中國肉牛分子育種研究進(jìn)展

PAGEPAGE1中國肉牛分子育種研究進(jìn)展陳宏1,2基金項目：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863項目基金項目：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863項目)(2006AA10Z197)；國家科技支撐計劃(2006BAD01A10-5)；國家自然科學(xué)基金（30771544），河南省杰出人才創(chuàng)新基金(0521001900)；西北農(nóng)林科技大學(xué)拔尖人才支持計劃項目資助作者簡介：陳宏（1955-），男，陜西西安人，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事動物遺傳育種的教學(xué)和科研工作。E-mail：chenhong1212@263.net(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院，陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點實驗室，楊凌712100；2.徐州師范大學(xué)細(xì)胞與分子生物學(xué)研究所，徐州221116)摘要：本文全面地概述了中國肉牛分子育種的研究進(jìn)展——介紹了中國黃牛肉用選育的歷史背景，開展分子育種的必要性，分子育種研究的內(nèi)容與特點、成就與現(xiàn)狀、問題和展望。重點匯總了DNA分子多態(tài)及其與生產(chǎn)性狀關(guān)系研究的成就，包括肉牛生長發(fā)育、屠宰性狀、肉品質(zhì)性狀、繁殖性狀、抗病性方面候選功能基因的研究，功能基因的克隆與分析，生產(chǎn)性能的微衛(wèi)星標(biāo)記，比較基因組研究與分子進(jìn)化等方面。指出了中國肉牛分子育種研究還存在不夠系統(tǒng)、研究經(jīng)費不足、樣本量偏少和研究群體不夠穩(wěn)定等問題；據(jù)此提出了今后加快中國肉牛分子育種研究的思路、措施和應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：黃牛，分子育種；肉用性能；研究進(jìn)展1中國黃牛肉用選育的背景由于社會經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展和人民生活水平的不斷提高及市場的變化，使中國黃牛的選育方向經(jīng)歷了一系列歷史性的變化，即“役用——以役用為主——役肉兼用——肉役兼用——肉用”的選育過程。20世紀(jì)70年代以前，中國牛業(yè)以役用為主，大部分研究主要是集中在牛的營養(yǎng)代謝試驗、役用性能、生長發(fā)育、生理生化指標(biāo)測定、凍精制作及種質(zhì)特性等基礎(chǔ)研究工作。20世紀(jì)70年代以后，中國黃牛作為農(nóng)業(yè)的動力已退居次要地位，隨著中國良種黃牛委員會的成立，一些品種成立了選育協(xié)作組，先后制定了選育方案、體型外貌鑒定方法、良種登記和畜群檔案制度。在20世紀(jì)70年代中期，中國才提出“獨立的肉牛業(yè)”，但是由于沒有根據(jù)中國本地黃牛的特點，及時總結(jié)世界上肉牛品種利用的歷史，先后引進(jìn)了28個國外肉牛品種進(jìn)行雜交改良，當(dāng)前在中國肉牛生產(chǎn)中影響面最大的當(dāng)數(shù)西門塔爾牛，其次為夏洛來和利木贊。從80年代以后逐漸有計劃的起步黃牛的肉用選育。2中國肉牛分子育種的必要性作為世界牛品種資源寶庫的重要組分，我國黃牛品種資源十分豐富，適應(yīng)性強(qiáng)，肉質(zhì)良好。然而，由于歷史上以役用為主，我國黃牛作為規(guī)?；庥蒙a(chǎn)的牛種，缺點也是明顯的。這主要表現(xiàn)在后軀不發(fā)達(dá)，產(chǎn)肉少，育肥增重速度趕不上國外的專門化肉牛品種，加上沒有經(jīng)過系統(tǒng)的肉用性能選育，肉的品質(zhì)規(guī)格往往差異較大，優(yōu)質(zhì)高檔肉塊產(chǎn)量少，造成發(fā)展肉牛生產(chǎn)的規(guī)模效益比不上專門化的國外肉牛品種。但另一方面，我國各黃牛品種內(nèi)個體間存在極大的差異，一些個體的生長育肥性能較好[1]。在一些群體中，部分個體具有很好的肉用特征。如果通過品種內(nèi)高強(qiáng)度的選擇和培育，完全有可能在較短時間內(nèi)培育成為中國特有的優(yōu)良肉牛品種。據(jù)張英漢報道，我國地方黃牛，例如晉南牛、秦川牛中分別有20％～26％和5％～10％左右的個體具有不亞于國外專門化肉牛品種的肉用體型特點。因此，充分利用這部分牛群，應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)迅速培育、發(fā)展具有我國本地黃牛優(yōu)良的肉質(zhì)特性，且生長速度快、屠宰率和凈肉率較高的新型肉牛品種（系），建立現(xiàn)代的中國種（肉）牛業(yè)是發(fā)展我國肉牛業(yè)的重要戰(zhàn)略目標(biāo)，也是中國面對國外肉用種牛和牛肉產(chǎn)品挑戰(zhàn)的唯一選擇。肉用性狀是典型的、具有重要經(jīng)濟(jì)價值的數(shù)量性狀，受環(huán)境因素影響較大，用常規(guī)育種方法進(jìn)行育種進(jìn)展緩慢。20世紀(jì)80年代后期以來，國際上的動物遺傳育種已經(jīng)進(jìn)入分子水平，即分子育種，使育種朝著快速改變動物基因型的方向發(fā)展。近幾年來，由于分子生物學(xué)和各種分子生物技術(shù)的發(fā)展，使人們有可能直接從遺傳物質(zhì)本身的基礎(chǔ)上揭示生物的性狀特征，它與基因產(chǎn)物的研究相比克服了年齡、性別、組織及各種內(nèi)外環(huán)境因素的影響，而且所提供的遺傳差異，即遺傳標(biāo)記的種類又非常多，因此，分子育種越來越受到人們的重視。進(jìn)入20世紀(jì)90年代中期以后，在我國逐漸開展了黃牛肉用性能的分子遺傳學(xué)研究。采用基因標(biāo)記等現(xiàn)代分子育種新技術(shù)結(jié)合常規(guī)育種，以便能夠加快中國肉牛品種的培育和和選育。然而從總體上來看，目前大部分黃牛品種的繁育盲目性還是太大，遠(yuǎn)沒有建立起完整意義上的現(xiàn)代肉牛純種繁育體系和雜交繁育體系，欲改變這種現(xiàn)狀，將是今后10～20年內(nèi)中國養(yǎng)牛學(xué)界所肩負(fù)艱巨歷史使命之一。3分子育種研究的內(nèi)容和特點動物分子育種（animalmolecularbreeding）是利用分子數(shù)量遺傳學(xué)理論和技術(shù)來改良畜禽品種的一門新興學(xué)科，是傳統(tǒng)的動物育種理論和方法的新發(fā)展。從目前發(fā)展現(xiàn)狀來看，它應(yīng)包括兩方面內(nèi)容：基因組育種（genomicbreeding）和轉(zhuǎn)基因育種（transgenicbreeding）。其中，基因組育種是在比較基因組研究和基因組分析的基礎(chǔ)上，通過DNA標(biāo)記技術(shù)來對畜禽數(shù)量性狀座位進(jìn)行直接選擇，或通過標(biāo)記輔助導(dǎo)入有利基因，通過標(biāo)記輔助淘汰（markerassistedculling，MAC）清除不利基因等，以達(dá)到更有效地改良畜禽的目的。轉(zhuǎn)基因育種則是通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將外源基因?qū)肽撤N動物的基因組上，育成轉(zhuǎn)基因畜禽新品種（系），從而達(dá)到改良重要生產(chǎn)性狀（如生長率、遺傳抗性等）或非常規(guī)性育種性狀（如生產(chǎn)人類藥用蛋白、工業(yè)用酶等）的目標(biāo)。由于動物分子育種是直接在DNA水平上對性狀的基因型或基因進(jìn)行選擇，因此其選種的準(zhǔn)確性大大提高，克服了傳統(tǒng)動物育種方法的缺陷。按照常規(guī)育種方法要提高家畜的生產(chǎn)性能，如瘦肉率、產(chǎn)奶量、增重速度、飼料利用率等，人們往往需要進(jìn)行多代雜交，選優(yōu)交配，最后培育出高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的品種。然而，這種傳統(tǒng)的方法存在著品種育成時間長、育成后再想引入新的遺傳性狀困難大等許多弊端，使帶有新性狀的品種可能同時也攜帶有害基因，雜交后有可能會降低原有性狀。而分子育種能夠克服傳統(tǒng)雜交選擇法的各種缺陷，具有高效、快速育種的特點，目前已顯示出了越來越強(qiáng)大的生命力，必將成為動物遺傳育種學(xué)科發(fā)展的方向和21世紀(jì)動物育種的主流。4中國黃牛分子育種研究進(jìn)展中國黃牛（肉牛）分子育種的研究主要集中在肉用性狀。自從中國黃牛開展了分子遺傳學(xué)研究以來，研究的內(nèi)容已涉及到功能基因的編碼序列和非編碼序列。研究的功能基因已超過40個，這些基因主要包括與中國黃牛生長發(fā)育性狀、屠宰性狀、肉品質(zhì)性狀、繁殖性狀、抗病性狀相關(guān)的基因，非編碼基因包括微衛(wèi)星DNA序列和mtDNA的D-Loop序列。研究的主要目的一是揭示生產(chǎn)性狀的分子遺傳標(biāo)記，直接用于選種；二是揭示品種的分子群體遺傳學(xué)特征，闡明品種間的差異和遺傳關(guān)系，用于雜交效果的預(yù)測、遺傳資源的評價、保護(hù)和開發(fā)利用。目前中國黃牛大部分品種或多或少都進(jìn)行過分子遺傳學(xué)方面的研究，但做的工作比較多的品種主要集中在中國幾個優(yōu)良黃牛品種上，包括秦川牛、南陽牛、魯西牛、晉南牛、延邊牛、郟縣紅牛和培育品種中國西門塔爾牛、草原紅牛以及引進(jìn)品種如利木贊、德國黃牛、紅安格斯牛的雜交系。4.1功能基因多態(tài)與生產(chǎn)性狀關(guān)聯(lián)研究4.1.1生長發(fā)育相關(guān)基因的研究關(guān)于中國肉牛生長發(fā)育候選基因研究較多，涉及GH、GHRH、GHR、POU1F1、IGFBP-3、IGF-1、IGF-2、MEF2、TG、MC3R、MC4R、AGRP、NPY、POMC、CART、Ghrelin、Hcrtr1、Orexin、HTR1B、HTR2A、CLPG等21個功能基因。研究主要集中在秦川牛、南陽牛、魯西牛、晉南牛和郟縣紅牛等重要地方黃牛品種上。秦川牛、魯西牛、南陽牛和中國西門塔爾牛GH基因第5外顯子位點突變等位基因B為體重、體高、體斜長、胸圍的正效應(yīng)等位基因[2]。南陽牛IGF2基因BB基因型初生重、體重、胸圍顯著大于AA型[3]。秦川牛生長激素受體基因的AB基因型效應(yīng)在部分生長性狀上高于其他基因型[4]。南陽牛、秦川牛及雜種牛秦安、秦德、秦利4個群體內(nèi)POU1F1基因AB、BB基因型個體在胸圍，十字部高指標(biāo)上顯著高于群體AA型個體，即BB、AB>AA，可作為秦川牛體尺指標(biāo)(胸圍、十字部高)候選基因之一[5~8]。晉南牛IGFBP-3基因AA型后腿寬顯著高于AB型[2]。CLPG基因AC基因型的體重和體長顯著大于AA、AB型。秦川牛AGRP基因群體中BB基因型個體體重、體高顯著大于AA型個體。南陽牛POMC基因BB型6月齡體重和0～6月齡平均日增重顯著大于AA型。南陽牛DGAT2基因基因型AB的6月齡體重比基因型AA高6.7%；6月齡體高比基因型AC高3.2%，基因型B12月齡的坐骨端寬比基因型AA高3.3%，基因型AB24月齡胸圍比基因型A高3.1%[9]。MC4R基因與牛體重和初生重存在相關(guān)[10]。4.1.2屠宰性狀相關(guān)基因關(guān)于屠宰性狀相關(guān)基因研究相對較少，由于屠宰性狀的樣本資料獲得相對較難，對屠宰性狀遺傳標(biāo)記的研究受到一定的限制?，F(xiàn)共涉及IGFBP-3、DGAT1、DGAT2、MSTN、Myf-5、Myf-6、MyoD、MyoG基因等8個以上的功能基因。IGFBP3基因與秦川牛、南陽牛屠宰率和凈肉率存在相關(guān)[11，12]。魯西牛DGAT1基因KK型腔油重／胴體重明顯高于AA型，而且KK型個體有更高的凈肉率[13]。魯西牛DGAT2基因AA型個體的屠宰率顯著高于AB和BB型。Myf5基因在南陽牛群體中，18月齡南陽牛AA型個體則極顯著高于AB和BB型個體；在秦川牛群體中，AA型個體的體高和十字部高顯著低于AB和BB型個體；郟縣紅牛AA型個體的坐骨端寬顯著高于其它兩種基因型個體。關(guān)于秦川牛、南陽牛、蒙古牛和西門塔爾牛MSTN基因序列特征和多態(tài)性均有報道[14~16]。王珊等[17]（2006）報道了牛MyoG基因的序列特征。4.1.3肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因肉品質(zhì)相關(guān)基因研究涉及Leptin、CAST、CAPN1、CAPN4、UCP3、H-FABP基因等6個功能基因。牛CAST基因中的B等位基因，尤其是BB純合基因型對牛肉嫩度具有顯著影響，并且在利木贊品種內(nèi)達(dá)到極顯著[18]。CAPNI基因A3717G位點上，AG基因型和GG基因型的嫩度值好于AA基因型的嫩度值；在A3854G位點上，GG基因型的嫩度值好于AA基因型的嫩度值[19]。李武峰[20]（2002）和李君靈[21]（2006）利用PCR-RFLP技術(shù)研究牛小亞基鈣蛋白酶(CAPN4)基因第5內(nèi)含子的遺傳變異，共發(fā)現(xiàn)了5個SNP，但對肉質(zhì)無影響。H-FABP基因中h等位基因，尤其是hh純合基因型對牛肉WBS值有較大的影響[22]；；魯西黃牛BB純合基因型對牛肉嫩度剪切力值有較大的影響[23]。IGFBP3基因AA型個體的眼肌面積大于BB型個體(P<0.05)，AB型和BB型個體胴體脂肪含量高于AA型個體[12]。牛DGAT1基因KK型和KA個體外脊肌肉剪切力低于AA型個體[13]。4.1.4繁殖性狀相關(guān)基因關(guān)于繁殖相關(guān)基因研究很少。在中國黃牛繁殖性狀的研究中，目前主要是針對牛的雙胎性展了一些研究，涉及的品種有秦川牛、中國荷斯坦牛、魯西牛、晉南牛、南陽牛、延邊牛等。FSHR基因第一外顯子TaqI酶切位點出現(xiàn)多態(tài)，并與牛的繁殖性狀存在相關(guān)[24~26]。魯西牛GDF9基因的3’UTR發(fā)現(xiàn)缺失突變，發(fā)現(xiàn)該多態(tài)位點與單、雙胎性狀之間基因型分布存在顯著差異，雙胎牛群體B等位基因頻率顯著大于單胎牛[27]4.1.5抗病性相關(guān)基因關(guān)于抗病相關(guān)基因的研究主要集中在MHC基因家族，另外還有自然抗性相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白1基因(nramp1)、白細(xì)胞介素IL-8受體基因（cxcr1）、TOLL樣受體4基因（tlr4）、乳鐵蛋白基因（lf）和一些易感染病菌過程中的受體蛋白基因及一些突變的正常基因。在中國黃牛上相關(guān)的研究不是太多。MHC基因家族在中國黃牛中具有豐富的多態(tài)性。在中國荷斯坦牛中，人們將這種多態(tài)性與牛的乳房炎相關(guān)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析[28~29]，獲得了一些抗性的基因類型。在中國地方黃牛中，許多抗性基因的研究主要集中在多態(tài)性方面，其主要原因是沒有找到合適反映中國黃?？共〉闹笜?biāo)體系。孫東曉（2001）[30]報道了蒙古牛MHC-DRB和DQB基因外顯子2的多態(tài)性，結(jié)果表明蒙古牛BoLA-DRB的第二外顯子的第70、182位的堿基以及DQB基因的第二外顯子的第24、38、74、108、122、138、177位的堿基出現(xiàn)多態(tài)。王愛勤等（2005）[31]在魯西黃牛、渤海黑牛群體中，陳智華等（2007）[32]在大額牛群體中發(fā)現(xiàn)相似規(guī)律。王興平等（2006）[33]利用PCR-RFLP技術(shù)在魯西牛、秦川牛、晉南牛和南陽牛群體中新發(fā)現(xiàn)DRB3基因第2外顯子的第154位C>A突變。但沒有與抗病性狀相關(guān)的報道。4.2基因的克隆與功能分析在中國黃牛上，一些基礎(chǔ)研究也在不斷深入，特別是對一些重要功能基因的分子遺傳特征、功能和表達(dá)研究。Zhangetal.(2007)[34]首次報道了對采食有重要調(diào)控作用的HCRTR1基因的遺傳變異，發(fā)現(xiàn)了新的SNP位點。甘海云等（2007）[35]克隆測序了中國荷斯坦牛、魯西黃牛和渤海黑牛三個品種的MC1R基因，新發(fā)現(xiàn)了1個SNP。張林等（2006）[36]成功地克隆到了牛IL-18全基因，與GeneBank所登錄的牛IL—l8核苷酸序列及其推導(dǎo)氨酸序列同源性分別是99.5％和99.0％。與人、獼猴、野豬、山羊?qū)?、馬等核苷酸序列及其推導(dǎo)氨基酸序列同源性分別在84.9％～99.5％和74．9％～99％之間。張輝等（2006）[37]從脂肪組織總RNA中擴(kuò)增得到ADPN基因的501bp片段，其cDNA序列與GenBank牛ADPN基因序列同源性為85％，其氨基酸同源性為96％。王峰等（2005）[38]首次獲得了牛BMP4基因的部分外顯子序列，并與羊、人、小鼠、大鼠等動物的BMP4基因序列進(jìn)行了同源比對。馬云等（2006）[39]克隆了牛FABGL基因的cDNA進(jìn)行了序列分析，并對推導(dǎo)的FABGL蛋白結(jié)構(gòu)與性質(zhì)進(jìn)行了初步分析。張春雷等（2007）[40]對牛性情調(diào)控的基因分子遺傳基礎(chǔ)進(jìn)行了探索。在秦川牛上，已對Ghrelin基因、NPY基因全序列進(jìn)行了克隆，并成功地在原核生物中得到表達(dá)[41~42]）?？傊@方面的研究多集中在基因部分片段上，缺少全面性，研究的不夠深入，特別在功能和表達(dá)分析方面相關(guān)報道還很少。4.3生產(chǎn)性能的微衛(wèi)星標(biāo)記研究微衛(wèi)星DNA多態(tài)性較多，在中國黃牛上的研究涉及到BM1500、BM1824、BM2113、BM315(215)、CSSM66、ETH152、ETH185、ETH225、HEL1、HEL13、HEL5、HEL9、ETHl0、INRA005、TGLA126、TGLA227、IDVGA2、IDVGA3、IDVGA27、IDVGA44、IDVCA46、oarHH55、TGLA126等23個位點，但這些研究主要用于分析牛的親緣關(guān)系和起源進(jìn)化，與生產(chǎn)性狀相關(guān)分析研究相對較少。BM1824位點基因型與肉牛的生長、產(chǎn)肉以及雙胎性狀均存在相關(guān)[2,43]。BM2113位點的142-/144-/158-基因型對秦川牛的體長、體高、胸圍、腰角寬、尻長有顯著的標(biāo)記效應(yīng)，而對于秦川牛的體軀指數(shù)的標(biāo)記效應(yīng)達(dá)到極顯著[2]。CSSM66位點的181-/183-基因型對秦川牛的尻長影響達(dá)到顯著，對體軀指數(shù)的影響達(dá)到極顯著[2]。ETH225位點與秦川牛及其雜交群體的生長性狀存在相關(guān)[2]。HEL13位點在雙胎牛中比單胎牛缺一條230bp的等位基因,INRA005位點在雙胎牛中比單胎牛缺一條217bp的等位基因[44]。秦川牛IDVGA-3位點163-183基因型個體的眼肌面積顯著高于163-163型個體[45]。草原紅牛IDVGA46等位基因D(211bp)對3個肌肉度評分性狀肩部、腰厚、大腿肌有負(fù)相關(guān)；等位基因B(205bp)在腰厚方面有正相關(guān)[46,47]。4.4黃牛比較基因組研究與分子進(jìn)化對于中國黃牛遺傳資源方面的研究主要集中在中國黃牛的起源進(jìn)化和親緣關(guān)系研究，這方面的研究國際上一直很重視。在中國，黃牛品種間的親緣關(guān)系和起源進(jìn)化研究進(jìn)展最快，研究方法已從蛋白質(zhì)多型性分析，轉(zhuǎn)變?yōu)楹薉NA和線粒體DNA序列特征分析。線粒體DNAD－loop的多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)中國黃牛有普通牛與瘤牛兩大起源，其中普通牛單倍型又可分為4個支系（T1～T4），其遺傳多樣性豐富，首次發(fā)現(xiàn)中國黃牛中有非洲牛支系T1，占1.03%。中國瘤牛也有兩個支系I1和I2，但其遺傳多樣性十分貧乏[48~49]。對mtDNACytb基因進(jìn)行了測序分析，界定了47個單倍型，105個多態(tài)位點，證實中國黃牛有普通牛與瘤牛兩大母系起源[50]。從分子水平證明西藏黃牛是普通牛和瘤牛的混合起源，并且發(fā)現(xiàn)中國黃牛中普通牛與瘤牛類型的分布是有特點的，在北方黃牛中，只存在普通牛類型，在中原黃牛與南方黃牛中，絕大部分都是普通牛與瘤牛的混合類型，只有雷瓊牛是瘤牛類型[51]。從Y染色體微衛(wèi)星位點證實普通牛和瘤牛兩種起源在中國黃牛不同品種中的分布頻率有明顯差異。普通牛類型從南向北逐漸增加，瘤牛類型從南向北逐漸減少。中原黃牛群受兩種類型牛影響因品種不同而差異很大[52]。發(fā)現(xiàn)中國和東南亞沼澤型水牛有兩個mtDNA支系A(chǔ)和B，并初步證明亞洲沼澤型水牛（中國水牛）是在中國獨立馴化的[53]。5中國肉牛分子育種存在的問題中國黃牛分子育種研究方面已取得很大進(jìn)展，已獲得了許多關(guān)于中國黃牛分子遺傳特征的信息，也發(fā)現(xiàn)了一些與生產(chǎn)性狀有關(guān)聯(lián)的基因和基因類型，這些為今后對中國黃牛的進(jìn)一步研究和在分子育種方面的應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。但是，中國黃牛分子育種研究目前還存在一些問題。5.1分子育種研究系統(tǒng)性不夠我國肉牛分子育種起步較晚，但研究進(jìn)展較快。然而，許多研究比較零散，不夠系統(tǒng)、深入。主要表現(xiàn)在：①許多研究只涉及基因的部分片段，全基因序列研究的不多。②基因的功能研究涉及的較少，也比較膚淺；③功能基因表達(dá)調(diào)控分析方面的研究還不多；④在中國地方黃牛上轉(zhuǎn)基因研究似乎還尚未開展。5.2研究經(jīng)費不足分子育種研究，需要投入大量的人力、物力和資金。在中國黃牛上，我國對于這方面的研究投入力度較小，迄今中國肉牛分子育種方面的研究開展的還不夠深入。由于研究經(jīng)費有限，研究工作只能零敲碎打，檢測的手段也比較落后。在發(fā)達(dá)國家已將基因芯片技術(shù)應(yīng)用于分子育種研究，開展重要功能基因的篩選、鑒定和SNP檢測，目前已開發(fā)出許多基因試劑盒用于輔助選擇。5.3樣本量較少在遺傳標(biāo)記的分析中樣本量是很關(guān)鍵的，雖然目前對樣本量沒有嚴(yán)格的要求。但樣本量越大越準(zhǔn)確是無疑的。在我國由于尚無較大的、規(guī)?；闹袊S牛育種場，樣本量的獲得受到了限制。所以，國內(nèi)肉牛研究的樣本量一般較小，早期研究的樣本量才只有十幾頭，從而影響了研究結(jié)果的可性靠。5.4研究群體的穩(wěn)定性差在我國，一些肉牛分子育種研究尚無固定的試驗群體，有些是用農(nóng)民飼養(yǎng)的黃牛個體及資料，個體流動性較大，追蹤驗證困難，一些表現(xiàn)優(yōu)秀的個體，過段時間往往被賣掉。所以，開展分子育種必須建立穩(wěn)定的育種核心群體。6中國肉牛分子育種的思路和展望6.1中國肉牛分子育種的思路6.1.1中國肉牛分子育種今后研究的重點目前牛基因組草圖已完成，?；驁D譜的飽和度大幅度提高。所以今后中國黃牛分子育種研究的重點主要應(yīng)放在分析控制肉牛重要經(jīng)濟(jì)性狀功能基因座位的數(shù)量及對相應(yīng)表型的影響；尋找和擴(kuò)大遺傳多態(tài)標(biāo)記的數(shù)量和在基因組中的定位；基因功能的鑒定和相互作用及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)關(guān)系分析；用MAS技術(shù)來實現(xiàn)提高肉牛育種項目遺傳進(jìn)展速度和效益；基因組數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)和實驗信息及資源共享體系的建立與完善，以及基因轉(zhuǎn)移技術(shù)在中國黃牛肉用選育中的應(yīng)用研究等。6.1.2建立健全肉牛育種場（企業(yè)）的技術(shù)檔案體系為了提高分子育種技術(shù)的準(zhǔn)確性，相應(yīng)的技術(shù)資料是非常重要的，所以，不但需要建立穩(wěn)定的育種核心群體，還需要建立健全肉牛育種場（企業(yè)）的技術(shù)檔案，以便提高分子育種的可靠性和準(zhǔn)確性。6.1.3應(yīng)加強(qiáng)中國肉牛分子育種研究的投入為了加快中國肉牛分子育種研究的開展，國家、地方應(yīng)加大投資力度，并調(diào)動各方面的積極性，鼓勵相關(guān)企業(yè)積極參與和投資，早日培育出中國特色的肉牛新品種（系）。6.1.4分子育種與其他生物技術(shù)相結(jié)合在培育中國特色肉牛新品種中，除了采用分子育種技術(shù)外，還應(yīng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，胚胎生物工程技術(shù)緊密結(jié)合，加快優(yōu)良個體的擴(kuò)繁。6.1.5應(yīng)將分子育種與常規(guī)育種技術(shù)緊密結(jié)合在分子育種過程中，分子育種不能代替常規(guī)育種技術(shù)，常規(guī)肉牛育種技術(shù)和現(xiàn)代分子育種技術(shù)兩者的有效結(jié)合，是未來中國肉牛育種的行之有效的根本措施。6.2中國肉牛分子育種的展望綜上所述，中國的肉牛分子輔助選擇技術(shù)研究已取得重要進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)了一批具有應(yīng)用前景的遺傳標(biāo)記。目前，盡管在肉牛分子育種研究中還存在一些需要改進(jìn)的地方，但肉牛分子育種研究的勢頭很好，仍處于快速發(fā)展時期，隨著研究的不斷深入和研究成果的不斷積累，肉牛的分子育種實踐的到來會為時不遠(yuǎn)，由于它能夠使選種的準(zhǔn)確性提高，大大加快肉牛肉用性能的選育，無疑將成為未來肉牛新品種培育和品種改良的主要工具。參考文獻(xiàn)[1]張英漢.論肉用、役用經(jīng)濟(jì)類型劃分的意義和方法(BPI指數(shù))[J].黃牛雜志，2001，27(2)：1-5.[2]黨瑞華五個肉牛群體屠宰性狀的DNA分子標(biāo)記研究西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文，2005[3]張爭鋒，陳宏，李秋玲.南陽牛IGF2基因第2外顯子多態(tài)性及其與生長發(fā)育相關(guān)性研究.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2007，38(1)：8～l3.[4]趙高鋒，陳宏，雷初朝.秦川牛GHR基因SNPs及其與生長性狀關(guān)系的研究.遺傳，2007，29(3)，319-323.[5]劉波，陳宏，藍(lán)賢勇.秦川牛及其利秦雜種牛lGFBP3基因PCR-SSCP多態(tài)性研究.中國農(nóng)學(xué)通報，2005，21（9），10～11.[6]薛愷，陳宏，王珊.POU1F1基因的遺傳變異對南陽牛生長發(fā)育性狀的影響.遺傳學(xué)報，2006，33（10），901-907.[7]ChuanyingPAN,XianyongLAN,HongCHEN,LiushuaiHUA,YikunGUO,BaoZHANG,andChuzhaoLEI.Fivenovelsinglenucleotidepolymorphisms(SNPs)oftheprophetofPIT1(PROP1)geneinbovine.Arch.Tierz.(ArchivesofAnimalBreeding),2007,(50)4:421-423[8]C.Y.PAN,X.Y.LAN,H.CHEN,D.Y.YANG,L.S.HUA,X.B.YANG,C.Z.LEI,Y.K.GUO,B.ZHANG,C.L.ZHANG,X.T.KangandX.Z.Wang.ADdeIPCR-RFLPdetectinganovelmissensemutationofPOU1F1geneshowednoeffectsongrowthtraitsincattle.CzechJ.Anim.Sci.,2007,(inpress)[9]張爭鋒，陳宏，李秋玲.南陽牛DGAT2基因PCR-RFLP多態(tài)性及其與生長性狀相關(guān)性研究.遺傳，2007，29（8）：945～950.[10]C.L.Zhang,H.Chen*,Y.H.Wang,X.Y.Lan,L.Zhang,A.L.Zhang,R.F.Zhang.AssociationofamissensemutationoftheMC4Rgenewithgrowthtraitsincattle.ArchivesofAnimalBreeding，2006，49（5）：515－516.[11]孫維斌，陳宏，雷雪芹.IGFBP3基因多態(tài)性與秦川牛部分屠宰性狀的相關(guān)性.遺傳，2003，25(5)：511～516.[12]黨瑞華，魏伍川，陳宏.IGFBP3基因多態(tài)性與魯西牛和晉南牛部分屠宰性狀的相關(guān)性.中國農(nóng)學(xué)通報，2005，21（3）：19～22.[13]徐秀容高雪許尚忠.牛DGAT1基因的K232A取代等位基因分布頻率及對部分胴體性狀的影響.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006，11(4)：11～15[14]史明艷，昝林森，王勇強(qiáng).秦川牛、南陽牛雙肌基因的PCR-SSCP檢測.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報2003，12(3)：21～23.[15]史明艷，昝林森，李保蘭.牛Myostatin基因單核苷酸多態(tài)性分析.中國農(nóng)學(xué)通報，2005，21（6）：24～26.[16]孟和，張永春，陳衛(wèi)紅.蒙古牛肌肉生長抑制素基因編碼序列檢測分析.上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版)，2004，22（4）：339～342.[17]王珊，陳宏，蔡欣.牛MyoG基因啟動子的克隆與序列分析.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2006，34（8）：12～16[18]鄧桂馨.肉牛CAST基因和HFABPL基因多態(tài)性及其與肉品質(zhì)性狀關(guān)系的研究.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文，2003.[19]吳慧光.肉牛Calpain1基因的SNPs篩查及其與肉質(zhì)相關(guān)性分析.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文.2006.[20]李武峰.肉牛H-FABP基因和CAPN4基因分子多態(tài)性與肉品質(zhì)性狀的相關(guān)分析.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文.2002[21]李君靈，許尚忠，李武峰.雜種牛CAPN4基因第六內(nèi)含子的遺傳變異與牛肉嫩度的關(guān)聯(lián)分析.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006，26（3）：247～249.[22]李武峰,許尚忠,曹紅鶴.3個雜交牛種H-FABP基因第二內(nèi)含子的遺傳變異與肉品質(zhì)性狀的相關(guān)分析.畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2004,35(3),252～255[23]周國利，朱奇，郭善利.魯西黃牛H-FABP基因的多態(tài)性及其與肉質(zhì)性狀關(guān)系的分析.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2005，14(3)：5～7[24]魏伍川，許尚忠.牛FSHR基因5端側(cè)翼序列的分析和多態(tài)性研究.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2002，33(5)，417～423[25]魏伍川，許尚忠，張英漢.牛促卵泡素受體基因多態(tài)性的頻率差異研究.湛江師范學(xué)院學(xué)報，2003，24（3）：29～32.[26]雷雪芹，魏伍川，陳宏，許尚忠，袁志發(fā).6個牛品種FSHR基因位點的遺傳關(guān)系及其對多胎與雙胎性狀的標(biāo)記.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，32（7）：1-6.[27]張路培張小輝許尚忠.牛GDF9和BMP15基因遺傳變異與雙胎性狀的關(guān)系研究.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2007，38(8):800～805[28]楊東英，陳宏，張良志.中國5個牛種leptin基因外顯子3的多態(tài)性分析.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2006，34（8）：17～20[29]馬捷瓊.中國荷斯坦牛乳房炎抗性及其產(chǎn)乳性狀的基因標(biāo)記研究.徐州師范大學(xué)碩士學(xué)位論文，2007.[30]孫東曉，張沅，李寧.蒙古牛MHC—DRB，和DQB基因的PCR—RFLP多態(tài)性分析.農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，2001，9（4)：342～345[31]王愛勤，李樹春，毛永江.MHC-DRB3.2基因在牛亞科3個群體中的PCR-RFLP多態(tài)性分析.揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版)，2005，26（4）：43～46.[32]陳智華，顧磊，鐘金城.大額牛Bola-DRB3基因第2外顯子的PCR—RFLP多態(tài)性分析.中國牛業(yè)科學(xué)，2007，33（2）：4～8[33]王興平，許尚忠，咎林森.?？共』駼oLA-DRB3的新等位基因的發(fā)現(xiàn).畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2006，37(7)，722~726[34]LZHANG，ALZHANG，HCHEN，CLZHANG，LZZHANG，ZYZHU，CZLEI，XYLANandXZWANG.Elevensinglenucleotidepolymorphisms(SNPs)werefoundatcodingregionofhypocretinreceptor1(HCRTR1)geneincattle.Arch.Tierz.,(ArchivesofAnimalBreeding),2007，50(2)：220-222.[35]甘海云，張秀紅，李景鵬.牛MC1R基因－新的SNP.中國奶牛，2007，4：6～7[36]張林，金寧一，馬鳴瀟.牛IL.18基因的克隆及遺傳進(jìn)化分析.中國免疫學(xué)雜志，2007，1：68～71.[37]張輝，王哲，張才.牛脂聯(lián)素基因cDNA克隆.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2006，11：10～13.[38]王峰，劉永斌，榮威恒.牛BMP4基因部分eDNA的克隆和序列分析.畜牧與飼料科學(xué)，2005，5：25～27[39]馬云，許尚忠，高雪.牛FABGL基因cDNA的克隆與序列分析.西北農(nóng)林科技大學(xué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