生物基因工程浙教選修

生物基因工程浙教選修第1頁/共13頁基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶I的識別序列和切點是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是－↓GATC－。根據(jù)圖示,判斷下列操作正確的是（）

A．質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

B．質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

C．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅰ切割

D．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割A第2頁/共12頁第2頁/共13頁（山東）2.繼哺乳動物乳腺生物反應器研發(fā)成功后，膀胱生物反應器的研究也取得了一定進展。最近，科學家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。（1）將人的生長激素基因?qū)胄∈笫荏w細胞，常用方法是

。（2）進行基因轉(zhuǎn)移時，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入

中，原因是

。（3）通常采用

技術檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組。（4）在研制膀胱生物反應器時，應使外源基因在小鼠的

細胞中特異表達。（5）為使外源基因在后代長期保持，可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細胞的

轉(zhuǎn)入

細胞中構(gòu)成重組細胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個體。該技術稱為

。顯微注射技術

受精卵（或早期胚胎）受精卵（或早期胚胎細胞）具有全能性，可使外源基因在相應組織細胞表達DNA分子雜交（核酸探針）膀胱上皮去核的卵核移植（或克隆）細胞核第3頁/共12頁第3頁/共13頁對某一DNA進行酶切，用A限制性內(nèi)切酶酶切時，得到1個DNA片段，用B限制性內(nèi)切酶酶切時，得到3個DNA片段，若同時用A、B限制性內(nèi)切酶酶切時，得到4個DAN片段，則可判斷該DNA有

個A限制性內(nèi)切酶切點，有

個B限制性內(nèi)切酶切點。13第4頁/共12頁第4頁/共13頁

第一步：獲取目的基因（目的基因的序列已知）①化學方法合成目的基因②PCR(聚合酶鏈式反應)擴增目的基因2、從基因文庫中獲取目的基因（目的基因的序列未知）1、人工合成目的基因(根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列直接合成)第5頁/共12頁第5頁/共13頁（1）來源：（2）作用：原核生物(主要)識別和切割DNA分子內(nèi)特定核苷酸序列

即:一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點上切割DNA分子。（3）特點：專一性(特異性)1、限制性核酸內(nèi)切酶磷酸與脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵（4）作用部位:（5）作用結(jié)果:產(chǎn)生黏性末端或平末端第二步：形成重組DNA分子第6頁/共12頁第6頁/共13頁2、“分子縫合針”

——DNA連接酶（1）作用：連接DNA片段間的磷酸二酯鍵，將外源基因和載體連接在一起（2）常用種類：①E.coliDNA連接酶：來源：大腸桿菌作用：只連接黏性末端②T4DNA連接酶：來源：T4噬菌體作用：連接黏性末端、平末端DNA連接酶比較DNA聚合酶第7頁/共12頁第7頁/共13頁3、“分子運輸車”——運載體⒈載體需要的條件：⑴能在受體細胞中自主復制、表達并穩(wěn)定保存⑵有1~多個限制酶切點，以便與外源基因連接⑶有某些標記基因，便于篩選

⑷對受體細胞無害⒉常用運載體：

⑴質(zhì)粒⑵噬菌體或某些動植物病毒（最常用：大腸桿菌的質(zhì)粒）：環(huán)狀雙鏈DNA第8頁/共12頁第8頁/共13頁1.將目的基因?qū)胫参锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法2.將目的基因?qū)雱游锛毎@微注射技術（最多、最有效）3.將目的基因?qū)胛⑸锛毎鸆aCl2處理，以增加細菌細胞壁的通透性?；ǚ酃芡ǖ婪ǖ谌剑簩⒅亟MDNA分子導入受體細胞第9頁/共12頁第9頁/共13頁第四步：篩選含有目的基因的受體細胞檢測:轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因常用方法：利用標記基因(抗性基因)進行篩選或DNA分子雜交技術第10頁/共12頁第10頁/共13頁

基因工程是否獲得成功，最重要的是要看目的基因是否在受體細胞中得到表達。第五步：目的基因表達1、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA？

DNA—RNA分子雜交技術2、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)（表達）？抗原—抗體雜交如何檢測目的基因是否表達？檢測是否產(chǎn)生了目的基因產(chǎn)物。第11頁/共12頁第11頁/共13頁SEO（SearchEngineOptimization）:漢譯為搜索引擎優(yōu)化。搜索引擎優(yōu)化是一種利用搜索引擎的搜索規(guī)則來提高目前網(wǎng)站在有關搜索引擎內(nèi)的自然排名的方式。SEO的目的理解是：為網(wǎng)站提供生態(tài)式的自我營銷解決方案，讓網(wǎng)站在行業(yè)內(nèi)占據(jù)領先地位，從而獲得品牌收益；北京seo/北京seojzh41kbeSEO包含站外SEO和站內(nèi)SEO兩方面；SEO是指為了從搜索引擎中獲得更多的免費流量，從網(wǎng)站結(jié)構(gòu)、內(nèi)容建設方案、用戶互動傳播、頁面等角度進行合理規(guī)劃，使網(wǎng)站更適合搜索引擎的索引原則的行為；使網(wǎng)站更適合搜索引擎的索引原則又被稱為對搜索引擎優(yōu)化，對搜索引擎優(yōu)化不僅能夠提高SEO的效果，還會使搜索引擎中顯示的網(wǎng)站相關信息對用戶來說更具有吸引力?！蝗荒氵€有其他選擇？”寶音沒有。她警惕的把簪子交給七王爺。“轉(zhuǎn)身?！逼咄鯛斝Φ?，“不然我怎么分剔？”寶音只好轉(zhuǎn)身，把后腦勺給他。他一手按定寶音的肩，摸到她的肩頭，骨胳纖圓，似女兒家。另一只手，他用簪子，剔出當中頭路，旋剔、旋把先一只手從肩上抬起來，挽住半邊的頭發(fā)，免得又散亂了新剔清的路數(shù)。他接觸到她的頭發(fā)，觸感與他想像的一樣好。他的鼻息吹動她后脖頸的細發(fā)，聞到她領口中散發(fā)出來的香味，像是半明半昧的黃昏，春正盛，細細的桃紅色小花半開半闔、纖瓣半掩著弱蕊。這也完全是女兒家一路的香氣。七王爺想：“這孩子真是天生的孌童?！彼佑|過太多比女孩子更美、更柔弱的男孩子，以至于完全沒猜疑寶音是女扮男裝。第八十五章自毀入宮路（4）頭路剔得，他把簪子還給寶音，寶音接簪在手，忙忙后退，回肘摸了摸頭上，果然沒什么馬腳，便攏起半邊頭發(fā)，綰上去，盤定了，以發(fā)帶系牢，插進簪子去。七王爺時看女眷、丫頭們梳頭，有時也幫上兩手，從沒見人不借鏡子、自梳自發(fā)，能梳得這樣流暢熟練的，不覺稱奇。寶音結(jié)好這一邊的髻，抬頭看七王爺一眼，想說話，又不敢說?！澳阒v你講?！逼咄鯛斝念^大蕩，但覺對這孩子，沒什么不能應允的要求?！拔伊硪恢⒆印睂氁粝虢衅咄鯛斪屢蛔?，她好去座位后頭尋那支丟了的簪子?！芭杜?！”七王爺忙忙的從袖子里，把那支簪子拿出來。被這樣的孩子簪子打到頭，他如果丟在地上、不收進袖子里，他也不是憐香惜玉的七王爺了！簪子被他體溫焐得暖融融的。寶音用指尖拈著這簪子，雖無潔癖，也很有一種“被玷污了”的感覺，然也無法了，就把另一邊發(fā)髻也挽起。外頭忽有異動，似官兵捉賊，又似朝廷拿叛，呼啦啦狼奔蝗突，殺來好一隊人馬！這些人有的穿本地城兵服裝、有的著朝廷正式戎裝、有的是太守府里家丁號衣，有的騎馬、有的徒步，有的佩刀、有的握矛，每種站一隊，倒也整齊。四個人引領他們，排成六花圓陣，把酒廬包圍得嚴嚴實實。酒廬里的所有人，禍從天降，不知自己犯了何事，想驚呼不敢驚呼、想逃不敢逃，都兩股戰(zhàn)戰(zhàn)、目瞪口呆，有那不爭氣的，連褲檔都濕了。還幸唐靜軒認得那領頭的四人，是七王爺?shù)乃膫€侍衛(wèi)，便抖抖簌簌上前交涉：“大人……”“我們王爺呢？”健銳營侍衛(wèi)面色鐵青?！八碧旗o軒也多喝了幾杯，愣沒