免疫學實驗：流式CBA多因子檢測

【嘉美實驗】雖然液相蛋白定量檢測的技術很多，但是大多數(shù)的技術僅能對樣本進行單一指標的檢測，同時檢測多個指標時則需要提供大量的樣本分批檢測，操作繁瑣，且各指標間差異性較大。對于樣本量較少或需要對比各指標的用戶，傳統(tǒng)的技術無法滿足需要。日常實驗中，常需對溶液體系中的可溶性蛋白進行定量檢測，如細胞培養(yǎng)上清或血清中的細胞因子含量的定量分析，由于這些因子的含量較少，低于一般常規(guī)方法的檢測下限，使用常規(guī)的蛋白檢測方法WesternBlot等很難檢測。為此，著名的流式抗體公司BD-Pharmingen開發(fā)了基于流式細胞儀的液相蛋白定量技術——CBA。嘉美生物是該技術在國內最早的推廣者，并同時為廣大生命科學研究者提供流式CBA的檢測外包服務。CBA工作原理：CytometricBeadArray（CBA），即細胞因子微球檢測技術。是一種基于流式細胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法，它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。BD公司利用流式細胞儀可對熒光信號進行級數(shù)放大的特性，將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細胞直徑的微粒上，即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。CBA的基本原理近似于ELISA的檢測，即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆粒一一待測物復合體所散發(fā)的熒光，從而測定待測物的數(shù)量。SeedCaptureAbCaptureBeadAnalyteMinterestdrl^clignAb詳細原理介紹：每個CBA微球大小一致，具有特定的熒光強度，包被有適用于特定分析（如其它抗體或者可溶性蛋白）的特異性捕獲抗體（CaptureAntibody），提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。當微球和待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品（血清、血漿或者細胞培養(yǎng)液）中相應的抗原或蛋白結合，然后加入熒光標記的檢測抗體，就會形成“三明治”夾心復合物。最后通過流式細胞儀對特異性目的蛋白進行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強度的紅色熒光，在流式細胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性；檢測抗體帶有PE熒光素標記，在流式細胞儀的FL2通道檢測，通過檢測抗體的PE熒光強度定量目的蛋白。CBA技術特點：CBA是集ELISA和細胞流式技術優(yōu)點為一身的液相蛋白檢測技術。CBA的每一種微球提供一種蛋白的捕獲表面，捕獲微球與待測樣品后，呈懸浮態(tài)，與ELISA相比，能更有效地捕獲被分析物；CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測特點，對樣本需求量更少，檢測更快速、更準確。下面我們介紹一下CBA主要的技術特點：1、輕松實現(xiàn)多重檢測。最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行精確定量。2、樣本需要量小。僅需要50〃L溶液就可進行一次檢測。3、更高的靈敏度。分析靈敏度高達2.8pg/mL。4、更高的靈敏度、更寬的檢測范圍和更好的重復性°CBA技術使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別，檢測范圍達0-5000pg/ml，所有分析只需一組標準曲線。根據(jù)抗體的熒光強度對目的蛋白定量，排除了ELISA反應中酶聯(lián)放大產(chǎn)生的假陽性。5、檢測對象的靈活組合一BDCBAFlexSet。CBAkit是同時檢測試劑盒配好的6個指標，形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需要和研究興趣，BD于2005年初推出了CBAFlexset。它改變了CBAkit的固定形式，成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標，最多能同時檢測75個指標。除了擁有CBAkit的優(yōu)勢外，F(xiàn)lexSet還配有獨立的軟件分析系統(tǒng)(CBAFlexSetAnalysisSoftware)，并且可以在BDFACSArrayBioanalyzer上，直接用96孔和384孔板進行操作。CBAFlexset賦予研究者更靈活、更自由，更大的選擇空間，而且進一步豐富了CBA產(chǎn)品線。種類涉及免疫、細胞信號傳導、細胞凋亡等許多領域的蛋白定量分析。6、操作簡單，省時省力。CBA技術采用芯片式集成測定，所有檢測只需一組標準曲線，就可計算出每種待測蛋白濃度；操作簡單，整個流程只需要3.5小時，對待測樣本可做實時分析，縮短檢測了時間，提高了檢測效率。傳統(tǒng)ELISA流式CBA檢測技術單項檢測多參數(shù)檢測7、強大的軟件分析系統(tǒng)。BDCBA軟件具有強大的數(shù)據(jù)處理能力，直接將目標蛋白的檢測結果換算成標準濃度；除了為用戶提供待測物的計數(shù)結果外，還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶獲得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系統(tǒng)兩種版本供您選擇。和傳統(tǒng)的液相蛋白定量技術相比，CBA技術是一種“多元”和“同步”的檢測技術。革新的傳統(tǒng)ELISA流式CBA檢測技術單項檢測多參數(shù)檢測每項實驗樣本用量50-200ul樣本用量少于50ul需要抗原包被操作方便，節(jié)省時間實驗時間大于24h流式細胞儀自動檢測，標準曲線自動測定，專用軟件自動計算酶-底物背景干擾無酶-底物背景干擾CBA應用：自CBA上市以來，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應用于他們的領域。CBA應用領域涉及眼淚、血清、唾液、細胞培養(yǎng)上清等樣本中細胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白分析，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控，腫瘤研究，藥物對病人的治療效果評估，藥物研發(fā)，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領域。CBA指標檢測明細：1、CBA指標目錄號產(chǎn)品說明檢測指標557800Non-humanPrimateTh1/Th2CytokineKitIL-2,IL-4,IL-5,IL-6,TNF,IFN-y560485MouseTh1/Th2/Th17CytokineKitIL-2,IL-4,IL-6,IFN-y,TNF,IL-17A,IL-10551287MouseTh1/Th2CytokineKitIL-2,IL-4,IL-5,IFN-y,TNF552364MouseInflammationKitIL-6,IL-10,MCP-1,IFN-y,TNF,IL-12p70550026MouseImmunoglobulinIsotypingKitHeavyandlightchainisotypesofmouseIgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3,IgA,IgM,andIgE560484HumanTh1/Th2/Th17KitIL-2,IL-4,IL-6,IL-10,TNF,IFN-y,IL-17A550749HumanTh1/Th2CytokineKitIL-2,IL-4,IL-5,IL-10,TNF,IFN-g551809HumanTh1/Th2CytokineKitIIIL-2,IL-4,IL-6,IL-10,TNF,IFN-g551811HumanInflammatoryCytokineKitIL-8,IL-13,IL-6,IL-10,TNF,IL-12p70

552990HumanChemokineKitIL-8,RANTES,MIG,MCP-1,IP-10561418HumanAnaphylatoxinKitC3A,C4A,C5A2、CBAFlexSet細胞因子檢測指標HumanMouseRatIFN-y,INF-asCD121a,sCD121bIFN-yIFN-yIL-1a,IL-16,SolubleCD14IL-1a,IL-16,IL-2,IL-3,IL-1a,IL-4,IL-6,IL-2,IL-3,BasicFGFIL-4,IL-5,IL-6,IL-9,IL-10IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,vegfIL-10,IL-12,IL-12p70,TNFIL-8,IL-9,IL-10,AngiogeninIL-13,IL-17A,IL-21,IL-11,IL-12,IL-12p70,g-csf,gm-csfIL-23p40,IL-13,IL-17A,IL-21,lifTNFIL-23p40LT-aMIGtnf,tnfri,tnfriiOSMMCP-1IP-10GranzymeA,MIP-1a,MIP-16I-TACGranzymeBRANTESMIGFasLigand(FasL)KCMCP-1FractalkineCD62E(E-Selectin),MIP-1a,MIP-16IgA,IgG1,IgG2,CD62L(L-Selectin)EotaxinIgG3,IgG4,IgM,G-CSF,GM-CSFRANTESTotalIgG,CD54(ICAM-1)CD62E,CD62P,CD62LCD106(VCAM-1)sCD40sCD1543、CBAFlexSet信號轉導指標PhosphoAkt1(S473)PhosphoAkt2(S474)PhosphoBLNK(Y84)Phosphop120Catenin(Y228)PhosphoBtk(Y551)PhosphoMEK1/2(S222)PhosphoeNOS(S1177)PhosphoPaxillin(Y118)PhosphoERK1/2(T202/Y204)PhosphoPyk2(Y402)PhosphoItk(Y511)PhosphoSLP-76(Y145)PhosphoJNK1/2(T183/Y185)Phosphoc-jun(S63)Phosphop38(T180/Y182)Phosphostat3PhosphoPLCg(Y783)TotalStat1PhosphoRsk(T573)TotalSykPhosphoStat1(Y701)TotalZAP70PhosphoSyk(Y352)PhosphoZAP70(Y319)4、CBAFlexSet干細胞指標HumanRex-1FlexSetHumanNanogFlexSetHumanOct-4FlexSet嘉美實驗期待著在流式CBA的檢測中與您合作。更多的實驗、技術及產(chǎn)品的咨詢，請聯(lián)系嘉美生物！嘉美生物是一家主要從事AnnexinV,信號轉導抗體，重組人和動物蛋白，磷酸化抗體，各種動物ELISA試劑盒,生物實驗服務等研發(fā)與銷