大腸桿菌培養(yǎng)專家講座

微生物培養(yǎng)和利用第二節(jié)大腸桿菌培養(yǎng)和分離試驗大腸桿菌培養(yǎng)第1頁思索？

1.培養(yǎng)大腸桿菌需要配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中應(yīng)該添加哪些營養(yǎng)成份？培養(yǎng)基怎樣滅菌？2.若大腸桿菌和其它微生物混雜在一起，怎樣取得大腸桿菌純種？取得純種后怎樣保留？

3.怎樣處理大腸桿菌便于在顯微鏡下觀察？大腸桿菌培養(yǎng)第2頁試驗主要原理1.培養(yǎng)大腸桿菌原理：大腸桿菌代謝類型為異養(yǎng)、兼性厭氧型，培養(yǎng)基中應(yīng)加入有機碳源、氮源、水和無機鹽。培養(yǎng)時應(yīng)提供有氧環(huán)境。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，（20g瓊脂）加水定容至1000mL大腸桿菌培養(yǎng)第3頁2.平板劃線法分離大腸桿菌原理用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，將聚集菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)屢次劃線后，能夠分離由一個細胞繁殖而來單菌落大腸桿菌培養(yǎng)第4頁此法可將細菌分為兩大類：不被脫色而保持藍紫色者為革蘭氏陽性菌（G+）；被脫色后又被染上紅色者為革蘭氏陰性菌（G-）。大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)金黃葡萄球菌(革蘭氏陽性菌)細菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，再經(jīng)碘液媒染（以增加染料與細胞親和力）后，用酒精或丙酮脫色，再用番紅復(fù)染。3.革蘭氏染色，使大腸桿菌便于觀察原理大腸桿菌培養(yǎng)第5頁試驗?zāi)繕?/p>

1.配制牛肉膏蛋白胨固體、液體培養(yǎng)基，進行高壓蒸汽滅菌2.掌握倒平板技術(shù)。3.利用液體培養(yǎng)基進行大腸桿菌擴增。

4.用平板劃線法在固體培養(yǎng)基上進行接種5.培養(yǎng)微生物并觀察大腸桿菌單菌落6.顯微鏡下觀察大腸桿菌形態(tài)7.利用斜面培養(yǎng)基和劃線取得單菌落進行純培養(yǎng)。

大腸桿菌培養(yǎng)第6頁斜面大腸桿菌菌種大腸桿菌培養(yǎng)第7頁試驗流程

LB液體LB固體50ml培養(yǎng)基配制和滅菌用于大腸桿菌擴增擴大培養(yǎng)（代替斜面菌種）倒平板，大腸桿菌劃線培養(yǎng)取得單菌落（純種分離）100mL

5mL

挑取單菌落或液體培養(yǎng)基，制片，顯微鏡下觀察大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)第8頁

1.培養(yǎng)基配制和滅菌

稱量溶化稱量→溶化→調(diào)pH→分裝→高壓蒸汽滅菌→擱斜面大腸桿菌培養(yǎng)第9頁分裝加棉塞大腸桿菌培養(yǎng)第10頁包扎大腸桿菌培養(yǎng)第11頁高壓蒸汽滅菌大腸桿菌培養(yǎng)第12頁大腸桿菌培養(yǎng)第13頁擱置斜面大腸桿菌培養(yǎng)第14頁2.無菌操作倒平板3.平板劃線法接種大腸桿菌培養(yǎng)第15頁4.37℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)12~24h倒置培養(yǎng)原因：培養(yǎng)基中水分會以水蒸氣形式蒸發(fā)，并凝結(jié)成水滴留在培養(yǎng)皿蓋上；水蒸氣形成水滴會落入培養(yǎng)基表面而且擴散開。假如培養(yǎng)皿中已形成菌落，則菌落中菌會隨水擴散，菌落間相互影響，極難再分成單菌落，達不到分離目標。大腸桿菌培養(yǎng)第16頁大腸桿菌培養(yǎng)第17頁5.利用液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)大腸桿菌搖床上震蕩培養(yǎng)目標：6.顯微鏡下觀察染色后大腸桿菌增加溶氧使菌體和培養(yǎng)液充分接觸大腸桿菌培養(yǎng)第18頁試驗結(jié)果觀察和分析

1.觀察平板劃線法取得單菌落大腸桿菌培養(yǎng)第19頁大腸桿菌培養(yǎng)第20頁請分析沒有出現(xiàn)單菌落可能原因？菌液濃度大劃線次數(shù)少培養(yǎng)時間長大腸桿菌培養(yǎng)第21頁2.觀察液體培養(yǎng)基渾濁度空白培養(yǎng)基生長細菌培養(yǎng)基大腸桿菌培養(yǎng)第22頁3.顯微鏡下觀察經(jīng)革蘭氏染色大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)第23頁1.平板劃線法分離微生物純種方法2.液體稀釋涂布法大腸桿菌培養(yǎng)第24頁1.試驗結(jié)束后，用過細菌培養(yǎng)基等怎樣處理？思索與討論

加熱滅菌后廢棄，不能直接傾倒到無機環(huán)境中，預(yù)防細菌污染2.怎樣保留菌種？在無菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出，再劃線接種在空白斜面上，37℃培養(yǎng)24h后，4℃冰箱保留。3.未接種培養(yǎng)基表面有菌落出現(xiàn)