細菌性食物中毒的實驗室支持

細菌性食物中毒的實驗室支持第1頁/共112頁食物中毒的概念定義：國家標準(GBl4938)中界定了食物中毒，指攝入了含有生物性、化學性有毒有害物質的食品或者把有毒有害物質當作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。即食物中毒指通過飲料或食物及其盛具、容器、包裝材料進入人體的某種致病性微生物及其毒素、有害有毒的化學物質(包括有毒動植物)等引起的，多數(shù)是以急性胃腸炎癥狀為主要特征的一群疾病。但不包括已知的傳染病，寄生蟲病、人畜共患性疾病、食物過敏和暴飲暴食所引起的急性胃腸炎等食源性疾病。第2頁/共112頁食物中毒的特點

食物中毒常呈集體性爆發(fā)，其種類很多，病因也很復雜，一般具有下列共同特點：⑴.潛伏期短，在短時間內可能有很多人同時發(fā)病。⑵.有相似的臨床表現(xiàn)，病人都有大致相同的臨床表現(xiàn)。⑶.與飲食有關，凡進食某種有毒食品的人大都發(fā)病，沒有進食該種有毒食品的人不發(fā)病。發(fā)病和食物有明顯關系，一旦停止食用這種有毒食品，發(fā)病立即停止。⑷.發(fā)病率高、爆發(fā)性，人與人不傳染，一般沒有傳染病流行時的余波或拖尾現(xiàn)象。(5).發(fā)病季節(jié)性強，一般多發(fā)于4-10月份，6-9月進入高峰期。第3頁/共112頁食物中毒分類一般按病原物質，將食物中毒分為五類。⑴.細菌性食物中毒：是指由于食入被病原菌或其有毒代謝產物污染的食物后，所引起的以急性腸胃炎為主要中毒癥狀的疾病。⑵.真菌性食物中毒：指食入被真菌及其毒素污染的食物而引起的食物中毒。⑶.動物性食物中毒：指攝入動物性有毒食品引起的食物中毒。⑷.植物性食物中毒：攝入植物性中毒食品引起的食物中毒。⑸.化學性食物中毒：攝入化學性有毒食品引起的食物中毒。第4頁/共112頁細菌性食物中毒細菌性食物中毒：是指人們吃了大量活菌或活菌產的毒素養(yǎng)污染的食品所引起的種毒現(xiàn)象。細菌性食物中毒按發(fā)病機理又分為感染型食物中毒、毒素型食物中毒和混合型食物中毒。第5頁/共112頁感染型食物中毒

指食物被污染并繁殖了大量食物中毒性微生物（包括病原菌和條件致病菌，如沙、志、金、變形、蠟樣、副溶、耶爾森、產氣莢膜梭菌、枯草桿菌等）這種含有大量活菌（一般在107/g以上）的食物被攝入機體后，引起一系列消化道癥狀的現(xiàn)象，稱為感染型食物中毒，此類種毒是由細菌本身引起。第6頁/共112頁毒素型食物中毒

食物被能產生毒素的微生物如葡萄球菌、肉毒梭菌、產氣莢膜梭菌等污染，并在適宜的條件下生長繁殖，產生了某種毒素，這種毒素同污染的微生物一起或單獨隨食物被攝入體內，所引起的一系列的中毒現(xiàn)象，稱為毒素型食物中毒。第7頁/共112頁混合型食物中毒

有的細菌性食物中毒，有感染型食物中毒的特征，又具有毒素型食物中毒的特征，稱為混合型食物中毒。如產氣莢膜梭菌、蠟樣芽胞桿菌等引起的食物中毒，這種食物中毒在檢驗時，應得視毒素養(yǎng)的檢測。第8頁/共112頁樣品采集及時、準確、有代表性地采集食源性疾病相關樣本，是保證實驗室檢驗質量的前提、對食源性疾病病因的明確診斷、病人的急救治療、查明有毒食品來源及毒性具有重要意義。第9頁/共112頁食物中毒標本的采集原則1．典型性原則食物中毒標本的采集不同于衛(wèi)生評價采樣，應根據(jù)可疑食物的性質采集可能含毒最多的標本。2．適時性原則為了防止可疑食物丟失和被檢物質組分發(fā)生變化，保證得到正確結論必須盡快采樣送檢。流調人員到達現(xiàn)場后應及時采樣送檢。3．適量性原則

由于引起食物中毒的毒物種類繁多，有時需實驗室檢索的項目很多，這要求有一定的樣本量，在可能的情況下盡量多采。第10頁/共112頁采樣前的準備(1)

人員的準備：一般要指派2名以上專業(yè)人員趕赴現(xiàn)場，必要時還需要檢驗人員和其他部門有關人員協(xié)作前往。

交通工具準備：在接到疑似食物中毒報告后，在城區(qū)1小時、郊區(qū)2小時內到達現(xiàn)場。第11頁/共112頁采樣前的準備(2)●調查采樣箱準備：屬常用的物品，應提前準備，定期檢查，及時補充。常備以下物品：

1、采樣工具：注射器、肛拭子、消毒棉簽、消毒紗布、調匙、勺子、夾子、鑷子、剪刀、酒精燈、標號用品、75%酒精、其他消毒滅菌器具、吸管、火柴等。

2、樣品容器：滅菌塑料袋、廣口瓶、滅菌試管、滅菌糞便盒、樣品冷藏設施等。第12頁/共112頁采樣前的準備(3)●現(xiàn)場快速檢驗、測量設備：食物中毒快速檢樣箱，食品溫度測試計、消毒劑濃度檢測試紙等?！裾{查用表：食物中毒事故個案調查登記表、調查筆錄、樣品采集記錄表、樣品送檢單、調查結果匯總表、空白紙等●參考資料：食物中毒診斷標準、有關衛(wèi)生部規(guī)章、參考書籍等?！衿渌嘘P物品：如便攜式電腦、手機或對講機等通訊設施以及用于保存運送培養(yǎng)基的冰箱、冰塊等●取證工具：照相機、攝像機等第13頁/共112頁采樣用容器和試劑要求1.

采樣容器應采用潔凈、無色、無毒的聚乙烯塑料或硬質玻璃（又稱硼硅玻璃）。樣品瓶必須專瓶專用，切不可用實驗室裝過試劑的瓶作采樣瓶。2.用于微生物檢驗容器基本要求是選耐高溫、無毒、耐用材料制成，容器包裝好后可防滲漏，能承受空中或地面運送過程中可能發(fā)生的溫度和壓力變化。所有采樣用具、容器需嚴格滅菌，并且不能存放過長時間，防止污染影響檢驗結果。３、采樣用的生理鹽水、運送培養(yǎng)基及有關試劑等都應該滿足新鮮、無菌的要求，同時應符合采樣所需要的試劑量，如運送糞便的培養(yǎng)基為5ml/管為宜。第14頁/共112頁細菌性食物中毒標本的采集（1）剩余食物：采集殘余食物時應盡量避免采集不相干的標本。殘余食物用滅菌工具采取，置于滅菌容器內。如無剩余食物，可用滅菌棉拭在可疑食物容器內涂擦，置于裝有少量生理鹽水試管內。體積較大的肉及魚等，應將表面燒灼滅菌后割取內部肌肉，置于滅菌容器內?？赡墓揞^可直接送檢，如僅剩余空盒，可將空盒送檢。炊事用具：如鍋、刀、抹布、砧板等，可用棉試大用具上涂擦，置于裝有少量生理鹽水的試管中。如砧板已洗過，可用刀用力刮取表面層木屑，置于滅菌容器中。第15頁/共112頁細菌性食物中毒標本的采集（2）糞便、肛拭：糞便標本應盡量在病程早期和治療前采集，同時應采集新鮮糞便，選取有膿血、粘液部分3-5克、水樣便取含絮狀物的2-5ml，盛于無菌容器中及時送檢。若無法獲得糞便時，可用保存液或增菌液濕潤過的棉拭子插入肛門4-5cm深處（小兒2-3cm），輕輕轉動一圈，擦取直腸表面的黏液后取出，盛入運送培養(yǎng)基或保存液中送檢。注意為保證多個檢驗項目的開展，同一病人應至少采集2支肛拭

第16頁/共112頁細菌性食物中毒標本的采集（3）嘔吐物：直接放入無菌容器中及時送檢咽拭樣品：采集時應將棉簽檫拭咽喉及扁桃體紅腫處（特別是白膜處），然后將棉簽插入4-5ml生理鹽水中，尾部棄去血液：采集患者急性發(fā)病期（3天內）和恢復期（2周左右）各3ml全血分離血清送檢第17頁/共112頁檢驗項目霍亂弧菌135、副溶血弧菌及其它致病性弧菌P131、金黃色葡萄球菌P133、蠟樣芽胞桿菌P134、沙門菌P126、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌P128、空腸彎曲菌P130、小腸結腸耶爾森菌P131、志賀菌P127、溶血性鏈球菌及單核細胞增生李斯特菌P132等引起的細菌性食物中毒樣品檢驗

第18頁/共112頁檢驗宗旨竭盡全力盡快找到病原體快速、準確可與傳統(tǒng)方法不一定完全相同

第19頁/共112頁檢驗程序

樣品采集↓初步檢驗→活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片→染色→鏡檢)↓分離培養(yǎng)(包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng))↓初篩試驗↓純培養(yǎng)↓全面鑒定（生化試驗、血清分型、噬菌體試驗等）↓報告第20頁/共112頁直接涂片染色鏡檢

觀察存在于檢品中特種形態(tài)的細菌如霍亂弧菌、彎曲菌、球菌等，為進一步的檢驗提供有用的信息

第21頁/共112頁檢樣的處理病源檢樣因含較多病原菌而一般無須做預增菌處理，但若病源檢樣為服過抗生素后采集的檢樣應按檢驗項目要求而進行預增菌處理以保護和放大目的病原菌直接插入2ml預增管37℃預增菌4～6h

第22頁/共112頁直接培養(yǎng)將無須做增菌處理的病源檢樣按檢驗項目要求直接接種于各相應培養(yǎng)基第23頁/共112頁增菌培養(yǎng)及接種將預增菌處理后的服過抗生素后采集的病源檢樣按檢驗項目要求接種各相應增菌液培養(yǎng)（保證特定的微生物在其中繁殖）增菌培養(yǎng)后接種于各相應培養(yǎng)基第24頁/共112頁初篩試驗克氏雙糖/三糖鐵/腸道綜合發(fā)酵管1、管2PCR(聚合酶鏈式反應)VIDAS(酶聯(lián)免疫試驗：酶分子與抗體或抗抗體分子共價結合，此種結合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性)第25頁/共112頁可疑菌的鑒定全面生化試驗噬菌體試驗血清分型毒素或毒素基因測試第26頁/共112頁毒素或毒素基因測試霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵襲毒素、ETEC腸毒素按國標方法進行動物試驗或酶聯(lián)免疫試驗（VIDAS等）毒素基因測試：霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、致瀉性大腸埃希菌的所有毒力基因均可用PCR檢測，特別是對致瀉性大腸埃希菌的定論應以毒素或毒素基因為準第27頁/共112頁患者血清的試驗疑似傷寒或副傷寒的患者應取發(fā)病一周的血清做肥達氏反應，用作輔助診斷將患者急性期和恢復期的血清做凝集效價的對比，4倍增長可確診第28頁/共112頁檢驗結果的判定應以找到病原體或其毒素為最終結論，在此之前所有的快速檢驗方法如PCR、VIDAS等得到的結果僅供參考

應注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的統(tǒng)一性

第29頁/共112頁檢驗結果的判定原則（1）多數(shù)患者樣品中檢出的致病意義明確的細菌在種類、生化和/或血清型、毒素型均一致時，可報告為細菌性食物中毒的病原體第30頁/共112頁檢驗結果的判定原則（2）非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但通常致病意義不甚明確的細菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時本次細菌性食物中毒事件中非患者對照標本中未檢出該菌時，應做該菌的毒素、毒素基因或動物試驗，陽性結果可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體第31頁/共112頁檢驗結果的判定原則（3）樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因測試陽性為最終結論報告蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達到105cfu/g(ml)以上者才有報告價值第32頁/共112頁細菌檢驗重要篩檢試驗氧化酶試驗（1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液，再加α-萘酚溶液一滴）接觸酶試驗（過氧化氫酶試驗）第33頁/共112頁氧化酶試驗用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細菌

革蘭陰性桿菌陽性反應弧菌科（呈現(xiàn)粉紅色，再加呈現(xiàn)鮮藍色）

陰性反應腸桿菌科第34頁/共112頁接觸酶試驗用于分辨葡萄球菌及鏈球菌

革蘭陽性球菌

陽性反應葡萄球菌

（產生氣泡）

陰性反應鏈球菌第35頁/共112頁沙門氏菌檢測第36頁/共112頁沙門氏菌食物中毒主要特征來源:生食和烹飪不完全的食物，主要是肉類蛋品。癥狀：惡心嘔吐、胃痛、腹瀉、出冷汗、發(fā)燒（38-40℃）。較重者可出現(xiàn)煩躁不安、昏迷、譫語、抽搐等中樞神經系統(tǒng)癥狀，也可以出現(xiàn)尿少、尿閉，呼吸困難等癥狀。同時還出現(xiàn)面色蒼白、口唇青紫、四肢發(fā)涼、血壓下降等周圍循環(huán)衰竭癥狀，甚至休克，如不及時救治，最后可因循環(huán)衰竭而死亡。潛伏期一般為12～36h，短者6h，長者48～72h。第37頁/共112頁概況1880年發(fā)現(xiàn)，至今已有2600種有動力（除雞-雛沙門菌）大多產H2S

（除副甲傷寒沙門菌等）產酸大多產氣（除傷寒、雞-雛沙門菌）靛基質-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）第38頁/共112頁沙門氏菌檢驗流程血液、骨髓糞便、肛拭子食品25g分離血清血培養(yǎng)瓶肥達試驗接種血平板接種BS和XLD/HE平板，37℃過夜TTB（42℃）和SC（37℃）過夜225mLBP，37℃過夜挑取可疑菌落TSI、尿素、靛基質、氰化鉀、賴氨酸、營養(yǎng)瓊脂甘露醇+、山梨醇+ONPG–商品化生化鑒定系統(tǒng)HS+靛基質–尿素–KCN–賴氨酸+HS+靛基質+尿素–KCN–賴氨酸+HS–靛基質–尿素–KCN–賴氨酸+/–反應結果與左側描述不符非沙門氏菌沙門氏菌、血清學試驗報告第39頁/共112頁沙門氏菌菌落形態(tài)BS瓊脂：培養(yǎng)40～48h，菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，光滑、邊緣整齊、圓形，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形態(tài)成灰綠色菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂：藍綠色或藍色，透明、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂：菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色，帶或不帶黑色中心。第40頁/共112頁沙門氏菌菌落形態(tài)BS第41頁/共112頁沙門氏菌菌落形態(tài)XLD第42頁/共112頁沙門氏菌菌落形態(tài)HE第43頁/共112頁主要生化試驗五項生化試驗H2S靛基質PH7.2尿素酶KCN賴氨酸脫羧酶第44頁/共112頁主要生化試驗TSI培養(yǎng)基上培養(yǎng)情況典型沙門氏菌：表面（-）粉紅色、底層（+）黃色、HS（+）底層有黑色、有動力表面（+）黃色、HS（-）的可排除其它情況均有可能是沙門氏菌第45頁/共112頁主要生化試驗腸道綜合發(fā)酵管1：甘露醇（上斜面）+、葡萄糖（下直面）+產氣腸道綜合發(fā)酵管2：蔗糖-、動力+、H2S+、靛基質-第46頁/共112頁主要生化試驗典型五項生化試驗H2S（+）、靛基質（-）、PH7.2尿素酶（-）、KCN（-）、賴氨酸脫羧酶（+）第47頁/共112頁血清凝集（1）A-F多價+OH1H2第48頁/共112頁血清凝集（2）若生化反應符合，而血清A-F多價-，考慮：Vi抗原（傷寒、副丙傷寒沙門菌）遮蔽，煮沸后再凝亞利桑那菌：遲緩發(fā)酵乳糖，延長Mac平板培養(yǎng)時間至4天可能是A-F以外的沙門菌極可能是血清交叉的檸檬酸桿菌第49頁/共112頁報告方式A群甲型副傷寒沙門菌1,2,12:aB群乙型副傷寒沙門菌1,4,5,12:b:1,2

鼠傷寒沙門氏菌1,4,5,12:i:1,2C群丙型副傷寒沙門菌6,7,vi:c:1,5

豬霍亂沙門菌6,7,:c:1,5D群腸炎沙門菌1,9,12:g,m

傷寒沙門菌1,9,vi:d

雞雛沙門菌1,9,12:-第50頁/共112頁志賀氏菌檢測第51頁/共112頁志賀氏菌食物中毒主要特征來源：被污染的冷盤菜、涼拌菜等。癥狀：腸炎型：腹痛腹瀉為主，水樣便。痢疾型：腹痛、腹部痙攣、惡心、發(fā)熱、里急后重、粘血便。潛伏期：1-3天，平均2天。第52頁/共112頁概況至今已有4群（A、B、C、D）、32種（A-痢疾志賀菌10個血清型；B–福氏志賀菌6個血清型+X、Y變種；C-鮑氏志賀菌15個血清型、D-宋內1個血清型，S，R兩相）無動力乳糖-

（除宋內遲緩發(fā)酵+）不產H2S產酸不產氣（除F6產極少量氣泡）靛基質大多+（宋內-）、蔗糖-甘露醇+（痢疾志賀菌為-）符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）第53頁/共112頁志賀氏菌檢驗流程標本糞便、肛拭子食品25g、水（濾膜法）1:10與GN增菌液混合，36℃，6～8hSS/HE、EMB/MAC，36℃，18～24hSS/HE、EMB/MAC，36℃，18～24h可疑菌落接種TSI、葡萄糖半固體，36℃，18～24hK/A、H2S–、不產氣、無動力非如左述的各種反應結果+血清玻片凝集（四種多價）–+B群血清凝集–+D群凝集–A1、A2+生化分群試驗（5％乳糖、甘露醇、棉子糖、甘油、吲哚）+C群血清凝集–A3～A12+制菌懸液100℃水浴30min重做玻片凝集+–非志賀氏菌報告分群及分型結果鏡檢進一步試驗（葡萄糖銨、西蒙氏檸檬酸鹽、賴氨酸、尿素、氰化鉀、水楊苷和七葉苷）有任何陽性結果第54頁/共112頁志賀氏菌菌落形態(tài)SS瓊脂：菌落呈無色透明或半透明、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形中等大小菌落；宋內志賀菌能延緩發(fā)酵乳糖，培養(yǎng)24h后可以出現(xiàn)紅色菌落，宋內志賀菌常形成扁平、粗糙的菌落。MAC瓊脂：菌落呈灰白色透明或半透明菌落、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形菌落。HE瓊脂：菌落呈淡藍綠色或無色半透明、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形菌落。EMB瓊脂：菌落呈灰白色半透明、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形菌落。第55頁/共112頁志賀氏菌菌落形態(tài)第56頁/共112頁志賀氏菌菌落形態(tài)第57頁/共112頁志賀氏菌菌落形態(tài)第58頁/共112頁志賀氏菌菌落形態(tài)第59頁/共112頁初步生化鑒定從平板上挑取3～4個可疑菌落，接種TSI和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，36℃培養(yǎng)18～24h。第60頁/共112頁初步生化鑒定TSI生長結果（現(xiàn)象）：斜面產堿仍為粉紅色或紅色；底層產酸不產氣，變黃色；不產硫化氫，不產黑色。半固體培養(yǎng)基：沿線生長，無動力。第61頁/共112頁初步生化鑒定可棄去地培養(yǎng)物：在TSI表面呈蔓延生長的。18～24h內發(fā)酵乳糖、庶糖的。不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長的。產氣的。有動力的。產硫化氫的。第62頁/共112頁血清凝集先用四種志賀氏菌多價血清檢查，如果由于K抗原的存而不凝集，應將菌液煮沸后再檢查。如果凝集，再用A1、A2、B多價和D群血清分別試驗。如是B群福氏志賀菌凝集，則用群和型因子血清分別檢查。四種多價血清不凝集者，可用鮑氏多價1、2、3分別檢查，并進一步有1～15各型因子血清檢查；如鮑氏多價不凝集，可用痢疾志賀菌3～12多價血清及各型因子血清檢查。第63頁/共112頁血清凝集若生化反應符合，而血清四種多價-，考慮：A、C群志賀菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝可能是EIEC，再做大生化以鑒別宋內的R相菌，用R相血清凝集可能是蜂窩哈夫尼亞菌，做大生化以鑒別可能是類志賀鄰單胞菌，觀察動力、氧化酶第64頁/共112頁報告方式痢疾志賀菌1型福氏志賀菌2a型福氏志賀菌X變種鮑氏志賀菌13型宋內志賀菌S相第65頁/共112頁金黃色葡萄球菌第66頁/共112頁金葡菌食物中毒主要特征來源：主要存在于人們的皮膚、鼻、喉、耳等部位。進食了被污染的肉類、乳品、定粉制品。癥狀：惡心、嘔吐（頻繁而劇烈），腹痛、腹瀉，由于劇烈嘔吐和腹瀉，可引起大量失水而發(fā)生外周循環(huán)衰竭和虛脫。潛伏期：一般30min～6h，最短為15min左右，很少有超過8h的。第67頁/共112頁概況典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生長pH7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1～2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10～15%NaCl肉湯中生長?？煞纸馄咸烟恰Ⅺ溠刻?、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制其生長。第68頁/共112頁金黃色葡萄球菌

檢驗流程食物25g+生理鹽水225mL，取5mL50mL7.5％NaCl肉湯血平板、B-P平板36℃24h染色鏡檢血漿凝固酶實驗觀察菌落形態(tài)報告嘔吐物、糞便肛拭了、涂抹拭子3個連續(xù)稀釋度接種B-P平板36℃48h10mL7.5％NaCl肉湯BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂斜面第69頁/共112頁金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)B-P瓊脂：菌落圓形、凸起、濕潤，直徑2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈，接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。血平板：形成較菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。第70頁/共112頁金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)第71頁/共112頁血漿凝固酶實驗可疑菌落1個（計數(shù)時取5個菌落分別接種）→5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂斜面，36℃培養(yǎng)24h→0.2～0.3mLBHI培養(yǎng)物+0.5mL兔血漿→36℃水浴箱或培養(yǎng)箱→每半小時觀察一次,觀察6小時→凝固為陽性,反之為陰性（同時以血漿凝固酶陽性和陰性葡萄球菌株的肉湯培養(yǎng)物作對照）。第72頁/共112頁副溶血性弧菌第73頁/共112頁副溶血性弧菌食物中毒主要特征來源：是進食含有該菌的食物所致，主要來自海產品，如墨魚、海魚、海蝦、海蟹、海蜇，以及含鹽分較高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。癥狀：主要的癥狀為腹痛，優(yōu)勢腹痛在臍部附近劇烈。腹痛是本病的特點，多為陣發(fā)性絞痛，并有腹瀉、惡心、嘔吐、畏寒發(fā)熱，大便似水樣。便中混有黏液或膿血。潛伏期：3～24h，一般10小時左右。第74頁/共112頁概況副溶血弧菌系弧菌科弧菌屬，革蘭染色陰性，兼性厭氧菌，為多形態(tài)桿菌或稍彎曲弧菌。本菌嗜鹽畏酸。最適宜的培養(yǎng)基：溫度為30℃—37℃，含鹽2.5%—3%(若鹽濃度低于0.5%則不生長），pH值為8.0—8.5。本菌對酸較敏感，當pH6以下即不能生長，在普通食醋中l(wèi)一3min即死亡。在固體培養(yǎng)基上菌落常隆起，圓形，表面光滑，濕潤。在3％一3．5％含鹽水中繁殖迅速，每8～9min為一周期。對高溫抵抗力小，50℃20min；65℃5min或80℃1min即可被殺死。本菌對常用消毒劑抵抗力很弱，可被低濃度的酚和煤酚皂溶液殺滅。第75頁/共112頁副溶血性弧菌

檢驗流程糞便、嘔吐物、拭子食物25g+3％NaCl堿性胨水225mL，37℃，8～16hTCBS平板，37℃，18～24h3％TSA純化，37℃，18～24h初步鑒定；3％TSI、革蘭染色、氧化酶實驗、嗜鹽性實驗生化試驗（接種含3％氯化鈉生化試劑）報告3％NaCl堿性胨水10mL，37℃，8～16h第76頁/共112頁副溶血性弧菌菌落形態(tài)TCBS瓊脂：呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質感，直徑2～3mm。涂片鏡檢：革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。第77頁/共112頁副溶血性弧菌菌落特征第78頁/共112頁副溶血性弧菌菌落特征霍亂、副弧、隨培養(yǎng)時間的延長霍亂的黃色菌落逐漸變藍

第79頁/共112頁鑒定生化性狀：葡萄糖+、分解葡萄糖產氣-、甘露醇+、H2S-、氧化酶+、動力+、蔗糖-、乳糖-、賴氨酸脫羧酶+、V-P-、ONPG-。嗜鹽試驗：10％氯化鈉胰胨水不生長或微弱生長，7％氯化鈉胰胨水生長旺盛。第80頁/共112頁變形桿菌第81頁/共112頁變形桿菌食物中毒主要特征來源：生、熟食品的工具、容器未嚴格分開使用，使制成的熟食品受到重復污染。受污染的熟食品在較高的溫度下存放較長的時間，細菌大量繁殖；食用前不再回鍋加熱或加熱不徹底，食后引起中毒癥狀：主要表現(xiàn)為腹痛（多呈臍周圍部的劇烈絞痛或刀割樣疼痛）、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)冷發(fā)熱（38～39℃）、頭暈、頭痛。潛伏期：一般為5～18h，短者1～3h，長者60h。第82頁/共112頁概況變形桿菌屬(Proteus)包括:普通變形桿菌(P．vulgaris)奇異變形桿菌(P.mirabilis)產粘變形桿菌（P.myxofaciens）。

變形桿菌為革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍圓，有明顯的多形性。無芽孢無莢膜，有周身鞭毛，運動活潑。為需氧或兼性厭氧，對營養(yǎng)要求不高，生長溫度為10～43℃。不耐熱，60℃5～30min皆可殺死。變形桿菌可產生腸毒素，此腸毒素為蛋白質和碳水化合物的復合物，具抗原性。第83頁/共112頁變形桿菌檢驗流程食品加適量生理鹽水制成混懸液計數(shù)選擇性SS、EMB培養(yǎng)基，37℃，18～24hTSI，37℃，24h生化試驗血清學實驗報告GN，37℃，24h糞便、嘔吐物、拭子、涂抹液第84頁/共112頁變形桿菌菌落形態(tài)SS瓊脂：形成單個菌落，菌落圓形、扁薄透明或半透明，有的菌落邊緣呈擴散狀，對光觀察，菌落周圍淡藍色中心稍厚，有黏性，打開平皿時有臭味。EMB瓊脂：無色透明菌落，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在伊紅美藍平板上可呈現(xiàn)片狀蔓延生長。第85頁/共112頁變形桿菌菌落特征普平第86頁/共112頁變形桿菌菌落特征SS第87頁/共112頁變形桿菌菌落特征EMB第88頁/共112頁鑒定生化實驗：乳糖反應陰性（TSI斜面紅色）、葡萄糖產酸（TSI底層黃色）產氣或只產酸不產氣，硫化氫陽性或陰性、尿素陽性、苯丙氨酸陽性者進行系統(tǒng)生化鑒定，判定種屬或群。血清學實驗：變形桿菌食物中毒需對來自可疑食物與患者的菌株進行血清型別鑒定，以判定其同源性，，方法：將待試菌株分別點種在普通營養(yǎng)瓊脂平板的兩端，待兩側的菌株蔓延生長到平板中間，菌苔完全融合，說明兩株細菌沒有拮抗現(xiàn)象。第89頁/共112頁蠟樣芽孢桿菌第90頁/共112頁蠟樣芽孢桿菌食物中毒主要特征來源：米食、乳制品、畜禽肉類制品、等。剩飯，特別是大米飯，其次小米飯、高粱米飯等剩飯。除米飯有時微有發(fā)粘、入口不爽或稍帶異味外，大多數(shù)食品的感官性狀正常。

癥狀：嘔吐型：主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛，腹瀉。此外，頭昏、四肢無力、口干、寒戰(zhàn)、結膜充血等癥亦有發(fā)生。該型主要是由剩米飯或炒飯引起的。該菌易在米飯中繁殖并產生耐熱性腸毒素。與葡萄球菌食物中毒在潛伏期、中毒表現(xiàn)方面非常相似，易混淆。腹瀉型：主要表現(xiàn)有腹瀉、腹痛。水樣便，一般無發(fā)熱，可有輕度惡心，但嘔吐罕見。病程稍長，16～136h。主要是蠟樣芽孢桿菌在食品中產生不耐熱腸毒素所致,與產氣莢膜梭菌食物中毒相似，應注意鑒別潛伏期：嘔吐型：潛伏期一般1～3h，短者0.5h，長者5h；腹瀉型：潛伏期長,一般10～12h,短者6h,長者16h。第91頁/共112頁概況革蘭氏陽性、能形成芽孢、需氧或兼性厭氧大桿菌。芽孢不大于菌體寬度，位于中央或稍偏一端，無莢膜，有周身鞭毛。生長溫度范圍是10～50℃，最適生長溫度為28～35℃，10℃以下不能繁殖。繁殖體較耐熱，加熱100℃經20min被殺死；芽孢能耐受100℃30min，干熱170℃經60min才能殺死。生長的pH值范圍為4.9～9.3。第92頁/共112頁蠟樣芽孢桿菌檢驗流程食物25g+225mL生理鹽水制成10-1～10-5的稀釋液選擇性培養(yǎng)基MYP36℃，12～20h（菌數(shù)測定）選擇性培養(yǎng)基MYP，36℃，12～20h（分離培養(yǎng)）菌數(shù)計算營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（證實試驗）染色鏡檢生化試驗生長及菌落觀察報告糞便、嘔吐物、拭子用少量生理鹽水做成混懸液第93頁/共112頁蠟樣芽孢桿菌菌落形態(tài)MYP瓊脂：典型菌落為灰白色至微粉紅色（不發(fā)酵甘露醇），周圍有白色至淡粉紅色沉淀環(huán)（產生卵磷脂酶）。營養(yǎng)瓊脂：典型菌落在為灰白色，偶有黃綠色，不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴展狀，直徑為4mm～10mm。革蘭染色菌體形態(tài)：革蘭氏陽性大桿菌，寬1μm或以上，芽胞呈圓形，不突出菌體，多位于中央或稍偏于一端。第94頁/共112頁蠟樣芽孢桿菌菌落形態(tài)特征蠟樣芽孢桿菌在甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂（MYP）上第95頁/共112頁蠟樣芽胞桿菌菌落形態(tài)特征蠟樣芽胞桿菌在營養(yǎng)瓊脂平板上第96頁/共112頁蠟樣芽孢桿菌菌落形態(tài)特征

ＴＳＳＢ瓊脂平板上蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色，不透明，似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)或完全溶血環(huán)。蘇云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現(xiàn)弱的溶血現(xiàn)象，而多數(shù)炭疽芽胞桿菌為不溶血，巨大芽胞桿菌為不溶血。第97頁/共112頁蠟樣芽孢桿菌Ｇ染色形態(tài)第98頁/共112頁鑒定形態(tài)觀察：革蘭氏陽性大桿菌，寬度為1μm或1μm以上,芽胞呈卵圓形，不突出菌體，多位于菌體中央或稍偏于一端。培養(yǎng)特性：肉湯中生長混濁，常微有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化；在普通瓊脂平板上生成的菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣不齊。生化性狀：有動力；能產生卵磷脂酶和酪蛋白酶；過氧化氫酶試驗陽性；溶血；不發(fā)酵甘露醇和木糖；常能液化明膠和使硝酸鹽還原；在厭氧條件下能發(fā)酵葡萄糖。生化分型：分１５個型別。與類似菌鑒別：本菌在生化狀態(tài)上與蘇云金芽胞桿菌極為相似。第99頁/共112頁蛋白質毒素結晶試驗取經30℃±1℃培養(yǎng)24h±2h并于室溫放置3d～4d的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經自然干燥，微火固定后，加甲醇作用30s后傾去，再通過火焰干燥，于載玻片上滴滿0.5％堿性復紅，放火焰上加熱（微見蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù)1min～2min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色30s，傾去染液用潔凈自來水徹底清洗、晾干后鏡檢。第100頁/共112頁蛋白質毒素結晶試驗觀察有無游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結晶體。如發(fā)現(xiàn)游離芽胞形成的不豐富，應將培養(yǎng)物置室溫2d～3d再行檢查。放置3d～4d以上的蘇云金芽胞桿菌培養(yǎng)物有大量的結晶體，但是只有在芽胞裂解通過上述染色方法才能見到。然而，除非見到芽胞，否則培養(yǎng)物應在室溫繼續(xù)放置幾天以重新檢查毒素晶體。其它芽胞桿菌不產生蛋白質毒素晶體。第101頁/共112頁第102頁/共112頁有關應急演練第103頁/共112頁目的通過演練，加強急性傳染病防控工作，規(guī)范各項防控措施，鍛煉應急隊伍，增強應急意識,提高應急處置能力。第104頁/共112頁內容應急響應和組織協(xié)調：人員組成，響應時間等；物資準備：法律文書、消毒藥品、消殺器械、檢測試劑、實驗儀器、宣教資料、預防用藥、個人防護等攜帶情況；