全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程

word.zl-word.zl-全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程〔第3版〕精液檢查一．標(biāo)本收集.在3個(gè)月內(nèi)檢查2次至數(shù)次，二次之間間隔應(yīng)＞7天，但不超過3周。.采樣前至少禁欲3天，但不超過7天。.采樣后1h內(nèi)送到檢驗(yàn)科。.用清潔枯燥廣口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套內(nèi)的精液。某些塑料容器具有殺精子作用，但是否適宜應(yīng)事先做實(shí)驗(yàn)。.應(yīng)將射精精液全部送檢。.傳送時(shí)溫度應(yīng)在20~40℃。.容器必須注明患者姓名和〔或〕識別號〔標(biāo)本號或條碼〕，標(biāo)本采集日期和時(shí)間。.和所有體液一樣，精液也必須按照潛在生物危害物質(zhì)處理，因?yàn)榫簝?nèi)可能含有肝炎病毒、人類免疫缺陷〔病毒〕和皰疹病毒等。二．一般性狀檢查一般性狀檢查包括記錄精液量、顏色、透明度、粘稠度和是否液化。.外觀正常精液呈灰白色或乳白色，不透明。棕色或紅色提示出血。黃色可能服用某種藥物。精子濃度低時(shí)精液略顯透明。正常精液是一種均勻黏稠的液體，射精后立即凝固，30min后開場液化。假設(shè)液化時(shí)間超過60min考慮為異常，應(yīng)記錄這種情況。正常精液可含有不液化的膠凍狀顆粒。.量用刻度量筒或移液管測定。正常一次全部射精精液量約2~5ml。精液量過多或過少是不育的原因之一。.黏稠度在精液全部液化后，用Pasteur滴管吸入精液，然后讓精液依靠重力滴落，并觀察拉絲長度。正常精液呈水樣，形成不連續(xù)小滴。黏稠度異常時(shí)，形成絲狀或線狀液滴〔長度大于2cm〕。也可使用玻璃棒或注射器測定黏稠度。.酸堿度用精細(xì)試帶檢查。正常人pH為7.2~8.0，平均7.8。三．精子存活率精子存活率〔motility〕用活精子比例來反映。1.伊紅染色法【試劑】5g/L伊紅Y染色液：伊紅Y0.5g，加生理鹽水至100ml?！静僮鳌吭谳d玻片上加新鮮精液和伊紅溶液各1滴，混勻后，加上蓋玻片，30s后在高倍鏡下觀察，活精子不著色。死精子染成紅色。計(jì)數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算未著色〔活精子〕的百分率。.伊紅-苯胺黑染色法【試劑】〔1〕10g/L伊紅Y染色液：伊紅1g，加蒸餾水至100ml?！?〕100g/L苯胺黑染色液：苯胺黑10g，加蒸餾水至100ml。【操作】取小試管，加新鮮精液和伊紅溶液各1滴，混勻。30s后，加苯胺黑溶液3滴，混勻。30s后，在載玻片上，加精液-伊紅-苯胺黑混合液1滴，制成涂片，待干。油鏡下觀察，活精子為白色，死精子染成紅色，背景呈黑色，計(jì)數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算未著色活精子的百分率。.精子低滲膨脹試驗(yàn)〔HOS〕【試劑】膨脹液：枸櫞酸鈉0.735g，果糖1.351g，加蒸餾水至100ml。分裝，-20℃冷凍保存，使用前解凍，并充分混勻。【操作】取小試管，加1ml膨脹液，37℃預(yù)溫5min。加0.1ml液化精液，輕輕攪勻，在37℃孵育至少30min。在相差顯微鏡下觀察精子，膨脹精子為尾部形狀發(fā)生變化的精子，即活精子。計(jì)數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算膨脹精子的百分率?！緟⒖紖^(qū)間】在排精30~60min內(nèi)，約有70%以上精子應(yīng)為活動(dòng)精子。精子低滲膨脹試驗(yàn)應(yīng)有60%以上精子出現(xiàn)尾部膨脹。【附注】如室溫低于10℃時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本先放入37℃溫育5~10min后鏡檢。某些標(biāo)本試驗(yàn)前就有尾部卷曲的精子，在HOS試驗(yàn)前，計(jì)算未處理標(biāo)本中尾部卷曲精子的百分?jǐn)?shù)，實(shí)際HOS試驗(yàn)結(jié)果百分率就等于測定值減去未處理標(biāo)本中尾部卷曲精子百分率。HOS也是精子尾部膜功能試驗(yàn)。四．精子活力WHO推薦一種無需復(fù)雜設(shè)備而能進(jìn)展簡單精子活力〔activity〕分級的方法?！静僮鳌咳?0似標(biāo)本涂片，連續(xù)觀察至少5個(gè)視野，對200個(gè)精子進(jìn)展分級，首先計(jì)數(shù)a級和b級精子，隨后在同一視野內(nèi)計(jì)數(shù)c級和d級精子?！窘Y(jié)果判斷】根據(jù)下述標(biāo)準(zhǔn)把精子活力分為a、b、c、d四級。a級：快速前向運(yùn)動(dòng)：37℃時(shí)速度）25^m/s,或20℃時(shí)速度）20^m/s〔25^m大約相當(dāng)于精子5個(gè)頭部的長度，或半個(gè)尾部的長度〕。b級：慢速或者呆滯的前向運(yùn)動(dòng)。c級：非前向運(yùn)動(dòng)〔＜5prn/s〕。d級：不動(dòng)。【參考區(qū)間】正常精液采集后60min內(nèi)科級+b級精子達(dá)50%以上。五．精子計(jì)數(shù)【試劑】精子稀釋液：碳酸氫鈉5g,40%甲醛溶液1ml,蒸餾水100ml,待完全溶解過濾后使用。【操作】于小試管內(nèi)加精子稀釋液0.38ml,吸液化精液20似，參加稀釋液內(nèi)搖勻。充分搖勻后，滴入改良Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置1~2min,待精子下沉后，以精子頭部作為基準(zhǔn)進(jìn)展計(jì)數(shù)。如每個(gè)中央方格內(nèi)精子少于10個(gè),應(yīng)計(jì)數(shù)所有25個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)。如每個(gè)中央方格內(nèi)精子在10~40個(gè),應(yīng)計(jì)數(shù)10個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)。如每個(gè)中央方格內(nèi)精子多于40個(gè),應(yīng)計(jì)數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)?！窘Y(jié)果判斷】精子數(shù)=計(jì)數(shù)結(jié)果*25*1*20*103/ml計(jì)數(shù)中方格數(shù) 計(jì)數(shù)池高度=計(jì)數(shù)結(jié)果*1*5*105/ml計(jì)數(shù)中方格數(shù) 計(jì)數(shù)池高度【參考區(qū)間】正常男性）20*106/ml【附注】收集精液前防止性生活3~7天。收集精液標(biāo)本后應(yīng)在1h內(nèi)檢驗(yàn)，冬季應(yīng)注意保溫。出現(xiàn)一次異常結(jié)果,應(yīng)隔1周后復(fù)查,反復(fù)查2~3次方能得出比較正確的結(jié)果。如低倍鏡、高倍鏡檢查均無精子,應(yīng)將精液離心沉淀后再涂片檢查,如兩次均無精子,報(bào)告“無精子〞。六．精子形態(tài)觀察【試劑】改良巴氏染色液、Shorr染色液、Diff-Quik快速染色液：商品化染色液一般質(zhì)量均佳，但實(shí)驗(yàn)室也可自行配制?！静僮鳌?在載玻片上滴1滴精液，約5~20似，采用壓拉涂片法或推片法制片。.待干后，巴氏染色法用等量95%乙醇和乙醚混合液固定5~15min；Shorr染色法用75%乙醇固定1min；Diff-Quik快速染色法用甲醇固定15s。.作改良巴氏、Shorr或Diff-Quik染色，然后在油鏡下觀察。.精子頭部頂體染成淡藍(lán)色，頂體后區(qū)域染成深藍(lán)色，中段染成淡紅色，尾部染成藍(lán)色或淡紅色，細(xì)胞質(zhì)小滴位于頭部后面或中段周圍，巴氏染色染成綠色?！窘Y(jié)果判斷】評估精子正常形態(tài)時(shí)應(yīng)采用嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)，只有頭、頸、中段和尾部都正常的精子才正常。精子頭的形狀必須是橢圓形，巴氏染色精子頭部長4.0~5.0^m,寬2.5~3.5^m,長寬之比應(yīng)在1.50~1.75，頂體的界限清晰，約占頭部的40%?70%。中段細(xì)，寬度＜Sm,約為頭部長度的1.5倍，且在軸線上緊貼頭部，細(xì)胞質(zhì)小滴應(yīng)小于正常頭部大小的一半。尾部應(yīng)是直的、均一的，比中段細(xì)，非卷曲，其長約為45^m。所有形態(tài)學(xué)處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。異常精子可有：①頭部缺陷：大頭、小頭、錐形頭、梨形頭、圓頭、無定形頭、有空泡頭、頂體過小頭、雙頭等；②頸段和中段缺陷：頸部彎曲、中段非對稱地接在頭部、粗的或不規(guī)那么中段、異常細(xì)的中段等；③尾部缺陷：短尾、多尾、發(fā)卡形尾、尾部斷裂、尾部彎曲、尾部寬度不規(guī)那么、尾部卷曲等。【參考區(qū)間】正常人精液中正常形態(tài)者》30%〔異常精子應(yīng)少于20%，如超過20%為不正常〕。七．精子凝集精子凝集是活動(dòng)精子以各種方式，如頭對頭，尾對尾或頭對尾等彼此粘在一起。以分級方式報(bào)告，從“-〞〔沒有凝集〕~“3+〞〔所有可動(dòng)的精子凝集到一起〕。凝集的存在，提示可能為免疫因素引起不育。八．非精子細(xì)胞精液含有的非精子細(xì)胞成分，成為“圓細(xì)胞〞，這些細(xì)胞包括泌尿生殖道上皮細(xì)胞、前列腺細(xì)胞、生精細(xì)胞和白細(xì)胞。正常人精液中：圓細(xì)胞＜5*106/ml。正常精液中白細(xì)胞，主要是中性粒細(xì)胞，數(shù)量不應(yīng)超過1*106/ml。過多提示感染，為白細(xì)胞精子癥。九．其他成分精液中可以有結(jié)晶體、卵磷脂小體、淀粉樣體、脂滴、脫落上皮細(xì)胞等。十．臨床意義1．正常精液呈灰白色，久未排精者可呈淡黃色；離體30min后，完全液化。根據(jù)精液檢查結(jié)果，臨床上常用于診斷男子不育癥及觀察輸精管結(jié)扎術(shù)后的效果。2.正常精子活力一般在a級）25%。如活力a級＜25%;a級+b級＜50%可成為男性不育的原因。3．精索靜脈曲張癥患者精液中常出現(xiàn)形態(tài)不正常的精子。4．血液中有毒性代謝產(chǎn)物、接觸鉛等污染物、應(yīng)用大劑量放射線及細(xì)胞毒藥物等可使精子形態(tài)異常。前列腺液檢查一．標(biāo)本收集臨床醫(yī)師作前列腺按摩術(shù)后，采集標(biāo)本于清潔玻片上，立即送檢。二．檢查內(nèi)容記錄液體顏色、是否混有血液、有無膿塊等。濕片鏡檢，高倍鏡下觀察白細(xì)胞、紅細(xì)胞、卵磷脂小體，其次為上皮細(xì)胞、精子、淀粉樣體等。革蘭染色后檢查細(xì)菌