十一章胚胎移植課件

第十一章胚胎移植胚胎移植技術(shù)概述胚胎移植的意義國(guó)內(nèi)外發(fā)展概況胚胎移植的基本原則牛胚胎移植操作步驟一、概述（一）概念胚胎移植是指將一頭良種母畜配種后的早期胚胎取出（或通過(guò)體外受精及及其他方式得到體外生產(chǎn)的胚胎），移植到另一頭同種且生理狀態(tài)相同的母畜體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成為新個(gè)體的過(guò)程。也稱(chēng)作借腹懷胎。提供胚胎的個(gè)體為供體(Donor)，接受胚胎的個(gè)體為受體(Recipient)。（二）發(fā)展概況1890年英國(guó)第一次兔獲得胚胎移植成功1934年綿羊1949年山羊1951年豬、牛1970年馬1975年1月美國(guó)丹佛召開(kāi)第一屆國(guó)際胚胎移植學(xué)會(huì)1980年代歐洲使用MOET奶牛育種1.充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力以奶牛為例，按照目前的技術(shù)水平，供體母牛每隔60d可進(jìn)行超排處理一次，每次能獲得可用胚胎4-5枚，一頭良種母牛每年能生產(chǎn)可用胚胎25-30枚，移植到受體內(nèi)能獲得12-15頭犢牛，而在自然狀態(tài)下，一頭母牛平均每年只能獲得一頭犢牛。(三)胚胎移植的意義2.加速育種進(jìn)程MOET技術(shù)能大幅度提高母畜繁殖力，擴(kuò)大優(yōu)秀母畜在群體中的影響，增加后代選擇強(qiáng)度。如在奶牛育種中，MOET技術(shù)能獲得更多具有高產(chǎn)性能的半同胞和全同胞，在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到后裔測(cè)定所要求后代的數(shù)量，提早完成后裔測(cè)定工作，增加選擇強(qiáng)度和準(zhǔn)確性，縮短育種進(jìn)程。應(yīng)用MOET核心群育種方案，公牛的遺傳評(píng)定時(shí)間可縮短40％，生產(chǎn)性狀的年遺傳進(jìn)展比常規(guī)的人工授精提高20％左右。如果在青年母?；蚰秆蛑袘?yīng)用活體采卵和胚胎移植技術(shù)，年遺傳進(jìn)展可提高30％-70％。八戒飛抵島城跨國(guó)娶妻加拿大846頭豬運(yùn)抵青島，價(jià)值190萬(wàn)美元（2007-10-17）成本高，時(shí)間長(zhǎng)，可用ET代替活體引種。4.保存品種資源結(jié)合胚胎冷凍技術(shù)為可保存國(guó)家或地區(qū)間特有的家畜品種資源，建立種質(zhì)資源庫(kù)提供新的技術(shù)手段，還可降低種質(zhì)資源保存費(fèi)用?；钚蟊７N不僅成本很高、規(guī)模有限，而且還容易發(fā)生基因漂變。胚胎冷凍保種也優(yōu)于精液冷凍保種，因?yàn)橐粋€(gè)胚胎是一個(gè)完整的個(gè)體，這樣，冷凍或冷藏一個(gè)胚胎不僅保存了一個(gè)個(gè)體的基因，也保存了基因組織。而且要從精子中重新構(gòu)建一個(gè)已經(jīng)滅跡了的群體，需要級(jí)進(jìn)許多世代，而通過(guò)胚胎再構(gòu)建一個(gè)群體，僅在一個(gè)世代內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)。胚胎冷凍保種不僅成本低廉、方法簡(jiǎn)單，而且能避免活畜保種因疾病、自然災(zāi)害或基因漂變?cè)斐煞N質(zhì)消亡的風(fēng)險(xiǎn)。6.研究手段目前，胚胎工程技術(shù)中應(yīng)用最多的是胚胎移植技術(shù)，無(wú)論是轉(zhuǎn)基因胚胎還是克隆等獲得的胚胎，最后都必須經(jīng)胚胎移植才能獲得后代，胚胎移植是胚胎工程的最后一道“工序”。因此，可以說(shuō)它是胚胎工程技術(shù)的基礎(chǔ)。胚胎移植技術(shù)與其他繁育技術(shù)的關(guān)系

胚胎移植技術(shù)在整個(gè)動(dòng)物繁育新技術(shù)的體系中是一項(xiàng)基礎(chǔ)性的、關(guān)鍵的技術(shù)人工授精核移植技術(shù)發(fā)情控制與超數(shù)排卵技術(shù)胚胎移植干細(xì)胞技術(shù)胚胎采集、鑒定與冷凍保存技術(shù)胚胎分割技術(shù)卵子體外成熟，體外受精嵌合體技術(shù)（四）生理學(xué)基礎(chǔ)、基本原則和條件1、生理學(xué)基礎(chǔ)（1）母畜發(fā)情后生殖器官的孕向發(fā)育（2）早期胚胎呈游離狀態(tài)（3）不存在免疫問(wèn)題（4）胚胎的遺傳特性不受受體影響3、條件供體超排反應(yīng)良好；胚胎回收順利；胚胎質(zhì)量好、保存可靠；受體黃體良好；受體飼養(yǎng)管理?xiàng)l件良好；技術(shù)人員操作熟練；胚胎操作及移植器械恰當(dāng)。(五)胚胎移植的技術(shù)程序包括供體的超數(shù)排卵、供體和受體的同期發(fā)情處理、供體的發(fā)情鑒定與配種、胚胎采集、胚胎的檢查與鑒定、胚胎的保存、胚胎的移植胚胎移植程序示意圖二、胚胎移植的基本步驟(一)供體和受體的選擇1.供體的選擇遺傳學(xué)價(jià)值高；身體健康（傳染病、寄生蟲(chóng)病、生殖系統(tǒng)疾?。荒挲g適中；體況適中；發(fā)情周期正常；避免應(yīng)激2.受體的選擇(三)供體的超數(shù)排卵1.超排方法（1）已知發(fā)情周期供體超排（2）未知發(fā)情周期供體超排（未知+安排工作+初期周期不穩(wěn)定）孕激素+FSHPG一次注射法PG二次注射法同（1）3.影響超排效果的因素(1)個(gè)體差異與動(dòng)物的種類(lèi)、品種、年齡、胎次、體重及營(yíng)養(yǎng)情況都有關(guān)系(2)激素所用激素的種類(lèi)、用量和注射程序，都會(huì)對(duì)超排效果有一定的影響(3)用藥時(shí)間發(fā)情周期、產(chǎn)后階段及季節(jié)不同，超排結(jié)果均有差別（山羊一般可以在注射PGF2α后的48～96h內(nèi)發(fā)情。可使超排處理安排在周期的第9～17d的任何一天。但15d以后處理排卵數(shù)較多）。(五)胚胎回收與鑒定

1.回收時(shí)間2.回收方法（離體生殖道、手術(shù)回收、非手術(shù)回收）

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物豬、羊牛、馬

手術(shù)回收?qǐng)鏊?、器械和人員的準(zhǔn)備供體準(zhǔn)備輸卵管回收子宮角回收輸卵管+子宮角回收胚胎采集子宮回收胚胎輸卵管回收胚胎

超排后的黃體

非正常的卵巢：大卵泡羊手術(shù)回收子宮角胚胎

移植胚胎

受體與產(chǎn)的羔羊PBS集卵杯子宮頸

子宮角卵巢3.檢胚剔除異物檢胚吸管1.吸管2.乳膠管3.玻璃珠胚胎凈化4.胚胎鑒定-檢查和評(píng)定質(zhì)量(1)形態(tài)學(xué)法①卵子是否受精。②透明帶形狀、厚度，有無(wú)破損等。③卵裂球的大小、致密程度是否有差異，卵黃間隙是否有游離的細(xì)胞或細(xì)胞碎片。④胚胎發(fā)育階段與回收時(shí)應(yīng)達(dá)到的胚齡是否一致，胚胎的透明度，胚胎的可見(jiàn)結(jié)構(gòu)(內(nèi)細(xì)胞團(tuán)、滋養(yǎng)層細(xì)胞、囊胚腔)是否清晰可見(jiàn)。A級(jí);形態(tài)完整,輪廓清晰,呈球形,分裂球大小均勻,透明帶適中；B級(jí);輪廓清晰,色調(diào)和細(xì)胞密度良好；C級(jí);輪廓不清楚,色調(diào)發(fā)暗,結(jié)構(gòu)較松散,游離的細(xì)胞和液胞較多；D級(jí);輪廓模糊,色調(diào)暗,結(jié)構(gòu)松散,碎片細(xì)胞和液泡很多。胚胎的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)不同發(fā)育階段的正常胚胎和不正常胚胎1細(xì)胞期2細(xì)胞期4細(xì)胞期8細(xì)胞期密集桑椹胚桑椹胚囊胚擴(kuò)張囊胚未受精卵透明帶破損透明帶橢圓退化變性胚正常胚胎異常胚胎2-cell4-cell8-cell16-cellMorulaBlastocyst正常胚胎的形態(tài)(2)體外培養(yǎng)法(3)熒光(活體染色)法(4)代謝活性測(cè)定法將待鑒定胚胎放入含有葡萄糖的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)1h后，測(cè)定培養(yǎng)液中葡萄糖的消耗量，每培養(yǎng)1h消耗葡萄糖2μg以上者為活胚胎。(六)胚胎保存

1.常溫保存(15～25℃)通常采用含20%犢牛血清的PBS保存液，可保存胚胎4～8h2.低溫保存。0～10℃3.冷凍保存(1)逐步降溫法(2)一步細(xì)管法(3)玻璃化法

(七)胚胎移植1.移胚方法2.移胚部位非手術(shù)法手術(shù)法移植前胚胎裝管手術(shù)法將胚胎移植到輸卵管牛胚胎的移植方法直腸把握法山羊受體移植

3.影響胚胎移植妊娠率的因素(1)胚胎因素包括胚胎質(zhì)量，日齡，移植胚胎的數(shù)量，提供胚胎的供體，胚胎在體外培養(yǎng)的時(shí)間，