基因工程知識(shí)點(diǎn)超全

基因工程知識(shí)點(diǎn)超全基因工程概念術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)的別名剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)實(shí)質(zhì)(原理)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，定向改造生物的遺傳特性基本工具---“分子手術(shù)刀”3、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-----“分子運(yùn)輸車”1．“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶) (1)存在：主要存在于原核生物中。 (2)特性：特異性，一種限制酶只能 特定的切點(diǎn)上切割(3)切割部位：DNA分子。磷酸二酯鍵(4)作用：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。(5)識(shí)別序列的特點(diǎn)：(6)切割后末端的種類：DNA分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式——在它識(shí)別序列的黏性末端和平末端。當(dāng)限制酶中軸線兩側(cè)將DNA的兩當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中軸線處切開(kāi)：將限制酶切割下來(lái)的DNA片段拼接成DNA分子。 (2)類型TDNA連接酶種類E·coliTDNA連接酶T噬菌體來(lái)T噬菌體4縫合兩種末端，但連接平末端之間的效率較低只能將雙鏈4縫合兩種末端，但連接平末端之間的效率較低的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái)相同相同點(diǎn)：都連接磷酸二酯鍵構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌擬核之外，并?！窘忸}技巧】，高溫、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿點(diǎn)，質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因。適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是()AA但基因與載體也可以連接起來(lái)。(2)為了防止載體或目的基因的黏性末端自己連接，可用不同的限制酶分別處理目體，使目的基因兩側(cè)及載體上具有兩個(gè)不同的黏性末端端單鏈對(duì)間的氫鍵基因工程的操作步驟(1)直接分離法文庫(kù)中獲取目的基因(2)人工合成法不需要模板。(4)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因DNA聚合酶。知目的基因的脫氧核苷酸序列，以便合成引物。2．基因表達(dá)載體的構(gòu)建——基因工程的核心胞。轉(zhuǎn)P5物種類植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)感受態(tài)細(xì)胞法體細(xì)胞體細(xì)胞卵原核細(xì)胞過(guò)植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞(1)標(biāo)記基因的作用——篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常見(jiàn)的有抗生素抗(2)受體細(xì)胞常用植物受精卵或體細(xì)胞(經(jīng)組織培養(yǎng))、動(dòng)物受精卵(一般不用體細(xì)胞)、微生物(大腸桿菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素則必須用真核生物酵母菌(需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌)；一般不用支原體，原因是它營(yíng)寄生生活；一定不能用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，原因是它無(wú)細(xì)胞核，不能合成蛋白R(shí)NA最核心、最關(guān)鍵的一步，在體外進(jìn)行。A．用同種限制酶切割載體與目的基因可獲得相同的黏性末端B．以蛋白質(zhì)的氨基酸序列為依據(jù)合成的目的基因與原基因的堿基序列相同C．檢測(cè)到受體細(xì)胞含有目的基因就標(biāo)志著基因工程操作的成功D．用含抗生素抗性基因的質(zhì)粒作為載體是因?yàn)槠淇剐曰虮阌谂c外源基因連接藥物的比較②工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表達(dá)的菌類細(xì)胞株系。比較項(xiàng)目乳腺生物反應(yīng)器工程菌基因的結(jié)構(gòu)基本相同與人類基因的結(jié)構(gòu)有較大差異藥物蛋白與天然細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，產(chǎn)生的藥物蛋白可受體細(xì)胞動(dòng)物的受精卵受體細(xì)胞導(dǎo)入目的基顯微注射法不需嚴(yán)格滅菌，溫生產(chǎn)條件度等外界條件對(duì)其生產(chǎn)條件影響不大(金榜P189)(金榜P189)微生物細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞法需嚴(yán)格滅菌，嚴(yán)格控制工程菌所需的溫度等外界條件從微生物細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列基因工程獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)胧軝z測(cè)與鑒定系程定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)可生產(chǎn)自然界沒(méi)有的①蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來(lái)程定向改造生物的遺傳特生物類型或生物產(chǎn)品只能生產(chǎn)自然界已有的②基因工程中所利用的蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生(1)概念：指利用正常基因置換或彌補(bǔ)缺陷基因的治療方法。(2)方法：基因置換、基因修復(fù)、基因增補(bǔ)、基因失活等。如：腺苷酸脫氨酶(ADA)基因缺陷癥的基因治療。(3)基因治療的途徑再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)。如腺苷酸脫氨酶基因的轉(zhuǎn)接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因的治病方法。(1)概念：又稱DNA診斷，是采用基因檢測(cè)的方法來(lái)判斷患者是否出現(xiàn)了基因異常行。當(dāng)用一段已知基因的單鏈作探針(常用同位素、熒光分子等進(jìn)行標(biāo)記)，與變性(1)基因治療后，缺陷基因沒(méi)有改變?；蛑委熓前颜；?qū)胧荏w細(xì)胞中，以表的基因沒(méi)有清除或改變。(2)對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行改造，其本質(zhì)是改變其基因組成。如果對(duì)蛋白質(zhì)直接改造，即A．基因工程原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)工程可以對(duì)現(xiàn)有蛋