項(xiàng)目6細(xì)菌抗酸染色

微生物檢驗(yàn)技術(shù)

----細(xì)菌抗酸染色案例1：患者,男性,76歲,因“咳嗽、咯痰2個(gè)月余”于2007年6月入院。患者2個(gè)月前無(wú)明顯誘因出現(xiàn)咳嗽、咯少量白色痰,偶有痰中帶血絲。1個(gè)月前查體胸部CT提示雙肺彌漫性結(jié)節(jié)狀陰影,大小均勻,以雙上肺為著,右上肺陳舊結(jié)核。痰涂片查抗酸菌案例導(dǎo)入案例2：患者女性，28歲，因間斷低熱、咳嗽伴左側(cè)胸痛、氣短2個(gè)月，于2002年5月28日入院?；颊哂?002年3月勞累后出現(xiàn)午后低熱，體溫在37.5℃～37.8℃，伴少量刺激性干咳。4天后無(wú)特殊誘因出現(xiàn)左側(cè)胸部隱痛，深呼吸及平臥位時(shí)加重，且胸痛呈進(jìn)行性加重?；顒?dòng)后感胸痛、氣短。在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院經(jīng)拍胸片、超聲檢查示“左側(cè)胸腔積液”，予穿刺抽液，為粉紅色乳糜樣液體?？紤]為“結(jié)核性胸腔積液”。穿刺液送檢查抗酸菌案例導(dǎo)入問(wèn)一問(wèn)細(xì)菌有哪些染色方法？細(xì)菌染色方法復(fù)染法革蘭染色法抗酸染色法單染法用單一的染料染色抗酸染色法1.熟練掌握細(xì)菌抗酸染色的操作方法2.熟練掌握細(xì)菌抗酸染色的結(jié)果判斷3.掌握細(xì)菌抗酸染色的臨床意義及注意事項(xiàng)學(xué)習(xí)目標(biāo)抗酸染色操作步驟及注意事項(xiàng)抗酸染色原理及染液配方12抗酸染色結(jié)果及臨床意義3學(xué)習(xí)目錄抗酸染色原理及染液配方1抗酸染色法抗酸染色法是1882年由埃利希（Ehrlich）首創(chuàng)，并經(jīng)齊爾（Ziehl）改進(jìn)而創(chuàng)造出的一種細(xì)菌染色方法。1-1抗酸染色原理

分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色。細(xì)胞成分1-1抗酸染色原理

分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過(guò)加熱或者延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其與石炭酸復(fù)紅染液結(jié)合而著色。著色特點(diǎn)1-1抗酸染色原理

分枝桿菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的分枝菌酸與染料結(jié)合牢固，一旦結(jié)合以后，就很難被酸性脫色劑脫色。難以脫色1-1抗酸染色原理

齊尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。染色結(jié)果1-1抗酸染色液的組成石炭酸復(fù)紅染液13%鹽酸酒精2堿性美藍(lán)染液31-2石炭酸復(fù)紅染液（第1液）堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液100ml取飽和液10ml石炭酸復(fù)紅染液100ml堿性復(fù)紅1g95%乙醇10ml5%石炭酸90ml5%石炭酸90ml1-23%鹽酸酒精（第2液）濃鹽酸3ml95%乙醇97ml3%鹽酸酒精100ml1-2堿性美藍(lán)染液（第3液）美藍(lán)酒精飽和溶液100ml取飽和液30ml美藍(lán)染液130ml美藍(lán)2g95%酒精100ml0.01%KOH100ml1-2抗酸染色操作步驟及注意事項(xiàng)2厚涂片取標(biāo)本在干凈的載玻片上涂片，制成20mm×15mm大小的厚膜涂片。干燥自然干燥，讓玻片上的水分揮發(fā)。固定玻片在酒精燈火焰外焰，以鐘擺的速度通過(guò)火焰三次固定?？顾崛旧僮鞑襟E----制片2-1初染石炭酸復(fù)紅，冷染或熱染脫色3%鹽酸酒精復(fù)染堿性美藍(lán)抗酸染色操作步驟----染色2-1在已固定好的涂片上放置濾紙片（濾紙的作用是濾去染液中的沉渣，使標(biāo)本清晰），滴加抗酸染液于濾紙片上，將整個(gè)濾紙片滴滿。將加有染液的濾紙片加溫：在火焰上方保持一定高度，加熱至出現(xiàn)蒸氣（注意不能使染液沸騰），如此反復(fù)2～3次（約5min）。在加熱過(guò)程中要防止將染液烘干，應(yīng)及時(shí)添加染液?？顾崛旧僮鞑襟E----染色2-1去掉濾紙片，待玻片冷卻后，水洗。用3％鹽酸酒精脫色，直到流下的液體無(wú)色為止，進(jìn)行水洗。用堿性美蘭染液復(fù)染30s，水洗，干燥，鏡檢?？顾崛旧僮鞑襟E----染色2-1抗酸染色操作步驟----鏡檢2-1涂片要略厚加溫染色或延長(zhǎng)染色時(shí)間，加溫時(shí)隨時(shí)補(bǔ)加染色液分枝桿菌呈紅色(+)其他細(xì)菌和背景為藍(lán)色(-)抗酸染色注意事項(xiàng)2-2抗酸染色結(jié)果及臨床意義3結(jié)核桿菌染成紅色，細(xì)長(zhǎng)、直的或微彎曲桿菌，偶爾有桿菌著色不均，呈顆粒狀者。標(biāo)本的其余部分及非抗酸性細(xì)菌染成藍(lán)色。必須逐一觀察各個(gè)視野，直到整個(gè)涂片找不到結(jié)核桿菌時(shí)，方可報(bào)告“未找到結(jié)核桿菌”。抗酸染色的結(jié)果3-1抗酸染色的結(jié)果3-1抗酸染色的結(jié)果3-1抗酸染色的結(jié)果3-1抗酸染色的臨床意義臨床意義鑒別細(xì)菌確定分枝桿菌感染程度判定分枝桿菌感染預(yù)后3-21.細(xì)菌抗酸染色的結(jié)果是：A.紅色為陽(yáng)性，藍(lán)色為陰性B.紫色為陽(yáng)性，紅色為陰性C.紫色為陽(yáng)性，藍(lán)色為陰性D.藍(lán)色為陽(yáng)性，紅色為陰性2.抗酸液不包括()A.堿性美蘭B.結(jié)晶紫C.復(fù)紅D.3%HCL酒精3.下列哪種細(xì)菌宜用抗酸染色（）A.大腸桿菌B.鏈球菌C.結(jié)核桿菌D.布氏桿菌4.抗酸染色的操作程序是（）A.堿性美蘭→復(fù)紅→3