免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離

免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第1頁第二講

免疫器官觀察與

免疫細(xì)胞分離免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第2頁試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握小白鼠捉拿與處死方法掌握免疫細(xì)胞分離方法及其效果判斷熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板結(jié)構(gòu)及使用方法免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第3頁免疫器官觀察免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第4頁免疫細(xì)胞種類免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第5頁免疫細(xì)胞分離技術(shù)

密度梯度離心法免疫吸附分離法熒光激活細(xì)胞分選儀分離法磁珠分離法抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)花環(huán)沉降法免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第6頁外周血單核細(xì)胞分離離心前離心后稀釋抗凝血淋巴細(xì)胞分離液血漿單個核細(xì)胞粒細(xì)胞紅細(xì)胞密度梯度離心法免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第7頁淋巴細(xì)胞及其亞群分離免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第8頁抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)

T免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第9頁小白鼠抓取和固定通常見右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上，在小鼠向前掙扎爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，翻轉(zhuǎn)后將小鼠置于左手掌心、無名指和小指夾其背部皮膚和尾部，即可將小鼠完全固定。免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第10頁小白鼠抓取和固定免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第11頁小白鼠抓取和固定免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第12頁小白鼠處死方法頸椎脫臼法：用拇指和食指用力往下按住鼠頭，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上方一拉，使之頸椎脫臼，造成脊髓與腦髓斷離，動物馬上死亡。免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第13頁小白鼠處死法（頸椎脫臼法）

免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第14頁倒T字開腹

免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第15頁小白鼠脾臟免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第16頁小白鼠脾臟免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第17頁小白鼠脾臟

免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第18頁小白鼠胸腺免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第19頁小白鼠胸腺免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第20頁【試驗(yàn)器材】

小白鼠手術(shù)器械，解剖臺,血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,顯微鏡0.2％臺盼藍(lán)染液免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第21頁【試驗(yàn)步驟】頸椎脫臼法處死小白鼠，取其脾臟將脾臟放入適量（約15ml）生理鹽水中，除去筋膜取綠豆大小脾臟，用玻片研磨制成10ml細(xì)胞懸液取１ml細(xì)胞懸液于試管中，加入１滴臺盼藍(lán)染液混勻后靜置3分鐘，低倍鏡觀察免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第22頁【臺盼蘭拒染法原理】

通透性著色顏色體積

死細(xì)胞

高

易藍(lán)大

活細(xì)胞

低

難無色小活細(xì)胞死細(xì)胞免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第23頁注意事項(xiàng)脾臟去凈筋膜，棄邊緣，取其中間個別研磨時不可用力過大，時間不宜過長染色時間不宜過長或過短血細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用方法（10倍鏡、暗視野）免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第24頁血細(xì)胞記數(shù)板

細(xì)胞計(jì)數(shù)池免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第25頁血細(xì)胞計(jì)數(shù)池結(jié)構(gòu)

白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)：

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)：無效計(jì)數(shù)區(qū)免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第26頁【計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)】

1、2、“”形隨機(jī)計(jì)數(shù)S計(jì)左不計(jì)右，計(jì)上不計(jì)下√

×√√免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第27頁【試驗(yàn)結(jié)果】

細(xì)胞計(jì)數(shù)隨機(jī)計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，并數(shù)出其中活細(xì)胞數(shù)結(jié)果計(jì)算細(xì)胞活力＝活細(xì)胞數(shù)／細(xì)胞總數(shù)×100%免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的分離第28頁試驗(yàn)操作錄像免疫器官的觀察與免疫細(xì)胞的