反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的含量

反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的含量［摘要］目的：采用反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的含量。方法：色譜柱為phenomenex-Cg18(4.6mmx250mm,5pm)，流動(dòng)相為甲醇：水:冰乙酸=172:27:1;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;流速為2.0mL/min;進(jìn)樣量lO^L。結(jié)果：克林霉素棕櫚酸酯在0.16~3.20mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9992,日間、日內(nèi)RSD均小于1.5%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確可靠，可用于鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的質(zhì)量控制。［關(guān)鍵詞］鹽酸克林霉素棕櫚酸酯;含量測(cè)定;高效液相色譜法RP-HPLCdeterminationofcontentofClindamycinPalmitateHydrochlorideGranulesZhengXi-zi.(DepartmentofPharmacy,People'sHospitalofChangshou,Chongqing,Chongqing401220,China)［Abstract］Objective:Anreversedphasehighperformanceliquidchromatograph(RP-HPLC)methodwasestablishedfordeterminationofcontentofClindamycinPalmitateHydrochlorideGranules.Methods:Thechromatographicanalysiswasperformedonaphenomenex-ODS(4.6mmx250mm,5ym).Themobilephaseconsistedofmethanol,water,andglacialaceticacid(172:27:1).Thedetectionwavelengthwasat280nm.Theflowratewas2.0mL.min-1,withinjectionvolumelO^L.Results:Therewasagoodlinearrelationshipwithintherangeof0.16?3.20mg/mL(r=0.9992).Thereproducibilityandpreciseofmethodwasgood.Conclusion:Thismethodisaccurate,specificandcanbeusedforthequlitycontrolofClindamycinPalmitateHydrochlorideGranules.［Keyword］ClindamycinPalmitateHydrochloride;contentdetermination;RP-HPLC鹽酸克林霉素棕櫚酸酯是克林霉素的衍生物,體外無(wú)抗菌活性,在體內(nèi)經(jīng)酯酶水解形成克林霉素而發(fā)揮抗菌活性。本品對(duì)金黃葡萄球菌和表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌等均有較好的抗菌作用,對(duì)流感嗜血桿菌及淋病奈瑟氏球菌中度敏感。部分耐紅霉素的金黃葡萄球菌、表皮葡萄球菌對(duì)本品仍敏感。對(duì)革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性厭氧菌均有較好的抗菌作用［1］。鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒由重慶西南合成制藥股份有限公司研制生產(chǎn),商品名“可爾生”,在臨床上應(yīng)用較廣泛,常用于治療兒童上呼吸道和泌尿道感染等。本文考察了鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒含量的HPLC測(cè)定方法，為制劑的質(zhì)量控制提供了方法學(xué)依據(jù)。儀器與材料LC-10ATvp高效液相色譜儀(日本島津公司)；克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品(購(gòu)自上海紫爵貿(mào)易有限公司，經(jīng)精制后色譜峰為單峰)；鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒(可爾生)購(gòu)自重慶西南合成制藥股份有限公司(批號(hào)070504，規(guī)格為含克林霉素37.5mg)；甲醇為色譜純；其它試劑為分析純。含量測(cè)定色譜條件參照文獻(xiàn)［2-3］,選定試驗(yàn)條件為：色譜柱為phenomenex-C(4.6mmx250mm,5pm)；流動(dòng)相為18甲醇:水:冰乙酸=172:27:1；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；流速為2.0mL/min；進(jìn)樣量10yL。對(duì)照品溶液的制備稱取在60°C減壓干燥16h的對(duì)照品適量，精密稱定，置50.0mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為3.20mg/mL的鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品溶液，備用。供試品溶液的制備取本品10袋，合并內(nèi)容物，混勻，取混合物適量，精密稱定，加水溶解制成每1mL中約含0.5mg(以克林霉素計(jì)算)的溶液。精密量取5mL,置具塞離心試管中，精密加入氯仿5mL,加入碳酸鈉溶液(30—100)1mL，用力振搖具塞離心試管15min,離心10min(轉(zhuǎn)速為2500r/min)，棄去水層，取氯仿層3mL,用無(wú)水碳酸鈉1g干燥。離心，精密量取氯仿液1mL于干燥的小試管中，通氮?dú)庹舾伞＞芗尤肓鲃?dòng)相1mL使殘留物溶解，作為供試品溶液。系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)精密吸取流動(dòng)相、“2.2”、“2.3”項(xiàng)下溶液適量，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見(jiàn)圖1。

由圖1可知，與克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品比較，供試品克林霉素棕櫚酸酯色譜峰分離良好，符合高效液相色譜法的要求。B圖1流動(dòng)相(A)、對(duì)照品(B)和供試品(C)色譜圖Fig.1ChromatogramsofMobilephase(A),standard(B)andsample(C)ofClindamycinpalmitate最低檢測(cè)限和最低定量限取克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成供試液，按上述色譜條件取10pL進(jìn)樣。經(jīng)試驗(yàn)，當(dāng)進(jìn)樣濃度為3.8yg/mL時(shí)，信噪比為3:1,即最低檢測(cè)限為3.8yg/mLX10yL=38ng；當(dāng)進(jìn)樣濃度為13.5yg/mL時(shí)，信噪比為10:1，即最低定量限為13.5yg/mLX10yL=135ng。線性范圍考察取對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密吸取0.5、1、2、4、10mL,置10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度依次為0.16、0.32、0.64、1.28、3.20mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。照上述色譜條件，進(jìn)樣10“,l記錄色譜圖，以樣品濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為：A=94411.2c+305345,r=0.9992,線性范圍為0.16?3.20mg/mL精密度試驗(yàn)分別取0.16、0.64、3.20mg/mL三種系列濃度的對(duì)照品溶液，于1d內(nèi)分別進(jìn)樣5次及5d內(nèi)分別進(jìn)樣5次；由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程分別計(jì)算日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見(jiàn)表1。表1精密度試驗(yàn)結(jié)果Table1Resultsofprecisiontest濃度（日內(nèi)RSD(%,n=5)日間RSD(%，n=5)0.161.271.350.641.421.143.201.021.222.8樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取070504批樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫放置，在12h內(nèi)每隔3h進(jìn)樣測(cè)定1次，測(cè)得供試品溶液中克林霉素棕櫚酸酯的濃度RSD為1.46%，結(jié)果表明在12h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定性較好。2.9重復(fù)性試驗(yàn)取070504批樣品，按2.3項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣，測(cè)得濃度RSD為1.29%，表明該法重復(fù)性較好。2.10回收率試驗(yàn)取克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品約16mg、20mg和24mg各三份，精密稱定，按處方比例100%,加入輔料適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果詳見(jiàn)表2。表2回收率試驗(yàn)結(jié)果Table2Resultsofrecoverytest加入量（mg）測(cè)得量（mg）回收率（％）平均值（％）RSD%17.8517.6899.080%17.2217.38100.917.6817.98101.720.3620.59101.1100%19.9820.15100.9100.51.0920.4020.58100.924.7624.5699.2120%25.4225.86101.725.1824.9699.1含量測(cè)定取批號(hào)為070504樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算含量，樣品含量測(cè)定結(jié)果為103.02%。4討論鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的含量測(cè)定方法采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；氣溶膠-醋酸銨-醋酸-水-甲醇（1：0.77：1：20：480）為流動(dòng)相；檢測(cè)器為折光檢測(cè)器4-5］，流動(dòng)相較復(fù)雜，儀器要求較高。本作者采用美國(guó)藥典25版中的高效液相含量測(cè)定方法［3］，采用三元流動(dòng)相和紫外檢測(cè)器，降低了對(duì)試劑和儀器的要求，可以在廣大實(shí)驗(yàn)室中推廣使用。流動(dòng)相采用等度洗脫系統(tǒng)，用二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品的峰純度大于99.8%，表明主峰為單一峰，在210?400nm波長(zhǎng)掃描，未露檢雜質(zhì)峰。本方法靈敏度高、方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好。克林霉素棕櫚酸酯濃度在）.16?3.20mg/