傷寒桿菌感染模型微生物學(xué)與免疫學(xué)檢驗系列實驗文檔

傷寒桿菌感染模型微生物學(xué)與免疫學(xué)檢驗系列實驗文檔11.總體內(nèi)容講解2.傷寒桿菌感染模型建立

l

實驗分組：1只小鼠/人l

感染模型建立：灌胃接種傷寒桿菌培養(yǎng)液

2感染小鼠標(biāo)本采集與接種1.血液標(biāo)本：l

接種增菌培養(yǎng)基l

分離血清，置-20度保存（肥達試驗用）2.糞便標(biāo)本：接種分離培養(yǎng)基（SS平板）

3標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗11.血液標(biāo)本：l

觀察生長情況（混濁等現(xiàn)象）l

轉(zhuǎn)種普通平板（分區(qū)化線法）2.糞便標(biāo)本：挑選SS平板上可疑菌落

l

GS染色鏡檢l

KIA、IMViC接種l

純培養(yǎng)（普通平板、分區(qū)化線法）

4標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗21.血液標(biāo)本：挑取普通平板上菌落l

繼續(xù)觀察生長情況l

GS染色鏡檢l

KIA、IMViC接種2.糞便標(biāo)本：血清學(xué)玻片凝集試驗/最終鑒定

5標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗31.血液標(biāo)本：l

血清凝集/最終鑒定

6標(biāo)本的免疫學(xué)檢驗—肥達試驗第3周血清提前1天，另安排時間采集肥達試驗：第1周血清/第3周血清

71．肥達試驗結(jié)果觀察2．考核：完成并上交實驗報告

系列實驗內(nèi)容及其安排11.總體內(nèi)容講解2.傷寒桿菌感染模型建立

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實驗分組：1只小鼠/人l

感染模型建立：灌胃接種傷寒桿菌培養(yǎng)液

2感染小鼠標(biāo)本采集與接種1.血液標(biāo)本：l

接種增菌培養(yǎng)基l

分離血清，置-20度保存（肥達試驗用）2.糞便標(biāo)本：接種分離培養(yǎng)基（SS平板）

3標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗11.血液標(biāo)本：l

觀察生長情況（混濁等現(xiàn)象）l

轉(zhuǎn)種普通平板（分區(qū)化線法）2.糞便標(biāo)本：挑選SS平板上可疑菌落

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GS染色鏡檢l

KIA、IMViC接種l

純培養(yǎng)（普通平板、分區(qū)化線法）

4標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗21.血液標(biāo)本：挑取普通平板上菌落l

繼續(xù)觀察生長情況l

GS染色鏡檢l

KIA、IMViC接種2.糞便標(biāo)本：血清學(xué)玻片凝集試驗/最終鑒定

5標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗31.血液標(biāo)本：l

血清凝集/最終鑒定

6標(biāo)本的免疫學(xué)檢驗—肥達試驗第3周血清提前1天，另安排時間采集肥達試驗：第1周血清/第3周血清

71．肥達試驗結(jié)果觀察2．考核：完成并上交實驗報告

系列實驗內(nèi)容及其安排因病程不同采取不同標(biāo)本傷寒的微生物學(xué)和免疫學(xué)檢驗

微生物學(xué)檢驗免疫學(xué)檢驗

查抗體

查病原

第1周—血液 第1-3周—骨髓液第2周—取糞、尿液

動態(tài)—血液—血清傷寒的微生物學(xué)—血液標(biāo)本

血液標(biāo)本微生物學(xué)檢驗的基本原則

血液是無菌標(biāo)本：采集、運送、接種等全過程嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作增菌培養(yǎng)、純培養(yǎng)的培養(yǎng)基：不能使用選擇/抑制性培養(yǎng)基，而用營養(yǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定出任何細菌都要報告（排除污染菌）菌血癥是嚴(yán)重的臨床癥狀，要及時與臨床溝通、隨時報告檢驗進展（特別是藥物敏感試驗的初步報告）血液標(biāo)本的檢驗程序需氧培養(yǎng)傳統(tǒng)方法或自動血液培養(yǎng)儀指示有菌生長血液標(biāo)本（無菌采集）厭氧培養(yǎng)增菌培養(yǎng)直接涂片染色鏡檢需氧培養(yǎng)及CO2培養(yǎng)分離培養(yǎng)直接藥敏試驗厭氧培養(yǎng)挑選菌落純培養(yǎng)直接涂片染色鏡檢藥敏試驗血清學(xué)試驗生化反應(yīng)報告?zhèn)奈⑸飳W(xué)—糞便標(biāo)本

糞便標(biāo)本微生物學(xué)檢驗的基本原則

糞便是含正常菌群的標(biāo)本：注意接種標(biāo)本的選取分離培養(yǎng)、增菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基：使用強選擇/抑制性培養(yǎng)基糞便標(biāo)本微生物學(xué)檢驗的核心：可疑菌落的選擇糞便標(biāo)本SS瓊脂平板培養(yǎng)基糞便標(biāo)本的檢驗程序報告可疑菌落直接涂片染色鏡檢KIA、IMViC、MIU藥敏試驗血清學(xué)鑒定其他生化鑒定糞便標(biāo)本的檢驗程序SS瓊脂平板：

成分及其原理

基礎(chǔ)性成分：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂抑制性成分：硫代硫酸鈉、硫代硫酸鈉、煌綠、膽鹽等抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群生長鑒別性成分：乳糖—分解產(chǎn)酸；蛋白胨—產(chǎn)生硫化氫指示性成分：中性紅—酸堿指示劑—產(chǎn)酸變紅枸櫞酸鐵——指示硫化氫——FeS黑色沉淀膽鹽——膽酸—混濁菌落糞便標(biāo)本的檢驗程序SS瓊脂平板：

結(jié)果判斷SS平板分離培養(yǎng)SS平板純培養(yǎng)大腸桿菌：較大的紅色、渾濁的菌落傷寒桿菌：較小的半透明的淡黃色或無色菌落，部分菌落中心有黑色沉淀糞便標(biāo)本的檢驗程序KIA瓊脂斜面—雙糖鐵培養(yǎng)基：

成分及其原理

基礎(chǔ)性成分：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂鑒別性成分：葡萄糖(1g/L)—分解產(chǎn)酸；乳糖(10g/L)—分解產(chǎn)酸蛋白胨—產(chǎn)生硫化氫指示性成分：酚紅—酸堿指示劑—產(chǎn)酸變黃枸櫞酸鐵——指示硫化氫——FeS黑色沉淀原理分析：用于觀察細菌對糖的利用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖和葡萄糖的比例為10:1，只能利用葡萄糖的細菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。糞便標(biāo)本的檢驗程序SS瓊脂平板：

結(jié)果觀察與判斷斜面變黃—分解乳糖產(chǎn)酸底層變黃—分解葡萄糖產(chǎn)酸底層有氣泡—分解葡萄糖產(chǎn)氣底層變黑—產(chǎn)硫化氫

A/A++K/A--A/A+-K/A++K/A+-K/A++上此實驗結(jié)果分析

實驗內(nèi)容：l

感染模型建立：方法：經(jīng)口灌胃0.2mL的5×109CFU/L傷寒桿菌菌液。

實驗結(jié)果：l

共接種了27只小鼠當(dāng)場死亡6只飼養(yǎng)過程中又死亡9只

原因分析：

拿取固定小鼠方法不當(dāng)、導(dǎo)致當(dāng)場死亡灌胃方法不當(dāng)、導(dǎo)致當(dāng)場死亡或繼后死亡傷寒桿菌感染導(dǎo)致死亡上此實驗結(jié)果分析

應(yīng)對辦法：

同學(xué)們大多是首次進行實驗，老師已估計到會出現(xiàn)意外情況同學(xué)們現(xiàn)存12只感染小鼠—采集第1周糞便/血液—用于微生物學(xué)檢驗老師同時準(zhǔn)備了6只感染小鼠—采集第1周血清—用于肥達血清學(xué)試驗老師另外準(zhǔn)備了12只正常小鼠—同學(xué)們練習(xí)血液標(biāo)本的采集—

血清用于肥達血清學(xué)試驗——正常血清對照本此實驗內(nèi)容及其安排

糞便標(biāo)本的采集及接種—微生物學(xué)檢驗

刺激小鼠肛門、促使其排便3粒以上于無菌平皿無菌攝取3粒糞便于無菌1ml離心管，加無菌PBS

浸泡5-10分鐘，震蕩1分鐘；重復(fù)1次，制備糞便懸液取糞便懸液，接種SS平板，分區(qū)化線法涂布標(biāo)本置37℃溫箱培養(yǎng)每組一只感染模型小鼠本此實驗內(nèi)容及其安排

血清標(biāo)本的采集—免疫學(xué)檢驗

眼眶及毛細管采集法—示教采集血液于1ml離心管，5-10滴、大約置4℃冰箱過夜，次日分離血清每組一只正常小鼠、作為正常血清對照第1周感染模型小鼠血清由老師采集本此實驗內(nèi)容及其安排

血液標(biāo)本的采集—微生物學(xué)檢驗

眼眶及毛細管采集法—示教采集5滴血液直接滴入無菌的增菌肉湯培養(yǎng)基（2ml）置37℃溫箱進行增菌培養(yǎng)每組一只感染模型小鼠本此實驗內(nèi)容及其安排

注意事項：

傷寒桿菌是傳染性細菌，注意生物安全！小鼠的拿取與固定方法眼眶及毛細管采集法）“和而不同”，多元發(fā)展。近年來，中醫(yī)藥在防治非典、禽流感和艾滋病方面發(fā)揮的獨特作用也證實了二者的有機結(jié)合，具有肯定的臨床療效。編輯本段東西方醫(yī)學(xué)交融（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）不管是中醫(yī)學(xué)還是西醫(yī)學(xué)，從二者現(xiàn)有的思維方式的發(fā)展趨勢來看，均是走向現(xiàn)代系統(tǒng)論思維，中醫(yī)藥學(xué)理論與現(xiàn)代科學(xué)體系（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）之間具有系統(tǒng)同型性，屬于本質(zhì)相同而描述表達方式不同的兩種科學(xué)形式。可望在現(xiàn)代系統(tǒng)論思維上實現(xiàn)交融或統(tǒng)一，成為中西醫(yī)在新的發(fā)展水平上實現(xiàn)交融慢性胃炎分類慢性胃炎的命名很不統(tǒng)一。依據(jù)不同的診斷方法而有慢性淺表性胃炎、慢性糜爛性胃炎、慢性萎縮性胃炎、慢性膽汁返流性胃炎、慢性疣性胃炎、藥物性胃炎、乙醇性胃炎等等。．慢性胃炎大體可分為三種類型：慢性肥厚性胃炎、慢性淺表性胃炎以及慢性萎縮性胃炎。慢性肥厚性胃炎在臨床上較為少見，一般也不會發(fā)生癌變。慢性淺表性胃炎主要是指胃粘膜的淺表性炎癥，這類炎癥主要表現(xiàn)為胃粘膜的固有膜寬度增大并伴有水腫，被炎癥細胞浸潤，但胃腺體多屬正常．這類胃炎在臨床上較多見，一般也不會發(fā)生癌變。只要經(jīng)過恰當(dāng)治療之后，炎癥可消退，但如治療不當(dāng)，往往可發(fā)展成萎縮性慢性胃炎．慢性萎縮性胃炎是指胃粘膜除有淺表性胃炎病變外，胃腺體明顯減少，脈管間隙擴大，胃粘膜層有全層性細胞浸潤，常伴有腸上皮化生，即胃型上皮變?yōu)槟c型上皮．這種性質(zhì)的慢性胃炎與胃癌的關(guān)系密切，特別是有腸上皮化生者更是如此．或統(tǒng)一的支撐點，希冀籍此能給（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）中醫(yī)學(xué)以至生命科學(xué)帶來良好的發(fā)展機遇，進而對醫(yī)學(xué)理論帶來新的革命。在胃鏡問世以前，胃炎的主要診斷依據(jù)是依靠臨床癥狀和上消化道鋇餐檢查。隨著纖維胃鏡的臨床應(yīng)用，特別是經(jīng)胃鏡對胃粘膜的活組織檢查，對越來越多的胃炎有了較明確的認(rèn)識。1982年，國內(nèi)胃炎會議上根據(jù)國內(nèi)外經(jīng)驗，將慢性胃炎分為淺表性和萎縮性兩大類。而在淺表性胃炎的命名上，又常常使用病理、部位、形態(tài)等含義的詞，如“慢性疣狀胃炎”、“慢性出血性胃炎”、“慢性糜爛性胃炎”、“慢性膽汁反流性胃炎”等等。1990年8月，在澳大利亞悉尼召開的第九屆世界胃腸病學(xué)大會上，又提出了新的胃炎分類法，它由組織學(xué)和內(nèi)鏡兩部分組成，組織學(xué)以病變部位為核心，確定3種基本診斷：①急性胃炎；②慢性胃炎；③特殊類型胃炎。加上前綴病因?qū)W診斷和后綴形態(tài)學(xué)描述，并對炎癥、活動度、萎縮、腸化、幽門螺桿菌感染分別給予程度分級。內(nèi)鏡部分以肉眼所見描述為主，分別區(qū)分病變程度。

1．慢性糜爛性胃炎

內(nèi)鏡下常表現(xiàn)為多發(fā)性點狀或阿弗他潰瘍。慢性非糜爛性胃炎可為特發(fā)性，也可由藥物(特別是阿司匹林和非甾體類消炎藥，參見消化性潰瘍的治療部分)，克羅恩病或病毒感染所引起。幽門螺桿菌可能在此不發(fā)揮重要作用。癥狀多為非特異性的，可包括惡心，嘔吐和上腹部不適。內(nèi)鏡下顯示在增厚的皺襞隆起邊緣有點狀糜爛，中央有白斑或凹陷。組織學(xué)變化多樣。尚無某種方法具有廣泛療效或可治愈。治療多為對癥治療，藥物包括制酸劑，H2拮抗劑和質(zhì)子泵。

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