生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座

生藥學(xué)總論

桂林醫(yī)學(xué)院天然藥品教研室生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第1頁(yè)生藥學(xué)主要任務(wù)及意義真實(shí)性有效性安全性生藥學(xué)基本理論與基本方法內(nèi)容生藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法

生藥學(xué)總論

內(nèi)容生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第2頁(yè)教學(xué)內(nèi)容一、總論學(xué)習(xí)內(nèi)容

*經(jīng)典理化判定方法二、中成藥判定

*DNA分子判定

*養(yǎng)陰清肺丸判定

*生藥學(xué)

生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第3頁(yè)生藥質(zhì)量控制方法原植物形態(tài)特征性狀特征*DNA分子特征顯微特征定性分析定量分析有害物質(zhì)限量（重金屬、農(nóng)殘、毒性成份）真?zhèn)蝺?yōu)劣生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第4頁(yè)一、理化判定

---定性分析理化判定(physicalandchemicalidentification)：利用一些物理、化學(xué)或儀器分析方法，對(duì)生藥中所含有效成份或主要成份或特征性成份進(jìn)行定性分析，以判定其真?zhèn)我粋€(gè)方法。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第5頁(yè)理化判定中藥理化判定發(fā)展很快，新分析伎倆和方法不停出現(xiàn)?？纱_定中藥真?zhèn)蝺?yōu)劣；開(kāi)發(fā)利用新資源；指導(dǎo)中藥材栽培加工，擴(kuò)大藥用部分；制訂中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。發(fā)展方向：從宏觀和微觀形態(tài)學(xué)判定向有效成份和藥效判定方向發(fā)展。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第6頁(yè)慣用理化判定方法化學(xué)定性反應(yīng)

微量升華熒光分析色譜法紙色譜與薄層色譜(PC&TLC)氣相色譜（GC)高效液相色譜(HPLC)電泳法光譜法生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第7頁(yè)定義方法直接將生藥切片或粉末置載玻片上，滴加試液，加蓋玻片在顯微鏡下觀察產(chǎn)生結(jié)晶、沉淀或顏色。生藥提取物置載玻片上，滴加試液，加蓋玻片在顯微鏡下觀察反應(yīng)。顯微化學(xué)定位一、化學(xué)定性反應(yīng)1.顯微化學(xué)反應(yīng)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第8頁(yè)2.沉淀反應(yīng)：利用生藥一些化學(xué)成份能與一些試劑產(chǎn)生特殊沉淀反應(yīng)來(lái)判別。3.泡沫反應(yīng)和溶血指數(shù)測(cè)定生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第9頁(yè)二、微量升華利用中藥中所含一些化學(xué)成份，在一定溫度下能升華性質(zhì)，取得升華物，在顯微鏡下觀察其結(jié)晶形狀、顏色及化學(xué)反應(yīng)作為判別特征。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第10頁(yè)一、微量升華原理及方法二、在判定中應(yīng)用生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第11頁(yè)三、熒光分析利用生藥中所含一些化學(xué)成份，在紫外光或自然光下能產(chǎn)生一定顏色熒光性質(zhì)進(jìn)行判別。比如黃連飲片顯黃色熒光；浙貝母粉末顯亮淡綠色熒光；大黃粉末顯深棕色熒光。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第12頁(yè)熒光效率主要與物質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)，含有π-π共軛結(jié)構(gòu)物質(zhì)才能產(chǎn)生較強(qiáng)熒光，共軛結(jié)構(gòu)加長(zhǎng)，熒光增強(qiáng)。含有黃酮、恩醌、香豆素、木脂素成份生藥，普通含有較強(qiáng)熒光反應(yīng)。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第13頁(yè)熒光分析法在生藥判定中應(yīng)用定性分析紫外分析儀法1、觀察生藥整體2、觀察生藥新鮮斷面或飲片3、觀察生藥粉末4、直接觀察生藥某種溶劑浸出液5、將生藥提取液滴于濾紙上，揮干溶劑觀察6、生藥提取液與化學(xué)試劑作用后產(chǎn)生熒光7、多重觀察

日光法熒光顯微鏡法熒光光譜法定量分析：熒光分光光度法、薄層熒光掃描法生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第14頁(yè)四、色譜法慣用以下三種色譜法：薄層色譜法(TLC)氣相色譜法(GC)高效液相色譜法(HPLC)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第15頁(yè)薄層色譜操作：選擇吸附劑制備薄層板點(diǎn)樣定性參數(shù)選測(cè)定顯色展開(kāi)（比移值Rf、相對(duì)比移值Rst）應(yīng)用：定性分析定量分析生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第16頁(yè)

以Rf做定性依據(jù)，因影響Rf原因多，需用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品作對(duì)照。在兩種或兩種以上展開(kāi)系統(tǒng)種展開(kāi)，若樣品中斑點(diǎn)Rf值與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品Rf值勻相同可基本必定二者為同一化合物。定性判別用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照別標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品對(duì)照藥材用相對(duì)比移值判別用文字描述判別

原點(diǎn)中心至斑點(diǎn)中心距離Rst=原點(diǎn)中心至參考物質(zhì)斑點(diǎn)中心距離生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第17頁(yè)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第18頁(yè)定量判別分兩類(lèi)：一是將待測(cè)物從薄層板洗拖后，選擇適宜方法測(cè)定（洗脫法）；二是薄層展開(kāi)后，用薄層掃描儀在薄層板上測(cè)定被分離組分含量（薄層掃描法）。洗脫法分四步進(jìn)行：待測(cè)組分分離斑點(diǎn)定位斑點(diǎn)搜集及洗脫測(cè)定（多采取UV及可見(jiàn)光分光度法）生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第19頁(yè)薄層掃描法：波長(zhǎng)選擇（樣品波長(zhǎng)、參比波長(zhǎng)）測(cè)定方式確實(shí)立（透射、反射、熒光）掃描方式（直線(xiàn)式、鋸齒式）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性化（與散射參數(shù)相關(guān)，硅膠薄層板SX=3，氧化鋁薄層板SX=7）定量前需考查主要內(nèi)容：工作曲線(xiàn)、精密度、準(zhǔn)確度測(cè)定方法：外標(biāo)一點(diǎn)法，外標(biāo)二點(diǎn)法。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第20頁(yè)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第21頁(yè)HPLC

可用于定性和定量，色譜圖中各色譜峰保留時(shí)間、色譜峰相對(duì)百分峰面積及主要色譜峰UV吸收光譜，均可作為生藥真實(shí)性判定指紋資料。是生藥及制劑質(zhì)量分析慣用方法。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第22頁(yè)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第23頁(yè)GC主要用于含揮發(fā)性成份定性和定量。用于判定數(shù)據(jù)主要是保留時(shí)間、相對(duì)百分峰面積。經(jīng)常和質(zhì)譜聯(lián)用，快速判定成份生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第24頁(yè)五、電泳法帶電質(zhì)點(diǎn)（分子、離子或膠體顆粒）在電場(chǎng)作用下，向著與其所帶電荷相反電極移動(dòng)，稱(chēng)為電泳。應(yīng)用：生物學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域。生藥中主要用于氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第25頁(yè)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第26頁(yè)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第27頁(yè)分光光度法

紫外分光光度法可見(jiàn)分光光度法紅外分光光譜法原子吸收分光光度法六、光譜法生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第28頁(yè)

一切物質(zhì)都會(huì)對(duì)可見(jiàn)光及不可見(jiàn)光中一些波長(zhǎng)光線(xiàn)產(chǎn)生吸收。不過(guò)其吸收程度是不一樣。即物質(zhì)對(duì)不一樣波長(zhǎng)光線(xiàn)表現(xiàn)出不一樣吸收能力，物質(zhì)這一特征稱(chēng)為選擇吸收。

物質(zhì)對(duì)光線(xiàn)選擇吸收反應(yīng)了它們分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)差異。也就是說(shuō)，經(jīng)過(guò)研究物質(zhì)得分子吸收光譜，就能夠判別物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)。這是分光光度法對(duì)生藥進(jìn)行定性判別依據(jù)。物質(zhì)吸收光子能量強(qiáng)度，不但取決于物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)，而且還與被光子所作用物質(zhì)分子數(shù)目，即物質(zhì)濃度相關(guān)。這是分光光度法對(duì)生藥進(jìn)行定量判別依據(jù)。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第29頁(yè)分光光度法在生藥定性分析中應(yīng)用原理：同種生藥光譜含有一定穩(wěn)定性及重現(xiàn)性不一樣種類(lèi)生藥光譜各不相同方法：UV分光光度法比較光譜一致性（與對(duì)照藥材比較；與文件標(biāo)準(zhǔn)光譜查對(duì)）比較導(dǎo)數(shù)光譜一致性（用于UV光譜不易區(qū)分）比較光譜特征吸收（慣用特征數(shù)據(jù)：最大吸收波長(zhǎng)和吸光度比值）

電子光譜，輻射波長(zhǎng)200-400nm，儀器為UV分光光度計(jì)選擇性不如IR。主要用于定量及物理常數(shù)測(cè)定生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第30頁(yè)

生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第31頁(yè)IR分光光度法振轉(zhuǎn)光譜，輻射波長(zhǎng)2.5-15μm。具特征峰多、專(zhuān)屬性強(qiáng)（尤其是在7-15μm一段稱(chēng)指紋圖譜，峰多且尖銳）、用試樣量少快速簡(jiǎn)便。用于生藥真?zhèn)闻袆e及結(jié)構(gòu)判定。方法：1、樣品處理：直接粉末法、溶劑提取法2、制片：壓片法、涂片法3、光譜分析：不需要確定光譜中各主要吸收峰歸屬，只在4000-400cm范圍內(nèi)比較光譜差異。A、在某一波數(shù)處，一方有顯著吸收峰，另一方無(wú)。B、在某一波數(shù)內(nèi)，兩吸收峰形狀強(qiáng)度有顯著不一樣。C、被判別雙方在指紋區(qū)特征不一樣。上述三種，只要有其中一個(gè)就可做出判別結(jié)論。-1應(yīng)用舉例生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第32頁(yè)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第33頁(yè)物理常數(shù)

包含相對(duì)密度、旋光度、折光率、凝點(diǎn)、熔點(diǎn)等。對(duì)于油脂類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)及樹(shù)脂類(lèi)藥材真實(shí)性和純度判別含有尤其重要意義。相對(duì)密度熔點(diǎn)區(qū)分或檢查生藥純雜程度區(qū)分或檢查生藥純雜程度測(cè)定含量折光率區(qū)分不一樣油類(lèi)或檢驗(yàn)生藥純雜程度旋光度、凝點(diǎn)生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第34頁(yè)其它真?zhèn)闻袆e方法：DNA分子判定

20世紀(jì)90年代中后期開(kāi)始；處理形態(tài)判定一些局限；生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第35頁(yè)

同屬多起源藥材判別

道地藥材判別等特點(diǎn)：穩(wěn)定性、多樣性、化學(xué)穩(wěn)定性方法：RFLP、PCR、RAPD等應(yīng)用：植物分類(lèi)、中藥材判別、道地生藥判定生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第36頁(yè)P(yáng)CR(Polymerasechainreaction)PCRfragmentsInterestedDNAsequencesPrimerPrimerIdentificationofTCMbyDNAMolecularMarkerExtracts

GenomicDNADNAsequencing尋找特征性基因PCR-RFLPDNAChipDiagnosticPCR生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第37頁(yè)DNA分子遺傳標(biāo)識(shí)在生藥判定中應(yīng)用1．在植物進(jìn)化、分類(lèi)、判定中應(yīng)用應(yīng)用分子遺傳標(biāo)識(shí)技術(shù)來(lái)研究種間、屬間DNA變異情況，從而揭示物種親緣關(guān)系，為物種判定及系統(tǒng)學(xué)研究提供依據(jù)。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第38頁(yè)采取RAPD分子標(biāo)識(shí)方法比較4種甘草屬植物光果甘草、烏拉爾甘草、刺甘草和刺果甘草遺傳關(guān)系。經(jīng)過(guò)DNA擴(kuò)增RAPD指紋圖譜分析，結(jié)果發(fā)覺(jué)富含甘草甜素光果甘草和烏拉爾甘草之間遺傳關(guān)系非常相近。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第39頁(yè)這二者與不含甘草甜素或含量極低刺甘草和刺果甘草遺傳關(guān)系則較遠(yuǎn)，與植物分類(lèi)學(xué)研究相吻合。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第40頁(yè)2．在中藥材判別中應(yīng)用通常PCR擴(kuò)增模板DNA都來(lái)自新鮮動(dòng)植物組織材料，因DNA分子遺傳標(biāo)識(shí)方法用于生藥判別中，首先要處理問(wèn)題是能否從干或陳舊生藥樣品中提得生藥本身DNA，并能用于PCR擴(kuò)增，這方面已經(jīng)有成功報(bào)道。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第41頁(yè)用RAPD方法對(duì)人參、三七及4種人參偽品DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，所得DNA指紋圖譜可用于區(qū)分人參屬3種生藥及偽品。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第42頁(yè)3．在道地生藥判定中應(yīng)用一個(gè)物種種內(nèi)多樣性是道地藥材品質(zhì)形成生物學(xué)基礎(chǔ)。道地生藥與非道地生藥本質(zhì)區(qū)分是作用物質(zhì)基礎(chǔ)有效成份差異，其形成主要受遺傳因子和環(huán)境因子影響。應(yīng)用DNA遺傳標(biāo)識(shí)技術(shù)，比較道地生藥與非道地生藥基因差異，將有利于說(shuō)明道地生藥成因。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第43頁(yè)二、中成藥判定1．中成藥名稱(chēng)：養(yǎng)陰清肺丸[處方]：地黃100g麥冬60g白芍40g玄參80g牡丹皮40g川貝母40g薄荷25g甘草20g[制法]：以上8味藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻。每1000g藥粉加煉蜜875g，制成大蜜丸，即得。[性狀]：本品為黑棕色至黑褐色大蜜丸，味微甜，略苦。[功效]：養(yǎng)陰清肺，清熱利咽。用于咽喉干燥疼痛，干咳少痰，痰中帶血。[使用方法及用量]：口服，1次1丸，每日2次。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第44頁(yè)2．歸類(lèi)（1）按藥用部位歸類(lèi):根及根莖類(lèi)：地黃、麥冬、白芍、玄參、川貝母、甘草；皮類(lèi)：牡丹皮；全草類(lèi)：薄荷。（2）按原植物科屬歸類(lèi)(不慣用)雙子葉植物：玄參科：地黃、玄參；毛茛科：白芍、牡丹皮；唇形科：薄荷；豆科：甘草。單子葉植物：百合科：川貝母、麥冬。生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第45頁(yè)4．特征比較與判別點(diǎn)選定-------顯微分析3．羅列特征：------每種藥材粉末特征一一列出⑴含有獨(dú)特判別特征有：⑵兩種或兩種以上藥材含有特征分析比較⑶特征選定標(biāo)準(zhǔn)(4)特征選定生藥學(xué)總論專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第46頁(yè)選定特征地黃:分泌細(xì)胞、薄壁細(xì)胞。玄參：后生皮層細(xì)胞與石細(xì)胞、薄壁細(xì)胞。麥冬：草酸鈣針晶、石細(xì)胞。川貝母：氣孔副衛(wèi)細(xì)胞4-6個(gè)、單粒淀粉。薄荷：腺鱗、小腺毛、非腺毛、葉氣孔直軸式