HIV抗體檢測(cè)解讀

HIV抗體檢測(cè)解讀第一頁(yè)，共32頁(yè)。HIV簡(jiǎn)介HIV是HIV感染及艾滋?。ˋIDS）的病原體，主要通過(guò)性接觸和體液傳播，HIV主要侵犯和破壞輔助性T淋巴細(xì)胞（CD4+T淋巴細(xì)胞），使機(jī)體細(xì)胞免疫功能受損，最后并發(fā)各種嚴(yán)重的機(jī)會(huì)性感染和腫瘤。HIV可分為HIV-1和HIV-2兩個(gè)型，均為單鏈RNA病毒。前者分布廣泛，后者主要局限于非洲某些國(guó)家和地區(qū)。第二頁(yè)，共32頁(yè)。HIV簡(jiǎn)介人體感染HIV后，血液中最先出現(xiàn)HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出現(xiàn)。幾周后出現(xiàn)IgM抗體并很快消失，此后IgG抗體出現(xiàn)并一直存在。HIV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷以抗體檢測(cè)為主，病毒及相關(guān)抗原的檢測(cè)為輔，后者要求高，僅限于某些研究實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。第三頁(yè)，共32頁(yè)。HIV簡(jiǎn)介HIV-抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)和確認(rèn)試驗(yàn)兩種，篩查試驗(yàn)為陽(yáng)性的血清必須進(jìn)一步確認(rèn)，確認(rèn)為陽(yáng)性的方可報(bào)告HIV感染陽(yáng)性。篩查試驗(yàn)的要求是敏感性高，理論上要求達(dá)到100%（97%--99%），盡可能避免漏掉可能陽(yáng)性的對(duì)象，相對(duì)來(lái)說(shuō)，對(duì)特異性（99%）要求不是太高，允許有少量假陽(yáng)性，這些假陽(yáng)性可以通過(guò)重復(fù)檢測(cè)和確認(rèn)試驗(yàn)排除。第四頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體檢測(cè)適用范圍適用于各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)、采供血機(jī)構(gòu)及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)?？勺鳛閷?duì)HIV感染者/AIDS病人的診斷、報(bào)告和處理的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。第五頁(yè)，共32頁(yè)。

HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室

應(yīng)符合《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范（1997年版）》中對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員、建筑設(shè)施和設(shè)備等條件的要求。應(yīng)符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2004）對(duì)II級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）的各項(xiàng)要求。實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證和實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)按《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》規(guī)定執(zhí)行。第六頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體檢測(cè)的目的HIV抗體檢測(cè)可用于監(jiān)測(cè)、診斷、血液篩查。以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)而進(jìn)行的檢測(cè)，檢測(cè)的人群包括各類高危人群和一般人群。以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況而進(jìn)行的檢測(cè)，包括臨床檢測(cè)和自愿咨詢檢測(cè)、術(shù)前檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV而進(jìn)行的檢測(cè)，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。第七頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)篩查試驗(yàn)陽(yáng)性不能出陽(yáng)性報(bào)告。嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。注意防止樣品間交叉污染。第八頁(yè)，共32頁(yè)。常規(guī)HIV抗體檢測(cè)的方法

HIV抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)（包括初篩和復(fù)檢）和確認(rèn)試驗(yàn)。HIV抗體檢測(cè)篩查試驗(yàn)篩查試劑：必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢合格、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑。篩查方法：常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）。目前國(guó)內(nèi)外主要使用第三代（雙抗原夾心法）試劑，第四代ELISAHIV抗原抗體聯(lián)合測(cè)定試劑已在有些國(guó)家和地區(qū)用于血源篩查，同時(shí)檢測(cè)抗原抗體，可將檢出時(shí)間提前4~9.1d，有利于降低血源篩查的殘余危險(xiǎn)度。第九頁(yè)，共32頁(yè)。其他簡(jiǎn)便快速的HIV檢測(cè)方法明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：PA是HIV血清抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為室溫）。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果。HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA試劑（AFDHIV-1/2PA），已經(jīng)我國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）注冊(cè)批準(zhǔn)。斑點(diǎn)EIA或稱斑點(diǎn)ELISA（dot-EIA）：以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點(diǎn)狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)。反應(yīng)時(shí)間在10min以內(nèi)，使用抗原量少。第十頁(yè)，共32頁(yè)。其他簡(jiǎn)便快速的HIV檢測(cè)方法斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：與斑點(diǎn)EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。區(qū)別在于不用酶標(biāo)記抗體，而代之以紅色的膠體金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。試劑穩(wěn)定，可室溫長(zhǎng)期保存。試驗(yàn)時(shí)不需任何設(shè)備，迅速、簡(jiǎn)便、特異性較好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診個(gè)體檢測(cè)。目前已有在國(guó)內(nèi)被SFDA批準(zhǔn)注冊(cè)的國(guó)外進(jìn)口試劑和國(guó)內(nèi)產(chǎn)品。一般可在1030min內(nèi)判讀結(jié)果。第十一頁(yè)，共32頁(yè)。其他簡(jiǎn)便快速的HIV檢測(cè)方法艾滋病唾液檢測(cè)卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時(shí)檢測(cè)含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測(cè)唾液中的HIVIgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可避免靜脈穿刺。第十二頁(yè)，共32頁(yè)。幾種常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法的比較第三代ELISA第四代ELISAPA膠體硒WB檢測(cè)的是總抗體，第四代ELISA可同時(shí)檢測(cè)P24抗原主要包括IgM、IgG抗體IgG抗體P24抗原消失、抗體產(chǎn)生時(shí)敏感性高感染早期P24抗原出現(xiàn)時(shí)敏感性高操作方便易行，敏感性特異性均可敏感性低于第三代、第四代ELISA和PAIgG抗體出現(xiàn)時(shí)特異性高第十三頁(yè)，共32頁(yè)。幾種常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法的比較在感染早期，IgM抗體出現(xiàn)時(shí)第三代、第四代ELISA、PA、膠體硒方法優(yōu)于WB，而在方法學(xué)上，硒標(biāo)的敏感性要低于第三代、第四代ELISA和PA。因此，當(dāng)兩種篩查試驗(yàn)均陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)而WB陰性時(shí)，不能輕易報(bào)告陰性，要同WB不確定反應(yīng)一樣，至少隨訪6個(gè)月，以防漏檢。建議將WB和膠體硒法檢測(cè)的“窗口期”至少定為6個(gè)月。第十四頁(yè)，共32頁(yè)。

樣品初篩檢測(cè)

篩查試劑

陽(yáng)性反應(yīng)

陰性反應(yīng)

重復(fù)檢測(cè)

原有試劑加另外一種篩查試劑

一陰一陽(yáng)

均陰性反應(yīng)均陽(yáng)性反應(yīng)送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)

報(bào)告陰性

HIV抗體篩查檢測(cè)流程

第十五頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體初篩試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：將試劑和樣品放置在室溫(20℃)平衡,按實(shí)驗(yàn)室SOP做好試劑準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)操作：按試劑盒說(shuō)明書以及質(zhì)控和安全防護(hù)要求進(jìn)行篩查檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：NC、PC符合試劑盒實(shí)驗(yàn)成立的條件，Cutoff值=陰性對(duì)照均值+C，小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽(yáng)性。報(bào)告：對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽(yáng)性報(bào)告。第十六頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體復(fù)檢試驗(yàn)對(duì)初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測(cè)。如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)（蛋白印跡試驗(yàn)）。對(duì)HIV抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報(bào)告；對(duì)初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)者不能出陽(yáng)性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告。初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)樣品轉(zhuǎn)送時(shí)需填寫“HIV抗體復(fù)測(cè)送檢單”。對(duì)篩查陰性和陽(yáng)性者，均需做好檢測(cè)后咨詢。第十七頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告HIV抗體陰性：無(wú)HIV抗體特異帶出現(xiàn)。排除因“窗口期”而出現(xiàn)的假陰性結(jié)果，建議高危行為后3個(gè)月時(shí)再做抗體檢測(cè)。也可進(jìn)行HIV-1P24抗原或HIV核酸檢測(cè)，作為輔助診斷。HIV抗體不確定（±）：出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽(yáng)性，在備注中應(yīng)注明“3個(gè)月后復(fù)檢”。隨訪復(fù)檢：每3個(gè)月隨訪復(fù)檢1次，連續(xù)2次，共6個(gè)月。如果檢測(cè)時(shí)暴露時(shí)間已超過(guò)3個(gè)月，則在3個(gè)月后隨訪1次即可。必要時(shí)可做HIV-1P24抗原或HIV核酸測(cè)定，但檢測(cè)結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認(rèn)報(bào)告要依據(jù)血清學(xué)隨訪結(jié)果。第十八頁(yè)，共32頁(yè)。HIV陽(yáng)性結(jié)果的判定HIV-1抗體陽(yáng)性（+）：至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn),或至少1條env帶和p24帶同時(shí)出現(xiàn)。HIV-2抗體血清學(xué)陽(yáng)性（+）：同時(shí)符合試劑盒提供的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)和WHO陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)至少2條env帶(gp36和gp140/gp105)。第十九頁(yè)，共32頁(yè)。WB確認(rèn)試驗(yàn)中HIV抗體特異帶HIV-1抗體特異帶：env帶:gp160/gp120、gp41；gag帶:p55、p24、p17(或p18)；pol帶:p66(或p65)、p51、p31。HIV-2抗體特異帶：env帶:gp140/gp105、gp36（也可為gp125/gp80、gp36）；gag帶:p56、p26、p16；pol帶:p68、p53、p34。第二十頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體檢測(cè)的替代策略

第二十一頁(yè)，共32頁(yè)。

送檢樣品

用兩種不同原理或不同廠家的試劑復(fù)測(cè)（其中包括進(jìn)口第三代ELISA試劑

進(jìn)口第三代ELISA試劑復(fù)測(cè)S/CO比值≥6.0

進(jìn)口第三代ELISA試劑復(fù)測(cè)S/CO比值1.0－5.9

確認(rèn)試驗(yàn)

判定陽(yáng)性，上報(bào)疫情

兩種均陽(yáng)性

兩種均陰性

一陰一陽(yáng)

陽(yáng)性反應(yīng)

陰性反應(yīng)

選用篩查試劑

陽(yáng)性

陰性不確定，隨訪

判定陰性替代策略Ⅰ（HIV感染疫情報(bào)告檢測(cè)策略）檢測(cè)流程

第二十二頁(yè)，共32頁(yè)。替代策略Ⅱ（高危人群VCT檢測(cè)策略）檢測(cè)流程第二十三頁(yè)，共32頁(yè)。替代策略Ⅲ（一般人群VCT策略）的檢測(cè)及結(jié)果報(bào)告流程圖第二十四頁(yè)，共32頁(yè)。HIV抗體檢測(cè)情況季報(bào)流程

艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室省衛(wèi)生行政部門同級(jí)衛(wèi)生行政部門未設(shè)置艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室的地區(qū)艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室和艾滋病檢測(cè)點(diǎn)

每季首月5日前報(bào)告上季檢測(cè)情況

每季首月10日前報(bào)告上季檢測(cè)情況

每季首月5日前報(bào)告上季檢測(cè)情況

艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室每季首月15日前報(bào)告上季檢測(cè)情況每季首月10日前報(bào)告上季檢測(cè)情況

中國(guó)CDC性艾中心艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室

第二十五頁(yè)，共32頁(yè)。HIV核酸定性檢測(cè)

規(guī)定了核酸檢測(cè)、核酸序列測(cè)定的實(shí)驗(yàn)室條件、檢測(cè)方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

結(jié)果報(bào)告：HIV核酸檢測(cè)陰性:只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性。HIV核酸檢測(cè)陽(yáng)性:可作為診斷HIV感染的輔助指標(biāo)，不單獨(dú)用于HIV感染的診斷。嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理制度（分區(qū)、儀器和材料的專用、單向流向、廢棄物處理）

第二十六頁(yè)，共32頁(yè)。HIVRNA定量測(cè)定（病毒載量測(cè)定）

實(shí)驗(yàn)室條件

實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū)（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)）人員(具有艾滋病實(shí)驗(yàn)室上崗資格并接受省級(jí)以上艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全及實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn))設(shè)施和設(shè)備（區(qū)域性專用）方法常用的HIVRNA定量測(cè)定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗(yàn)（RT-PCR）、核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)（NASBA）、分支DNA雜交試驗(yàn)（bDNA）。

第二十七頁(yè)，共32頁(yè)。不同病毒載量檢測(cè)方法的比較第二十八頁(yè)，共32頁(yè)。HIV核酸定量檢測(cè)的意義輔助診斷：當(dāng)RNA測(cè)定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果時(shí)（>3，000c/ml），感染發(fā)生的可能性非常大。應(yīng)綜合其它檢測(cè)數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷。

早期診斷：HIV感染孕婦所生嬰兒、↓殘余危險(xiǎn)度

病程監(jiān)控：確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。

指導(dǎo)治療方案及療效判定：通常在治療前后病毒水平降低0.5log以上才被認(rèn)為臨床有效。

預(yù)測(cè)疾病進(jìn)程

第二十九頁(yè)，共32頁(yè)。適用范圍：★HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；★HIV-1抗體陽(yáng)性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；★第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷；★監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。檢測(cè)方法：通常是采用EL