中山大學(xué)藥劑學(xué)課件-第四章滅菌與無菌技術(shù)

中山大學(xué)藥劑學(xué)課件-第四章滅菌與無菌技術(shù)第一頁，共12頁。第四章滅菌與無菌技術(shù)

滅菌法是指殺死或除去所有微生物包括繁殖體和芽胞的技術(shù)。細(xì)菌的芽胞具有較強(qiáng)的抗熱能力，不易殺死，因此滅菌效果，常以殺滅芽胞為準(zhǔn)。（應(yīng)區(qū)分滅菌、防腐、消毒的概念）2第二頁，共12頁。第一節(jié)物理滅菌法包括加熱、紫外照射、輻射、過濾等。一、干熱滅菌法：加熱可以破壞蛋白質(zhì)與核酸中的氫鍵，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性或凝固，核酸破壞，酶失去活性，使微生物死亡。

1、火焰滅菌法火焰直接燒灼滅菌——一般只適合耐火器材的滅菌；

2、干熱空氣滅菌法高溫干熱空氣滅菌，其滅菌溫度和時(shí)間各有不同規(guī)定，如180℃1小時(shí)或160-170℃2-4小時(shí)等。本法缺點(diǎn)是穿透力弱，溫度不均勻，滅菌溫度高、時(shí)間長，有局限性。3第三頁，共12頁。二、濕熱滅菌法：在飽和蒸汽或沸水或流通蒸汽中進(jìn)行滅菌的方法。濕熱滅菌法蒸汽比熱大，穿透力強(qiáng)，易使蛋白質(zhì)變性，滅菌可靠；包括：1、熱壓滅菌法壓力6.86×104-13.72×104Pa，溫度115℃-126.5℃，時(shí)間15min-30min，能殺死所有細(xì)菌繁殖體和芽胞。

操作時(shí)必須注意：①必須使用飽和蒸汽；②必須將滅菌器內(nèi)的空氣排除；③滅菌時(shí)間必須由全部藥物溫度真正達(dá)到所要求的溫度時(shí)算起；④滅菌完畢后停止加熱，必須使壓力逐漸降到0，才能放出鍋內(nèi)蒸汽，使鍋內(nèi)壓力與大氣壓相等后，稍稍打開滅菌鍋，待10-15min，再全部打開。（避免由于壓差、溫差過大而使物品沖出、玻璃瓶炸裂）4第四頁，共12頁。2、流通蒸汽滅菌法100℃流通蒸汽30-60min，有時(shí)要加抑菌劑，適于不耐高溫的品種。3、煮沸滅菌法通常煮30-60min，有時(shí)要加抑菌劑。4、低溫間歇滅菌法先于60-80℃加熱1小時(shí)，殺滅細(xì)菌繁殖體，然后放置溫室24小時(shí)，讓芽胞發(fā)育成繁殖體，再次加熱將其殺滅。耗時(shí)。5第五頁，共12頁。三、其它

紫外滅菌：利用紫外光線進(jìn)行空氣滅菌和表面滅菌。濾過滅菌：機(jī)械除菌---除菌濾過器，主要適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的物質(zhì)。如白陶土濾器、垂熔玻璃濾器、微孔濾膜等。微波滅菌：微波是指頻率大于300兆赫，波長小于1米，甚至小于1微米的高頻率振動(dòng)電磁波。輻射滅菌：電離輻射產(chǎn)生射線如鈷-60輻射。超聲波滅菌等。

如：單扉式滅菌箱、電熱隧道式無菌烘箱、隧道式滅菌烘箱6第六頁，共12頁。第二節(jié)F與F0值在滅菌中的意義與應(yīng)用F與F0值是驗(yàn)證滅菌可靠性的參數(shù)。一、D值與Z值1.D值研究表明，微生物在被殺滅的過程中，其殺滅速度符合一級(jí)過程，即：dN/dt=-kN或lgNt=lgN0-kt/2.303式中，N0為原有微生物數(shù)，Nt為滅菌時(shí)間t時(shí)殘存的微生物數(shù)，k為殺滅速度常數(shù)。lgNt對(duì)t作圖得一直線，斜率=-k/2.303=（lgNt-lgN0）/t，令：斜率的負(fù)倒數(shù)為D值，則D=2.303/k=t/（lgN0-lgNt），當(dāng)lgN0-lgNt=1時(shí)，D=t，

即D的物理意義為，在一定溫度下殺滅微生物90%或殘存率為10%時(shí)所需的滅菌時(shí)間。

7第七頁，共12頁。2.Z值滅菌條件不同，其滅菌速率也不同，當(dāng)溫度升高時(shí)，k增大，D值就減小，在一定溫度范圍內(nèi)（100-1380C）lgD與溫度T成直線關(guān)系，令Z=（T2-T1）/（lgD1-lgD2），或變?yōu)镈2/D1=10（T1-T2）/Z，

Z的物理意義是，Z值為降低一個(gè)lgD值所需升高的溫度數(shù)。設(shè)Z=100C，T1=1100CT2=1210C，則D2/D1=10-1=0.079，即1100C滅菌1min與1210C滅菌0.079min效果相當(dāng)。

8第八頁，共12頁。二、F與F0值1.F值首先F=Δt∑10（T-T0）/Z，Δt是測(cè)量被滅菌物料溫度的時(shí)間間隔，一般為0.5-1.0min，T則是每個(gè)Δt測(cè)得的被滅菌物料的溫度，T0是參比溫度。所以F的定義為在一定溫度T下，給定Z值所產(chǎn)生的滅菌效力與參比溫度T0給定Z值所產(chǎn)生的滅菌效力相當(dāng)時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間，單位是min（分鐘），常用于干熱滅菌。9第九頁，共12頁。2.F0值這是一個(gè)在滅菌周期設(shè)計(jì)和驗(yàn)證中廣泛應(yīng)用的術(shù)語，但目前只限于蒸汽滅菌。F0=Δt∑10（T-121）/10，T0=1210C，Z=100C，

∴F0的定義為在一定滅菌溫度T下，給定Z=100C，所產(chǎn)生的滅菌效力與1210C、Z=100C所產(chǎn)生的滅菌效力相當(dāng)時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間，也就是說，不管溫度如何變化，t分鐘內(nèi)的滅菌效果相當(dāng)于溫度在1210C下滅菌F0分鐘的效果。因此F0為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間。F0值的計(jì)算對(duì)于滅菌周期設(shè)計(jì)和驗(yàn)證極為有效，它將溫度與時(shí)間對(duì)滅菌的效果統(tǒng)一在F0值中。（將不同滅菌溫度計(jì)算到相當(dāng)于1210C濕熱滅菌時(shí)的滅菌效力。）

10第十頁，共12頁。二、無菌操作法無菌操作法是把整個(gè)過程控制在無菌條件下進(jìn)行的一種操作方法。無菌操作所用的一切用具、材料以及環(huán)境，均