基因工程框架復(fù)習(xí)

基因工程框架復(fù)習(xí)基因工程框架復(fù)習(xí)第1頁考情分析命題重點(diǎn)：基因工程工具與操作程序

基因工程原理和應(yīng)用考查頻度：高考高頻考點(diǎn),5年19考

如年全國1卷和3卷考查方向：多以最新基因工程結(jié)果為載體，結(jié)合其它工程技術(shù)進(jìn)行綜合考查基因工程框架復(fù)習(xí)第2頁基因工程復(fù)習(xí)目標(biāo)一、基因工程操作工具和詳細(xì)步驟（熟悉掌握）二、明確解題思緒基因工程框架復(fù)習(xí)第3頁基因工程操作工具基因工程框架復(fù)習(xí)第4頁以下關(guān)于限制性核酸內(nèi)切酶敘述，錯(cuò)誤是(

)A限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取B同一個(gè)限制酶切割不一樣DNA分子產(chǎn)生末端能夠進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對C限制酶能任意切割DNA分子，從而產(chǎn)生大量DNA片段D每一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶只能識別特定核苷酸序列基因工程框架復(fù)習(xí)第5頁限制性核酸內(nèi)切酶1.起源：原核細(xì)胞2.簡稱限制酶（沒有其它簡稱）3.是酶就含有酶特征（受溫度、PH影響）4.能識別雙鏈DNA分子某種特定核苷酸序列（不能識別RNA序列）5.作用部位：磷酸二酯鍵6.DNA切割結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端7.相同限制酶切出末端一定相同，不同限制酶切出末端也可能相同基因工程框架復(fù)習(xí)第6頁已知限制酶I識別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—

限制酶Ⅱ識別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—。

請問這兩種酶切出黏性末端能否相連？基因工程框架復(fù)習(xí)第7頁DNA連接酶作用部位：磷酸二酯鍵E.coliDNA連接酶只能連黏性末端T4DNA連接酶既能連黏性末端也能連平末端比較：限制酶ECOR1切出是黏性末端Sma1切出是平末端基因工程框架復(fù)習(xí)第8頁運(yùn)載體作為運(yùn)載體必備條件1.在受體細(xì)胞中能復(fù)制并穩(wěn)定保留（讓目標(biāo)基因能一起復(fù)制2.有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)(供外源基因插入)3.含有標(biāo)識基因(判別受體細(xì)胞中是否含有目標(biāo)基因)---最常見載體質(zhì)粒（大腸桿菌Ti質(zhì)粒含T-DNA）λ噬菌體衍生物動植物病毒基因工程框架復(fù)習(xí)第9頁基因工程基礎(chǔ)操作程序1、目標(biāo)基因獲取2、基因表示載體構(gòu)建3、將目標(biāo)基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目標(biāo)基因檢測與判定基因工程框架復(fù)習(xí)第10頁步驟一獲取目標(biāo)基因1、人工合成2、從基因文庫中獲取3、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增(基因比較小，序列已知)基因文庫基因組文庫個(gè)別基因文庫－－如：cDNA文庫原理:雙鏈DNA分子復(fù)制條件：模板、引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶四種脫氧核苷酸能量基因工程框架復(fù)習(xí)第11頁組成個(gè)別復(fù)制原點(diǎn)（復(fù)制起點(diǎn)）開啟子（RNA聚合酶識別和結(jié)合部位）目標(biāo)基因（位于開啟子和終止子之間）終止子（終止轉(zhuǎn)錄）標(biāo)識基因（如抗生素抗性基因或熒光基因。構(gòu)建時(shí)最少有一個(gè)）第二步：基因表示載體構(gòu)建(關(guān)鍵)基因工程框架復(fù)習(xí)第12頁第三步：將目標(biāo)基因?qū)胧荏w細(xì)胞

將目標(biāo)基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法，花粉管通道法將目標(biāo)基因?qū)雱游锛?xì)胞顯微注射法將目標(biāo)基因?qū)胛⑸锛?xì)胞感受態(tài)細(xì)胞法（Ca2+處理）------轉(zhuǎn)化過程基因工程框架復(fù)習(xí)第13頁步驟四目標(biāo)基因檢測和判定接種試驗(yàn)抗原－抗體雜交法分子雜交法DNA分子雜交法受體是否含有轉(zhuǎn)基因特征個(gè)體水平目標(biāo)基因是否翻譯目標(biāo)基因是否轉(zhuǎn)錄目標(biāo)基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞分子水平方法檢測對象基因工程框架復(fù)習(xí)第14頁當(dāng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)和其它技術(shù)綜合考查時(shí)解題思緒：一.明確目標(biāo)，要取得什么？是基因產(chǎn)品、轉(zhuǎn)基因植物還是轉(zhuǎn)基因動物找到目標(biāo)基因和受體細(xì)胞二.細(xì)化過程基因工程框架復(fù)習(xí)第15頁1.取得基因產(chǎn)品：取得含目標(biāo)基因微生物細(xì)胞(普通)---培養(yǎng)微生物---取得產(chǎn)品2.取得轉(zhuǎn)基因植物：將目標(biāo)基因?qū)胫参锛?xì)胞---進(jìn)行植物組織培養(yǎng)---取得轉(zhuǎn)基因植物3.取得轉(zhuǎn)基因動物：將目標(biāo)基因?qū)雱游锸芫眩ɑ蚪?jīng)過核移植取得）---早期胚胎培養(yǎng)---胚胎移植---獲取轉(zhuǎn)基因動物基因工程框架復(fù)習(xí)第16頁重度呼吸綜合征是有一種新型冠狀病毒（MERS-CoV）引發(fā)病毒性呼吸道疾病，科學(xué)家利用大腸桿菌大量生產(chǎn)病毒蛋白，以探究其作為MERS疫苗可能性，結(jié)合所學(xué)知識回答以下相關(guān)問題：（1）研究早期，科學(xué)家首先分離出病毒RNA分子，在___________酶作用下，以_____________為原料，取得DNA分子。（2）在構(gòu)建表示載體過程所使用限制酶普通來自_______生物體內(nèi)，構(gòu)建好表示載體包含________、_________、開啟子和終止子。其中開啟子是________酶結(jié)合位點(diǎn)（3）基因工程取得細(xì)胞產(chǎn)品時(shí)候經(jīng)常采取大腸桿