍內(nèi)。批間準(zhǔn)確度35標(biāo)示值的±15%范圍內(nèi)，對(duì)于定量下限，應(yīng)在標(biāo)示值的±20%范圍內(nèi)。記錄明顯失誤的狀況除外。周密度準(zhǔn)差〔變異系數(shù)〕。應(yīng)使用與證明準(zhǔn)確度一樣分析批樣品的結(jié)果，獲得在同一批內(nèi)和不同批間定量下限以及低、中、高濃度質(zhì)控樣品的周密度。4中、高濃度，每個(gè)濃度至少51520%。3〔2〕的定量下限以及1520%。稀釋牢靠性量上限濃度，并用空白基質(zhì)稀釋該樣品〔每個(gè)稀釋因子至少5〕，來(lái)證明稀釋的牢靠性。準(zhǔn)確度和周密度應(yīng)在±15%之內(nèi)，稀釋的牢靠性應(yīng)當(dāng)掩蓋試驗(yàn)樣品所用的稀釋倍數(shù)。度和準(zhǔn)確度，也可以承受其使用?；|(zhì)效應(yīng)6說(shuō)明理由。〔由空白基質(zhì)提取后參與分析物和內(nèi)標(biāo)測(cè)得〔分析物和內(nèi)標(biāo)的純?nèi)芤罕戎担?15%。該測(cè)定應(yīng)分別在低濃度和高濃度下進(jìn)展。6〔3〕，來(lái)獲得批間響應(yīng)的變異。其驗(yàn)證報(bào)告應(yīng)包括分析物和內(nèi)標(biāo)的峰面積，15%。樣品等。穩(wěn)定性用文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)證明穩(wěn)定性是不夠的。〔3及接近定量上限度相比較，每一濃度的均值與標(biāo)示濃度的偏差應(yīng)在±15%范圍內(nèi)。的穩(wěn)定性。通常應(yīng)當(dāng)進(jìn)展以下穩(wěn)定性考察：·分析物和內(nèi)標(biāo)的貯存液和工作溶液的穩(wěn)定性；性；此外，假設(shè)適用，也應(yīng)當(dāng)進(jìn)展以下考察：·處理過(guò)的樣品在室溫下或在試驗(yàn)過(guò)程儲(chǔ)存條件下的穩(wěn)定性；·處理過(guò)的樣品在自動(dòng)進(jìn)樣器溫度下的穩(wěn)定性。含全局部析物基質(zhì)中的穩(wěn)定性。分析物的構(gòu)造，按具體狀況證明其穩(wěn)定性?！捕尘植框?yàn)證儲(chǔ)存條件等。應(yīng)報(bào)告全部的轉(zhuǎn)變，并對(duì)重驗(yàn)證或局部驗(yàn)證的范圍說(shuō)明理由。〔三〕穿插驗(yàn)證67%樣品測(cè)得的兩組數(shù)值差異應(yīng)在兩者均值的±20%范圍內(nèi)。三、試驗(yàn)樣品分析分析開(kāi)頭前證明生物分析方法的效能。析批被承受?！惨弧撤治雠?樣，至少3〔低、中、高濃度雙重樣品，或至少試驗(yàn)樣品總5%，兩者中取數(shù)目更多者〕，以及被分析的試驗(yàn)樣品。全部樣品〔校正標(biāo)此保證整個(gè)分析批的準(zhǔn)確度和周密度。削減結(jié)果的變異。〔二〕分析批的承受標(biāo)準(zhǔn)批中每一局部批次樣品定義承受標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)當(dāng)使用以下承受標(biāo)準(zhǔn)：校正標(biāo)樣測(cè)定回算濃度一般應(yīng)在標(biāo)示值的±15%范圍內(nèi)，定量下限應(yīng)在±20675%標(biāo)樣應(yīng)符合這些標(biāo)準(zhǔn)。假設(shè)校正線，并進(jìn)展回歸分析。質(zhì)控樣品的準(zhǔn)確度值應(yīng)當(dāng)在標(biāo)示值的±1567%質(zhì)控樣品，50%樣品應(yīng)符合這一標(biāo)準(zhǔn)。在不滿足這些標(biāo)準(zhǔn)的狀況下，應(yīng)當(dāng)拒絕該分析批，相應(yīng)的試驗(yàn)樣品應(yīng)當(dāng)重提取和分析。在同時(shí)測(cè)定幾個(gè)分析物的狀況下，對(duì)每個(gè)分析物都要有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。假設(shè)一個(gè)分析批對(duì)于一個(gè)分析物可以承受，而對(duì)于另一個(gè)分析物不能承受，則承受正范圍不變。15%，則需要進(jìn)展額外的〔三〕校正范圍假設(shè)在試驗(yàn)樣品分析開(kāi)頭前，或預(yù)期試驗(yàn)樣品中的分析物濃度范圍窄，以充分反映試驗(yàn)樣品的濃度。延長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍，參與額外濃度的質(zhì)控樣品或轉(zhuǎn)變其濃度。2〔局部驗(yàn)證〕，以確認(rèn)響應(yīng)函數(shù)并保證準(zhǔn)確度和周密度?！菜摹吃囼?yàn)樣品的重分析和報(bào)告值選擇應(yīng)當(dāng)在試驗(yàn)打算或標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程中預(yù)先確定重分析試驗(yàn)樣品的理由以及的比例。重分析試驗(yàn)樣品可能基于以下理由：析批被拒絕；·內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)與校正標(biāo)樣和質(zhì)控樣品的內(nèi)標(biāo)響應(yīng)差異顯著；·進(jìn)樣不當(dāng)或儀器功能特別；度標(biāo)樣從標(biāo)準(zhǔn)曲線中被拒絕，導(dǎo)致比其他分析批的定量下限高；·在給藥前樣品或勸慰劑樣品中測(cè)得可定量的分析物；·色譜不佳。對(duì)于生物等效性試驗(yàn)，通常不能承受由于藥動(dòng)學(xué)理由重分析試驗(yàn)樣品。承受值以及承受理由。要重處理樣品?！参濉成V積分下，記錄原始和最終的積分?jǐn)?shù)據(jù)，并在要求時(shí)提交?！擦秤糜谠u(píng)價(jià)方法重現(xiàn)性的試驗(yàn)樣品再分析10005%樣品。67%的重復(fù)測(cè)試，原始分析測(cè)得的濃度和重分析測(cè)得的濃度之間的差異應(yīng)在兩者均值的±20%范圍內(nèi)?；治龇椒āＶ辽僭谝韵虑樾蜗?，應(yīng)當(dāng)進(jìn)展試驗(yàn)樣品的再分析：·毒動(dòng)學(xué)試驗(yàn)，每個(gè)物種一次·全部關(guān)鍵性的生物等效性試驗(yàn)·首次用于肝或腎功能不全患者的藥物試驗(yàn)如涉及給藥劑量和測(cè)得濃度關(guān)系的試驗(yàn)。四、配體結(jié)合分析以雙孔分析為原則?！波D〕方法驗(yàn)證前的考量標(biāo)準(zhǔn)品選擇號(hào)變更時(shí)，應(yīng)盡量對(duì)其進(jìn)展表征和生物分析評(píng)價(jià)，以確保方法性能不變?；|(zhì)選擇但應(yīng)對(duì)使用替代基質(zhì)建立方法的必要性加以證明。過(guò)計(jì)算準(zhǔn)確度來(lái)證明基質(zhì)效應(yīng)的消退。最低需求稀釋度確實(shí)定品進(jìn)展稀釋的最小倍數(shù)。應(yīng)使用與試驗(yàn)樣品一樣的基質(zhì)來(lái)配制加藥樣品來(lái)確定最低需求稀釋度。試劑性。其穩(wěn)定性的保障條件進(jìn)展記錄，以確保方法性能長(zhǎng)期不變?！捕撤椒?yàn)證完整驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍S6圍對(duì)數(shù)坐標(biāo)上近似等距離分布。除校正標(biāo)樣外，可使用錨定點(diǎn)關(guān)心曲線擬合。675%的校正標(biāo)樣回算濃度在標(biāo)示值的±20%〔定量下限與定量上限在±25%〕范圍內(nèi)。定量下限與定量上限之間點(diǎn)，用于關(guān)心擬合配體結(jié)合分析的非線性回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線，因其在定量范圍之外，可不遵循上述承受標(biāo)準(zhǔn)。特異性80%以上的質(zhì)控樣品準(zhǔn)確度在±20%范量值應(yīng)低于定量下限。選擇性方法的選擇性是指基質(zhì)中存在非相關(guān)物質(zhì)的狀況下，準(zhǔn)確測(cè)定分析物的力氣80%以上的樣品準(zhǔn)確度在±20%范圍內(nèi)〔假設(shè)在定量下限水平，則在±25%范圍內(nèi)〔基質(zhì)或高血脂基質(zhì)〕考察選擇性。周密度與準(zhǔn)確度5包括定量下限濃度、低濃度質(zhì)控〔定量下限濃度的3〕、中濃度質(zhì)控〔標(biāo)準(zhǔn)曲線中段〔75%以上以及定量上限濃度質(zhì)控。63〔5〕。對(duì)于批定量上限為±25%〕20%〔定量下限和25%〕。此外，方法總誤差〔和〕30%〔40%〕。稀釋線性QC濃度應(yīng)在標(biāo)示值的±20QC20%。平行性330%。假設(shè)〔即非平行性〕，則應(yīng)按事先的規(guī)定予以報(bào)告。假設(shè)行性考察。樣品穩(wěn)定性67%以上的樣品濃度在標(biāo)示值的±20%范圍內(nèi)。商品化試劑盒求對(duì)其進(jìn)展驗(yàn)證。局部驗(yàn)證和穿插驗(yàn)證〔二〕〔三〕中表達(dá)的關(guān)于驗(yàn)證的各項(xiàng)內(nèi)容都適用于配體結(jié)合分析?！踩吃囼?yàn)樣品分析分析批樣品均應(yīng)復(fù)孔測(cè)定。試驗(yàn)樣品分析的承受標(biāo)準(zhǔn)75〔6個(gè)〕回算濃度在標(biāo)示值的±20%〔定量下限和定量上限為±25%〕范圍內(nèi)。23〔低、中、高濃度〕的復(fù)設(shè)質(zhì)控樣品。在試67%的質(zhì)控樣品應(yīng)符合準(zhǔn)確度在±20%20%的標(biāo)50%符合上述標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)際樣品再分析析樣品的承受標(biāo)準(zhǔn)為初測(cè)濃度與復(fù)測(cè)濃度都在二者均值的±30%范圍內(nèi)，再分67%以上應(yīng)符合該承受標(biāo)準(zhǔn)。五、試驗(yàn)報(bào)告〔一〕方法驗(yàn)證報(bào)告操作規(guī)程標(biāo)題，否則應(yīng)當(dāng)在報(bào)告后面附上這些標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)記錄任何對(duì)驗(yàn)證打算的偏離。方法驗(yàn)證報(bào)告應(yīng)當(dāng)包括至少以下信息：·驗(yàn)證結(jié)果概要；·所用分析方法的細(xì)節(jié)，假設(shè)參考了已有方法，給出分析方法的來(lái)源；·摘要表達(dá)分析步驟〔分析物，內(nèi)標(biāo)，樣品預(yù)處理、提取和分析〕；·比照標(biāo)準(zhǔn)品〔來(lái)源，批號(hào)，分析證書(shū)，穩(wěn)定性和儲(chǔ)存條件〕；·校正標(biāo)樣和質(zhì)控樣品〔基質(zhì)，抗凝劑，預(yù)處理，制備日期和儲(chǔ)存條件〕·分析批的承受標(biāo)準(zhǔn)；全部承受分析批的質(zhì)控樣品結(jié)果列表；貯存液、工作溶液、質(zhì)控在所用儲(chǔ)存條件下的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)；選擇性、定量下限、殘留、基質(zhì)效應(yīng)和稀釋考察數(shù)據(jù)；·方法驗(yàn)證中得到的意外結(jié)果，充分說(shuō)明實(shí)行措施的理由；·對(duì)方法或?qū)?biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的偏離。全部測(cè)定及每個(gè)計(jì)算濃度都必需消滅在驗(yàn)證報(bào)告中?！捕硺悠贩治鰣?bào)