新種表形特征鑒定

碳源利用采用無(wú)碳源培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入0.5%的不同糖醇類物質(zhì)作為碳源，接種待測(cè)放線菌，觀察放線菌生長(zhǎng)情況，以無(wú)碳源培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照判斷放線菌利用碳源的能力。糖醇類物質(zhì)遇高溫可能分解轉(zhuǎn)化，用乙醚消毒滅菌碳源利用試驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基:硫酸銨2.64g，磷酸二氫鉀2.38g，磷酸氫二鉀5.65g，硫酸鎂1g，硫酸銅0.0064g，硫酸亞鐵0.0011g氯化錳0.0079g，硫酸鋅0.0015g，蒸餾水1000mL，pH7.2-7.4。氮源利用采用無(wú)氮源培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入0.1%的不同氮源，接種待測(cè)放線菌，以無(wú)氮源培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照判斷放線菌利用碳源的能力防止氮源遇高溫分解轉(zhuǎn)化，用乙醚消毒滅菌氮源利用試驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖1g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，氯化鈉0.5g，硫酸亞鐵0.01g，蒸餾水1000mL，pH7.0。溫度耐受及最適生長(zhǎng)溫度將待測(cè)放線菌接種到最適的生長(zhǎng)培養(yǎng)基上，分別放置4°C，8°C，12°C，16°C，20°C，25C，28C，32OC，37C，40OC，45C，50C和55C溫度條件下培養(yǎng)，根據(jù)菌株的生長(zhǎng)狀態(tài)確定放線菌的溫度生長(zhǎng)范圍和最適生長(zhǎng)溫度。鹽度耐受及最適生長(zhǎng)鹽濃度在待測(cè)放線菌的最適生長(zhǎng)培養(yǎng)基中添加0，5%，10%，15%，20%，25%濃度的氯化鈉。接種待測(cè)放線菌，根據(jù)放線菌的生長(zhǎng)情況確定放線菌的鹽度耐受范圍和最適生長(zhǎng)鹽濃度。pH耐受及最適生長(zhǎng)pH的確定配制待測(cè)放線菌最適生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，用緩沖液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基）H至4,5,6,7,8,9,10，11。接種待測(cè)放線菌，根據(jù)放線菌在不同?日培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況確定待測(cè)放線菌的pH耐受范圍和最適生長(zhǎng)pH。注：配制低pH的培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加瓊脂的用量黑色素產(chǎn)生采用黑色素產(chǎn)生培養(yǎng)基，接種待測(cè)放線菌，觀察菌落周圍瓊脂是否有黑色素產(chǎn)生黑色素產(chǎn)生培養(yǎng)基培養(yǎng)基：蛋白胨20g，酵母粉1g，檸檬酸鐵0.5g,磷酸氫二鉀1g，硫代硫酸鈉0.08g，蒸餾水1000mL,pH7.0硫化氫產(chǎn)生將待測(cè)放線菌接種硫化氫產(chǎn)生驗(yàn)證培養(yǎng)基，如果菌株周圍的培養(yǎng)基變成黑色，則說(shuō)明有硫化氫產(chǎn)生硫化氫產(chǎn)生驗(yàn)證培養(yǎng)基：蛋白胨10g，檸檬酸鐵0.5g，蒸餾水1000mLpH7.0明膠液化將待測(cè)放線菌接種于明膠培養(yǎng)基表面，28°C培養(yǎng)，觀察明膠液化程度。觀察前將平板放入4°。冰箱中0.5h,增加區(qū)分度。明膠液化培養(yǎng)基：蛋白胨5g，葡萄糖20g，明膠200g,蒸餾水1000mL,pH7.2-7.4。9.牛奶凝固與胨化將待測(cè)放線菌接種于牛奶凝固與月東化培養(yǎng)基試管中，37。。培養(yǎng)，中有凝塊產(chǎn)生，則為凝固。若液體牛奶培養(yǎng)基被水解成透明或半透明的液體，則為牛奶月東化。牛奶凝固胨化培養(yǎng)基：脫脂奶粉200g，每支試管分裝5mL脫脂奶液，115。滅菌15min。10?淀粉水解采用點(diǎn)接法將放線菌接種于淀粉水解試驗(yàn)培養(yǎng)基上，待菌體生長(zhǎng)良好時(shí)，在菌落周圍滴加碘液。如果有淀粉酶產(chǎn)生，培養(yǎng)基中的淀粉被待測(cè)菌分解利用，則在菌落周圍形成透明圈。淀粉水解試驗(yàn)培養(yǎng)基：可溶性淀粉10g，磷酸氫二鉀0.3g，碳酸鎂1g，氯化鈉0.5g，硝酸鉀1g，瓊脂粉17g，蒸餾水1000mLpH7.2-7.4。碘液的配制：碘1g，碘化鉀2g，蒸餾水300mL。11.硝酸鹽還原將待測(cè)放線菌接種到硝酸鹽還原培養(yǎng)基試管中，37°C分別培養(yǎng)7d和14d，取少許培養(yǎng)液分別加入格里斯氏試劑A、B各一滴，呈紅色、橙色、棕色則為陽(yáng)性，若沒(méi)有變成上述顏色則需加1-2滴二苯胺試劑，若呈藍(lán)色則判定為陰性，不呈藍(lán)色則判定為陽(yáng)性。硝酸鹽還原試驗(yàn)培養(yǎng)基：硫酸鎂0.5g，磷酸氫二鉀0.5g，硝酸鉀1g，蔗糖20g，氯化鈉0.5g，蒸餾水1000mLpH7.0。將1%的二甲基對(duì)苯二胺鹽酸鹽滴加到放線菌菌落上，稍等片刻，菌落變?yōu)榉奂t色或紅色為陽(yáng)性，不變色為陰性，檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)避免與含鐵類物質(zhì)接觸，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性。過(guò)氧化氫酶產(chǎn)生滴加5%的過(guò)氧化氫到放線菌菌落上，稍等片刻，有泡沫或氣泡產(chǎn)生的為陽(yáng)性，不產(chǎn)泡沫或氣泡的為陰性。尿素酶產(chǎn)生將待測(cè)放線菌接種到尿素酶驗(yàn)證培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-10d后培養(yǎng)基變?yōu)榧t色的為陽(yáng)性，不變色的為陰性。尿素酶驗(yàn)證培養(yǎng)基：蛋白胨1g，氯化鈉5&，葡萄糖1g，磷酸二氫鉀2g，苯酚紅0.012g，瓊脂粉16g，蒸餾水1000mL，pH6.8-6.9,呈微黃色。注：尿素用乙醚滅菌，待培養(yǎng)基降溫到55°C時(shí)加入無(wú)菌的尿素，尿素終濃度為2%。脂肪酶產(chǎn)生將待測(cè)放線菌接種到分別添加了吐溫-20，吐溫-40，吐溫-60和吐溫-80的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-10d，菌落周圍有模糊的暈圈者為陽(yáng)性，沒(méi)有暈圈者為陰性。培養(yǎng)基：蛋白胨1g，氯化鈉5g，氯化鈣0.1g，瓊脂9g，蒸餾水1000mL，pH7.0注：吐溫-20，吐溫-40，吐溫-60，吐溫-80單獨(dú)滅菌，待培養(yǎng)基冷卻到50C左右時(shí)，分別添加吐溫至終濃度1%，倒平板。16.纖維素分解將濾紙剪成0.8X8cm的濾紙條，將濾紙條一端浸沒(méi)在無(wú)碳源的液體培養(yǎng)基中。滅菌后將待測(cè)放線菌接種