閻實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基的制備消毒滅菌

閻實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基的制備消毒滅菌第1頁/共28頁課堂紀(jì)律嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度嚴(yán)肅課堂紀(jì)律不允許無故曠課、早退（1次）遲到（3次）不能做與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的事第2頁/共28頁實(shí)驗(yàn)室安全和衛(wèi)生安全實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學(xué)試劑和儀器衛(wèi)生每次實(shí)驗(yàn)需留下6位同學(xué)值日，協(xié)助保持實(shí)驗(yàn)室清潔第3頁/共28頁1、了解培養(yǎng)基的概念、種類和用途，明確培養(yǎng)基的配制原理。2、學(xué)習(xí)掌握培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟。3、掌握高壓蒸汽滅菌的原理和方法步驟。實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊慌囵B(yǎng)基的配制第4頁/共28頁

培養(yǎng)基(culturemedium)——是指人工配制的、適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。自然界中微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加之實(shí)驗(yàn)和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，不同種類的培養(yǎng)基一般都應(yīng)含有微生物生長所需的碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長因子和水六大營養(yǎng)要素，且各成分比例應(yīng)合適。為了滿足微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的要求，還必須控制培養(yǎng)基合適的pH。實(shí)驗(yàn)原理第5頁/共28頁常用凝固劑是瓊脂，固體培養(yǎng)基瓊脂加量通常為1.5%-2%；半固體培養(yǎng)基瓊脂加量為0.5%-0.8%。實(shí)驗(yàn)原理(continued)常用培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng)；高氏一號(hào)培養(yǎng)基用于培養(yǎng)放線菌；麥芽汁培養(yǎng)基和豆芽汁培養(yǎng)基通常用于酵母菌的培養(yǎng)；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)霉菌。第6頁/共28頁牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方：牛肉膏3g1.5g蛋白胨10g5gNaCl5g2.5g瓊脂15-20g7.5-10g水1000ml500mlpH7.4-7.6

7.4-7.65-6人一組，每組500ml斜面2支（每人），余裝三角瓶

第7頁/共28頁1、稱量及溶化2、調(diào)pH3、加瓊脂、溶化、定容、（過濾）4、分裝（每人2只試管）、加塞、包扎5、滅菌6、擺斜面操作步驟第8頁/共28頁

稱量與溶化：注意：1）牛肉膏的稱?。河貌ＡО粽喝∵m量牛肉膏，抹于稱量紙上，勿取過量，不足時(shí)，再蘸取少量，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落，用玻璃棒將紙撈出即可。操作步驟(continued)第9頁/共28頁加瓊脂、溶化、定容、（過濾）瓊脂一般應(yīng)在調(diào)好了pH后加入，瓊脂的加入不會(huì)影響培養(yǎng)基的pH。瓊脂加入后應(yīng)煮沸數(shù)分鐘，以使其完全溶化，否則易出現(xiàn)分布不均，導(dǎo)致部分斜面不凝固或過軟，另外部分則瓊脂過多。加熱過程中因水分蒸發(fā)而可能使培養(yǎng)基體積減小，應(yīng)補(bǔ)充水分至所需量。操作步驟(continued)第10頁/共28頁分裝：1）裝量：液體——試管高度的1/4左右固體——試管高度的1/5，滅菌后擺斜面半固體——一般為試管高度的1/3，滅菌后垂直放置操作步驟(continued)第11頁/共28頁分裝：2）分裝裝置：操作步驟(continued)3）注意：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染；若不慎沾在了管口，可用濕紗布揩凈。第12頁/共28頁棉塞制作方法：加塞：棉塞或硅膠塞作用：防止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。第13頁/共28頁包扎：

加塞后，試管通常每7支一起，包上一層牛皮紙或兩層報(bào)紙，用線繩扎緊。三角瓶加塞后也用牛皮紙包扎。

以活結(jié)形式扎緊，以便使用時(shí)容易解開。

用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、配制人或?qū)嶒?yàn)組。操作步驟(continued)滅菌時(shí)包牛皮紙第14頁/共28頁滅菌：

培養(yǎng)基滅菌一般采用壓力蒸汽滅菌

通常滅菌條件為1.05kg/cm2,121.3℃滅菌20分鐘；含糖量高的培養(yǎng)基，如馬丁氏培養(yǎng)基則為0.56kg/cm2,112.6℃滅菌30分鐘。

操作步驟詳見下一課件操作步驟(continued)第15頁/共28頁擺斜面：

成扎擺放，不需將每支試管單獨(dú)擺放

最好待培養(yǎng)基冷至60℃時(shí)擺斜面，以免形成大量冷凝水無菌檢查：

將滅菌的培養(yǎng)基放在37℃溫箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。第16頁/共28頁二消毒與滅菌第17頁/共28頁

加熱法干熱法濕熱法火焰燒灼熱空氣滅菌壓力蒸汽滅菌間歇滅菌煮沸滅菌巴斯德消毒實(shí)驗(yàn)原理1、了解掌握常用消毒、滅菌方法的原理。2、學(xué)習(xí)掌握干熱滅菌和壓力蒸汽滅菌操作步驟。實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡?8頁/共28頁

濾膜過濾器的濾膜是一種多孔纖維素，孔徑一般為0.45um，過濾時(shí)，液體和小分子物質(zhì)通過，細(xì)菌被截流在濾膜上。過濾除菌——

許多材料，如血清、糖溶液等，用一般加熱消毒滅菌方法，均會(huì)被熱破壞，應(yīng)采用過濾除菌。應(yīng)用最廣的過濾器有蔡氏(Seitz)過濾器和膜過濾器。第19頁/共28頁干熱滅菌電烤箱實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟

1、干熱滅菌

2、壓力蒸汽滅菌第20頁/共28頁干熱滅菌1、裝入待滅菌物品2、升溫接通電源，加熱升溫至160-170℃。3、恒溫保持160-170℃2小時(shí)。4、降溫切斷電源，自然降溫。5、開箱取物待烤箱溫度降到70℃以下以后，方可打開箱門，取出物品。箱內(nèi)溫度高于70℃，切勿自行打開箱門，以免玻璃器皿炸裂。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟(continued)

第21頁/共28頁紫外線滅菌——

紫外線波長在200-300nm，具有殺菌作用，其中以265-266nm殺菌力最強(qiáng)。無菌室或無菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。實(shí)驗(yàn)原理(continued)

第22頁/共28頁實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟(continued)

壓力蒸汽滅菌第23頁/共28頁第24頁/共28頁壓力蒸汽滅菌1、檢查水位，放入物品。2、加蓋、擰緊對(duì)稱用力3、加熱升溫4、排冷空氣等壓力升至0.5kg/cm2時(shí)，打開排氣閥，排凈冷空氣。5、升溫、保壓等鍋內(nèi)壓力升至所需數(shù)值（通常為1.03kg/cm2），保持壓力20-30分鐘。6、降壓、取物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟(continued)

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