染色體實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

染色體實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制第1頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五一、室內(nèi)質(zhì)控1、外周血培養(yǎng)基質(zhì)控程序目的：新購(gòu)買的培養(yǎng)基需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)培養(yǎng)基的質(zhì)量，避免因試劑的質(zhì)量而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第2頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五操作程序：1）取新購(gòu)買的培養(yǎng)基，接種新鮮的外周血標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本接種兩瓶培養(yǎng)基，每瓶培養(yǎng)基中接種０.３－０.４ｍｌ。2）將接種好的培養(yǎng)基放入３７℃，５％ＣＯ２培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)７２ｈ。3）培養(yǎng)結(jié)束前３小時(shí)，加秋水仙素處理。4）收獲細(xì)胞。5）將收獲的細(xì)胞沉淀配成細(xì)胞懸液進(jìn)行滴片，滴好的片放入烘箱中，８０℃烘烤３ｈ。第3頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五6）胰酶消化，吉姆薩染色。7）將玻片烘干后鏡檢觀察。注意事項(xiàng)：接種過(guò)程中注意無(wú)菌操作，以免細(xì)菌污染導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常，影響對(duì)培養(yǎng)基質(zhì)量的判斷。第4頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2、秋水仙素質(zhì)控程序目的：新購(gòu)買的秋水仙素需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)秋水仙素的質(zhì)量，避免因試劑的質(zhì)量而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第5頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五操作程序：1）取培養(yǎng)基，接種新鮮的外周血標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本接種兩瓶培養(yǎng)基，每瓶培養(yǎng)基中接種０.３－０.４ｍｌ2）將接種好的培養(yǎng)基放入３７℃，５％ＣＯ２培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)７２ｈ。3）培養(yǎng)結(jié)束前３小時(shí)，加新購(gòu)買的秋水仙素處理。4）收獲細(xì)胞。第6頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五5）將收獲的細(xì)胞沉淀配成細(xì)胞懸液進(jìn)行滴片，滴好的片放入烘箱中，８０℃烘烤３ｈ。6）胰酶消化，吉姆薩染色。7）將玻片烘干后鏡檢觀察。注意事項(xiàng)：秋水仙素處理時(shí)要注意加入秋水仙素的量和作用時(shí)間。第7頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3、固定液質(zhì)控程序目的：新購(gòu)買的甲醇和乙酸需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)試劑的質(zhì)量，避免因試劑的質(zhì)量而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。操作程序：在收獲細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用新的固定液，制片后分析固定液的效果。1）按甲醇：乙酸=3:1比例配置固定液。2）預(yù)固定：加入1.5ml固定液，固定5min。第8頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3）第一次固定：加入8ml固定液，固定30min。4)第二次固定：加入8ml固定液，固定30min。5)配置細(xì)胞懸液滴片，80℃烘烤3h。6)胰酶消化，吉姆薩染色。7)將玻片烘干后鏡檢觀察。8)鏡下觀察細(xì)胞核型較多，染色體形態(tài)規(guī)則，分布均勻，條帶清晰，則固定液效果良好，可以進(jìn)行正常實(shí)驗(yàn)。第9頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五4、胰酶質(zhì)控程序目的：新配置的胰酶需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)胰酶的質(zhì)量，避免因試劑的質(zhì)量而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。操作程序：1）配置胰酶工作液（工作液濃度：42ml生理鹽水+8ml0.25%胰酶儲(chǔ)存液）第10頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2）配置吉姆薩染液（儲(chǔ)存液用蒸餾水1：10稀釋）3）將烘烤好的玻片用胰酶消化，吉姆薩染色。4）將玻片烘干后鏡下觀察5）鏡下觀察染色體形態(tài)規(guī)則，條帶清晰，則胰酶效果良好，可以進(jìn)行正常實(shí)驗(yàn)。第11頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五吉姆薩染液質(zhì)控程序目的：新配置的吉姆薩染液需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)吉姆薩染液的效果，避免因試劑的質(zhì)量而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。操作程序：1）配置吉姆薩工作液:將吉姆薩染液儲(chǔ)存液用蒸餾水1：10稀釋。第12頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2）將經(jīng)胰酶消化的玻片放入染缸中染色，一般染色3-5分鐘。3）自來(lái)水沖洗干凈后放入烤箱中烘干。4）鏡下觀察：細(xì)胞著色均勻，染色體的條帶清晰，則染液的效果良好，可以進(jìn)行正常實(shí)驗(yàn)。第13頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五4、室內(nèi)質(zhì)控的失控處理在試劑的質(zhì)控中，若發(fā)現(xiàn)試劑的使用效果不好，應(yīng)重新配制，如果使用的是成品，應(yīng)立即聯(lián)系廠家更換產(chǎn)品，嚴(yán)重的要考慮更換廠家。對(duì)每一批新到的、新配制的試劑，都必須先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)效果可以后才可以使用。第14頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五二、室間質(zhì)控為了檢測(cè)本科室實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，可重復(fù)性，實(shí)驗(yàn)室必須定期與其它實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行室間質(zhì)控。操作程序：1、隨即選取本實(shí)驗(yàn)室的幾份新鮮血液標(biāo)本送檢其它實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，制片，G顯帶分析。第15頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2、本實(shí)驗(yàn)室同樣對(duì)這幾份標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，制片，G顯帶分析。3、對(duì)每一份標(biāo)本分析兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，從細(xì)胞的形態(tài)，染色體的形態(tài)，條帶等各方面進(jìn)行分析。4、通過(guò)室間質(zhì)控定期檢驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)室的準(zhǔn)確性。第16頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五三、常見(jiàn)差錯(cuò)處理1、染色體檢測(cè)的血液標(biāo)本，都需肝素鈉抗凝，如用其它抗凝劑抗凝，需通知相關(guān)人員予以重新采集標(biāo)本，并在《標(biāo)本接收和報(bào)告單發(fā)放記錄本》及《不合格標(biāo)本登記本》上記錄存檔；2、凡是待測(cè)定的血液標(biāo)本有凝血的情況，應(yīng)通知相關(guān)人員予以重新采集標(biāo)本，并在《標(biāo)本接收和報(bào)告單發(fā)放記錄本》及《不合格標(biāo)本登記本》上記錄存檔；第17頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3、凡是待測(cè)定的血液標(biāo)本有血滲出的情況，應(yīng)通知相關(guān)人員予以重新采集標(biāo)本，并在《標(biāo)本接收和報(bào)告單發(fā)放記錄本》及《不合格標(biāo)本登記本》上記錄存檔；4、染色體標(biāo)本需嚴(yán)格無(wú)菌操作，采用經(jīng)高溫高壓消毒的容器盛裝，如標(biāo)本送檢不規(guī)范，應(yīng)通知相關(guān)人予以重新采集標(biāo)本，并在《標(biāo)本接收和報(bào)告單發(fā)放記錄本》及《不合格標(biāo)本登記本》上記錄存檔；第18頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五5、經(jīng)查對(duì)標(biāo)本的病人姓名、年齡、性別、住院號(hào)、床號(hào)、及檢驗(yàn)號(hào)等不相符者，應(yīng)通知相關(guān)人員予以重新采集標(biāo)本，并在《標(biāo)本接收和報(bào)告單發(fā)放記錄本》及《不合格標(biāo)本登記本》上記錄存檔。第19頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五6、有的標(biāo)本片，分裂相很多，但染色體“瘦小”，是不是培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)不良引起？淋巴細(xì)胞一定要在良好的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境中才能生長(zhǎng)增殖，分裂相多，說(shuō)明了淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，染色體“瘦小”，是因?yàn)樵谥破^(guò)程中，染色體的蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生異固縮造成的，起因可考慮為以下幾個(gè)原因：①秋水仙素濃度是否過(guò)高，或處理時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)？第20頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五②加固定液的速度不要過(guò)快，有時(shí)瞬間的固定，會(huì)使蛋白結(jié)構(gòu)產(chǎn)生固縮現(xiàn)象。③固定液中的甲醇、冰醋酸是否有質(zhì)量上的改變。④可以適當(dāng)加大固定液中的冰醋酸的比例，如甲醇∶冰醋酸=3∶1.5第21頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五7、為什么外周血培養(yǎng)過(guò)程中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)凝血現(xiàn)象？在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中下列原因可能會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)后的血液出現(xiàn)凝血現(xiàn)象：①．培養(yǎng)液中的PHA含量過(guò)高。②．培養(yǎng)液中的肝素使用量不足或效價(jià)下降。③．接種后，沒(méi)有立即將外周血與培養(yǎng)液充分搖勻。第22頁(yè)，共24頁(yè)，2023年，2月20日，星期五8、為什么外周血培養(yǎng)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)溶血情況？在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中下列原因可能會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)后的外周血溶血：①、細(xì)菌污染。

②、PHA和肝素過(guò)量。③、外周血樣品不新鮮。第23頁(yè)，共24頁(yè)，20