轉基因動物第一章緒論

教材及主要參考書目:1.張健.轉基因動物技術[M].北京：科學出版社，20092.陳永福.轉基因動物[M].北京：科學出版社，20023.張惠展，賈林芝.基因工程[M].第2版，北京：高等教育出版社，20104.卡爾A平克爾特.轉基因動物技術手冊[M].勞為特譯,北京：化學工業(yè)出版社，20041目前一頁\總數(shù)四十一頁\編于六點教學內容

第一章緒論

第二章實驗動物的飼養(yǎng)與培育

第三章基因表達的調控

第四章轉基因的制備及導入宿主動物

第五章基因的定位打靶及條件打靶

第六章轉基因及其表達的檢測

第七章動物生物反應器

第八章轉基因技術的安全和倫理問題

2目前二頁\總數(shù)四十一頁\編于六點目的要求掌握動物轉基因技術的基本原理和技術要點

重點講授轉基因的分子生物學原理

第一章緒論

3目前三頁\總數(shù)四十一頁\編于六點轉基因動物技術的基本原理

21轉基因動物技術的應用

3轉基因動物技術要點主要內容4目前四頁\總數(shù)四十一頁\編于六點動物轉基因技術Animaltransgenictechnique第一節(jié)轉基因動物技術的應用

轉基因動物技術：指借助基因工程技術將體外重組的結構基因，導入受精卵或早期胚胎，培育出轉基因個體的技術。轉基因動物：是指用實驗導入的方法將外源基因在染色體基因內穩(wěn)定整合并能穩(wěn)定表達的一類動物（包括基因敲除的動物）。5目前五頁\總數(shù)四十一頁\編于六點一、為什么要研究和應用轉基因動物？細菌基因工程？細胞基因工程？6目前六頁\總數(shù)四十一頁\編于六點Growth-enhancedTransgenic(900g)andcontrol(350g)Catfishatthesameageaboutoneyear.Growth-enhancedTransgenic(730g)andcontrol(15g)salmonatthesameageaboutoneyear.（1）加快生長速度，提高飼料報酬

1、在畜牧業(yè)

二、轉基因動物技術的應用7目前七頁\總數(shù)四十一頁\編于六點比利時藍牛肌肉增加表型

8目前八頁\總數(shù)四十一頁\編于六點（2）提高畜禽對疾病的抵抗力9目前九頁\總數(shù)四十一頁\編于六點溶葡萄球菌酶基因10目前十頁\總數(shù)四十一頁\編于六點（3）改善乳品質種屬創(chuàng)始人年份國家具體成果牛ColmanA1996英國敲除牛乳中β-乳球蛋白JostB1999法國敲除牛乳中乳糖BrophyB2003新西蘭牛乳中轉入β-酪蛋白李寧2008中國牛乳中轉入乳鐵蛋白羊RehWA2004美國轉入硬脂酸輔酶A基因11目前十一頁\總數(shù)四十一頁\編于六點（4）提高羊毛產(chǎn)量和品質12目前十二頁\總數(shù)四十一頁\編于六點（5）改善肉質13目前十三頁\總數(shù)四十一頁\編于六點Thefirstanimaleverpatented.Thismouse,theso-calledoncomouse,HarwardUniversityreceivedapatentforthetransgenicanimalsin1988,hasbeengeneticallymodifiedsothatitscellsarepronetocancer.Itwasproducedbymicroinjectionc-mycandmousemammarytumorvirus.（1）制備動物疾病模型

2、在醫(yī)學上14目前十四頁\總數(shù)四十一頁\編于六點（2）基因治療

上世紀九十年代初，一位因ADA(腺苷酸脫氨酶)基因缺陷導致嚴重免疫缺損的四歲女孩，由美國國立衛(wèi)生研究院用ADA基因治愈?！盎蛑委煛毖芯繜釓拇瞬叭澜?，為保障人類健康展現(xiàn)了美好的前景。

15目前十五頁\總數(shù)四十一頁\編于六點取患者骨髓分離干細胞病毒正?；虿⑷胝；虻母杉毎⑷牖颊唧w內16目前十六頁\總數(shù)四十一頁\編于六點（3）生產(chǎn)人的代用器官17目前十七頁\總數(shù)四十一頁\編于六點18目前十八頁\總數(shù)四十一頁\編于六點

（4）生產(chǎn)藥品19目前十九頁\總數(shù)四十一頁\編于六點20目前二十頁\總數(shù)四十一頁\編于六點21目前二十一頁\總數(shù)四十一頁\編于六點用于研究真核細胞的基因轉錄、表達和調控規(guī)律以及個體發(fā)育的分子調控規(guī)律。3、在基礎生物學中22目前二十二頁\總數(shù)四十一頁\編于六點23目前二十三頁\總數(shù)四十一頁\編于六點通過觀察發(fā)育過程中,VEGFR2-Luc轉基因小鼠的VEGFR2表達逐漸降低,研究生物體發(fā)育過程信號強度24目前二十四頁\總數(shù)四十一頁\編于六點25目前二十五頁\總數(shù)四十一頁\編于六點動物轉基因技術Animaltransgenictechnique一、轉基因的細胞學原理

第二節(jié)動物轉基因技術的基本原理

26目前二十六頁\總數(shù)四十一頁\編于六點27目前二十七頁\總數(shù)四十一頁\編于六點動物轉基因技術Animaltransgenictechnique二、轉基因的胚胎學原理

28目前二十八頁\總數(shù)四十一頁\編于六點分離囊胚細胞卵黃囊胚層通過脂質體轉染外源基因把轉染的囊胚細胞注射入胚盤下腔空間卵黃胚盤下空間29目前二十九頁\總數(shù)四十一頁\編于六點胚胎干細胞30目前三十頁\總數(shù)四十一頁\編于六點31目前三十一頁\總數(shù)四十一頁\編于六點動物轉基因技術Animaltransgenictechnique三、轉基因的分子生物學原理

轉移基因的原理：各種生物的遺傳密碼都是統(tǒng)一的，都是以3個堿基決定一個氨基酸這樣的密碼形式貯存在DNA鏈上。32目前三十二頁\總數(shù)四十一頁\編于六點1953年on提出DNA雙螺旋結構。

33目前三十三頁\總數(shù)四十一頁\編于六點1960-1970S，WernerArber,HamiltonSmithandDanielNathans發(fā)現(xiàn)了DNA限制性內切酶。他們獲得了1978年的諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。34目前三十四頁\總數(shù)四十一頁\編于六點1973年，Boyer&Cohen進行了DNA重組實驗并獲得成功。35目前三十五頁\總數(shù)四十一頁\編于六點三、轉基因的分子生物學原理

整合位點：DNA分子的游離末端和斷裂點（可能）。外源DNA分子游離末端和斷裂點之間相互作用能夠誘導外源DNA整合入基因組。轉基因在基因組中的存在方式有兩種，即隨機整合和定向（點）整合。

36目前三十六頁\總數(shù)四十一頁\編于六點動物轉基因技術Animaltransgenictechnique第三節(jié)動物轉基因技術要點

一、轉基因動物的制備過程（1）用DNA重組技術克隆目的基因并改建；（2）目的基因向生殖細胞或胚胎干細胞的高效轉移；（3）含外源基因的受精卵或早期胚胎在合適的環(huán)境下發(fā)育；（4）鑒定獲得所需的穩(wěn)定的轉基因動物品系。37目前三十七頁\總數(shù)四十一頁\編于六點二、轉基因方法

（1）顯微注射法（2）反轉錄病毒感染法（3）胚胎干細胞移植法（4）精子載體法（5）核移植法（6）脂質體介導法（7）電穿孔法。（8）定位整合技術38目前三十八頁\總數(shù)四十一頁\編于六點動物轉基因技術Animaltransgenictechnique三、轉基因動物制備方法1、供體DNA的準備2、基因轉移受體細胞準備3、實驗動物的準備（2）不育雄性動物（3）假孕雌性動物（1）取受精卵的雌性動物39目前三十九頁\總數(shù)四十一頁\編于六點4、轉基因動物（小鼠）的制作（1）選擇小鼠品系（2）準備不育雄鼠和假孕母