流式細胞儀介紹

流式細胞儀介紹第1頁/共51頁流式細胞儀產(chǎn)品介紹第2頁/共51頁主要內(nèi)容流式細胞儀基本原理MACSQuant流式的性能流式的競爭分析第3頁/共51頁流式細胞儀基本原理第4頁/共51頁

流式細胞術(shù)（FCM）：就是對在高速流動的鞘液包括下的細胞、粒子進行分析和分選的技術(shù)，這種細胞或粒子是經(jīng)過特異熒光標記的。其特點是測量速度快，每秒鐘能測數(shù)千個乃至上萬個細胞，且可進行多參數(shù)測量。流式細胞術(shù)的概念第5頁/共51頁流式細胞術(shù)發(fā)展趨勢單純到復(fù)雜檢測熒光參數(shù)定量手動到自動熒光試劑第6頁/共51頁液流檢測器

光源電子計算機層流鞘液細胞樣本鞘液注射口激光流動室流式細胞檢測原理第7頁/共51頁細胞可被檢測的參數(shù)(無探針標記)散射光信號:

細胞內(nèi)在的結(jié)構(gòu)參數(shù)細胞大小

前向角散射(FSC)細胞內(nèi)部顆粒性

側(cè)向角散射(SSC)

ForwardLightDetector

CellSurfaceAreaIncidentLightSource第8頁/共51頁

是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長不同。區(qū)分陰陽性：通過熒光強度可將同一個細胞群體中的有熒光標記的細胞與無熒光標記的細胞區(qū)分開來。

區(qū)分陽性強弱：也可以將陽性細胞中的高FL的細胞與低FL的細胞區(qū)分開來。相對熒光強度（FL）(需探針標記)第9頁/共51頁散點圖

密度圖二維等高圖直方圖圖報告中常見的幾種流式細胞圖如何看流式圖第10頁/共51頁流式細胞術(shù)的應(yīng)用

流式細胞術(shù)在細胞生物學(xué)中的應(yīng)用

染色體核型分析在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用用于性別的預(yù)選擇在微生物學(xué)中的應(yīng)用在細胞周期研究中的應(yīng)用

流式細胞術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用在免疫學(xué)中的應(yīng)用流式細胞術(shù)在腫瘤學(xué)上的應(yīng)用在血液學(xué)研究中的應(yīng)用

流式細胞術(shù)新的應(yīng)用第11頁/共51頁流式細胞儀的臨床應(yīng)用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細胞計數(shù)細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數(shù)殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關(guān)疾病12第12頁/共51頁臨床意義了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)輔助臨床疾病的診斷探索疾病的發(fā)病機理、病程、預(yù)后監(jiān)測、指導(dǎo)臨床治療方案免疫系統(tǒng)疾病免疫缺陷病，AIDS移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測腫瘤病人化療后免疫力檢測第13頁/共51頁流式細胞儀的科研應(yīng)用樹突細胞研究干細胞研究癌癥病人的多藥耐藥性細胞周期和細胞凋亡流式細胞術(shù)與分子生物學(xué)研究細胞系的鑒定細胞內(nèi)蛋白的分析細胞膜電位測定細胞內(nèi)鈣離子測定第14頁/共51頁流式細胞儀潛在客戶醫(yī)院：血液科，檢驗科，風濕免疫病科，腫瘤科，細胞治療科,開展移植（肝腎）的科室?？蒲性核按髮Ｔ盒＃好庖呦祷蛎庖邔嶒炇遥行膶嶒炇?，分子生物學(xué)室，腫瘤研究所，血液病研究所。第15頁/共51頁MACSQuant流式細胞儀

——細胞分析的里程碑第16頁/共51頁多參數(shù)細胞分析MACSQuant光學(xué)參數(shù)Excitation(nm)OpticalchannelFiltersFluorochromes405nmFL1450/50VioBlue?/PacificBlue?488nmFL2525/50FITCFL3585/40PEFL4655-730PI/7-AAD/PE-Cy5.5/PerCPFL5750(LP)PE-Cy7635nmFL6655-730APCFL7750(LP)APC-Cy7488nmSSC/FSC488/10FSC/SSC三激光紫色

(405nm) 40mW藍色

(488nm) 25mW紅色

(635nm) 20mW

9個光學(xué)參數(shù)FSC/SSC+7個熒光通道第17頁/共51頁MACSQuant光路系統(tǒng)第18頁/共51頁MACSQuant流式細胞儀的創(chuàng)新特性：集成，臺式數(shù)字化流式細胞儀強大并且直觀的軟件多參數(shù)：3激光，9個參數(shù)（FSC,SSC,FL1-7)12寸觸摸屏（內(nèi)置）不同用戶登錄模式，可用密碼進行保護2種不同的模式（針對有豐富經(jīng)驗和無流式經(jīng)驗的人員）分析速度可達10000個細胞/秒,無需計數(shù)微珠進行絕對計數(shù)不同的流速控制：25/50/100uL/分鐘自動化處理樣本，自動進樣，自動清潔，自動補償,自動標記矩陣補償和脫機補償小巧（60X35X40cm）、低噪、低熱。流式細胞儀基本特征第19頁/共51頁細胞富集系統(tǒng)絕對計數(shù)，無需微珠自動補償自動進樣自動標記AnewmilestoneincellanalysisMACSQuant?分析儀功能強大、操作簡單的多參數(shù)細胞分析的理想工具

(高端儀器–操作簡單–多種自動化選擇)

第20頁/共51頁MACS?富集系統(tǒng)使用MACS微珠磁性富集細胞細胞被富集后再進行流式細胞術(shù)分析預(yù)富集的應(yīng)用：內(nèi)皮祖細胞檢測——頻率:每105PBMCs中有1個細胞(如CD34的預(yù)富集)腫瘤細胞檢測——頻率:每107PBMCs中有1個細胞(如EpCAM的預(yù)富集)抗原特異性T細胞檢測——(如CD154的預(yù)富集)成分檢測可以只檢測富集后組分或者同時檢測原始標本、陰性組分和陽性組分MACSQuant流式細胞儀獨有特征：高靈敏度地分析稀有細胞第21頁/共51頁每次反應(yīng)后，自動計算每μL體積中的細胞數(shù)——無須計數(shù)磁珠，細胞培養(yǎng)后往往需要細胞計數(shù)，可以完全替代細胞計數(shù)儀CD4絕對計數(shù)用于輔助HIV監(jiān)測治療CD34絕對細胞計數(shù)用于干細胞移植MACSQuant流式細胞儀獨有特征：絕對細胞計數(shù)(容積型)第22頁/共51頁自動化的多樣本處理：使用MACS?MiniSampler和MACS?冷凍試管架靈活性高，可使用不同的試管

——

5mLtubes——15mLtubes——50mLtubes通量高(從Chill96rack到96孔板)MACSQuant流式細胞儀獨有特征：自動進樣第23頁/共51頁MACSQuant流式細胞儀獨有特征：自動標記MACS微型載樣器上的試劑架，可最多放置4支染色試劑，如：PI/7-AAD熒光素標記的抗體抗體混合物(如MACSMCCocktails)全系列試劑(抗體和試劑盒),如:MACS對照抗體混合物:MCCD14MonocyteCocktail,human

MCCD19BCellCocktail,human

MCCD34/CD133Cocktail,human

MCCD34Cocktail,human

MCCD4TCellCocktail,mouse

MCCD90PanTCellCocktail,mouse

MCCD19BCellCocktail,mouse

…

第24頁/共51頁MACSQuant流式細胞儀獨有特征：完全自動化的儀器設(shè)置全自動的儀器校準(使用MACSCalibrationBeads)7x7矩陣補償自動補償，對多色分析自動生成補償值手動補償?shù)?5頁/共51頁儀器操作簡單、易行:溶液瓶(1.5L)附著在儀器兩側(cè)(通過瓶子上不同的指示燈來顯示機器狀態(tài))結(jié)構(gòu)：數(shù)字化分析速率>10,000events/秒流速:25/50/100μL/minMACSQuant?Analyzer第26頁/共51頁自動化的儀器設(shè)置自動校準儀器（使用MACS校準微珠）自動補償7X7自動矩陣補償自動清洗自動化進樣和抗體標記帶有清洗工作站（washingstation）的進樣針自動化進樣針臂（y,z方向移動）無加壓系統(tǒng)溶液瓶附著在儀器上儀器狀態(tài)能夠通過溶液瓶的不同顏色來指示用戶友好的儀器操作第27頁/共51頁12‘’觸摸屏（內(nèi)嵌）Livesupport遠程網(wǎng)絡(luò)服務(wù)，德國工程師進行遠程在線檢修機器VGA接口(連接第二個顯示器或者代替的顯示器)功能強大、易于操作——直觀的操作界面(用于儀器控制,數(shù)據(jù)獲取和數(shù)據(jù)分析)——不同的用戶模式——拖拉式安裝——含預(yù)設(shè)程序——在個人電腦上進行獨立數(shù)據(jù)分析——MACSQuant數(shù)據(jù)（MQD)文件

-FCS格式-FCS3.0-與其它流式軟件兼容軟件基本特征第28頁/共51頁簡捷的數(shù)據(jù)處理:個人用戶登錄數(shù)據(jù)自動保存在對應(yīng)的用戶文件夾中MQD–文件(內(nèi)部格式)數(shù)據(jù)儲存/備用:可用硬盤驅(qū)動器/DVDRW驅(qū)動器,USB接口,以太網(wǎng)絡(luò)連接軟件基本特征軟件簡單易操作:鍵盤在顯示屏上(觸摸式顯示屏)USB接口–可用來連接外設(shè)的鼠標、鍵盤條形碼讀碼器第29頁/共51頁MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第30頁/共51頁MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第31頁/共51頁MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第32頁/共51頁流式相關(guān)抗體針對流式檢測的全系列抗體。。。。-FITC-PE-APC-Vioblue-……第33頁/共51頁北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所流式細胞儀檢測報告姓名：

性別：

年齡：

標本：病歷：

診斷：

編號：淋巴細胞占有核細胞

%CD3+細胞占有核細胞

%CD4+細胞占有核細胞

%CD8+細胞占有核細胞

%CD14+細胞占有核細胞

%簽名：審核者：日期：第34頁/共51頁競爭優(yōu)勢:預(yù)富集功能，高敏感性檢測罕見細胞，比如臨床最常用的造血干細胞、腫瘤干細胞、pDC等。非常節(jié)省細胞，對于科研珍貴標本尤為重要！絕對的細胞計數(shù)，無需計數(shù)微珠，細胞培養(yǎng)后往往需要細胞計數(shù)儀，可以完全代替細胞計數(shù)儀。自動標記，自動進樣，自動清洗，節(jié)省時間。自動補償，對多色分析自動生成補償數(shù)值小巧的臺式機設(shè)計,低噪，低熱非加壓系統(tǒng)進樣MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis35(25)第35頁/共51頁儀器的競爭分析

第36頁/共51頁BD的各種機型（一）caliburAriaLSRII第37頁/共51頁BD的各種機型（二）

CantoIIInflux第38頁/共51頁Beckman的各種儀器（一）EPICSXL-ADC

CytomicsFC500Gallios

MofloEPICSXL-Altra

Quanta

第39頁/共51頁Partec公司各種機型（適合植物學(xué)研究）第40頁/共51頁Amnis公司的ImageStreamX圖像流式細胞儀

被評為2008年度生命科學(xué)十大創(chuàng)新產(chǎn)品之一，是流式細胞儀上的新突破.第41頁/共51頁Milipore公司的GuavaEasyCyteMini/EasyCytePlus無鞘液毛細管細胞分析儀

第42頁/共51頁Accuri的c6-流式細胞儀

一種全功能、二激光、六探測器分析流式細胞儀系統(tǒng)

第43頁/共51頁MACSQuant?Analyzer–“add-ons”MACS?MiniSamplerChillRacks(Chill5,15,50or96welladapter)MACSQuant?ColumnsAdditionalyearsofServiceFluorochromes,MACS?ControlCocktailsandMicrobeadsInstrumentTrainingMACSQuant?CalibrationBeadsMACSQuant?StartingBufferkitIndividualBuffer/Solutionboxes第44頁/共51頁

第45頁/共51頁MACSQuant?AnalyzersintheWorldBelgiumCanadaChinaFranceGermanyIcelandIrelandItalyJapanRussiaSouthKoreaSyriaUnitedKingdomUnitedStatesComingsoontothelistis:Australia第46頁/共51頁FlowCytometryMarketEstimatedtobe$1.5billionin2008(CAGR~10-15%,$3.7billionin2015)Instruments68%-$1.02billionReagents32%-$480millionSalesin2009Total–6.1million€(4.7million€)Instruments–2.632million€(~0.36%)Reagents–3.4million€(~0.99%)第47頁/共51頁WhobuystheMACSQuant?AnalyzerInnovatorsarethefirsttopurchaseinstrumentsandnewgadgetsMostcountriesarecurrentlysellingtotheearlyadoptersSomecountrieshavesoldafewMQandarenowsellingtotheresearcherswhowant/needgreaterscientificarguments...MustbetargetedtomaximizeoursuccessGuidelineshavebeenfollowedinseveralcountriesandsuccessisseen!第48頁/共51頁Whathavewelearned?MiltenyiBiotecisstillanewplayerinflowcytometryWhat