Illumina測序的原理和應(yīng)用

Illumina測序的原理和應(yīng)用

目前一頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點Illumina測序流程DataAnalysis

數(shù)據(jù)分析Sequencing

測序ClusterGeneration

簇生成LibraryPreparation

文庫制備測序流程目前二頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點AdapterandLibrary接頭和文庫接頭：與flowcell結(jié)合區(qū)Read1和Read2測序引物結(jié)合區(qū)Index

用來區(qū)分不同樣本目前三頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點Illumina測序流程DataAnalysis

數(shù)據(jù)分析Sequencing

測序ClusterGeneration

簇生成LibraryPreparation

文庫制備測序流程目前四頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點什么是flowcell？Flowcell即流動槽，如載玻片大小，有8個通道即8條lane。目前五頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點1.SingleDNAlibrariesarehybridizedtoprimerlawnandextendedbypolymerase目前六頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點2.Double-strandedmoleculeisdenaturedandoriginaltemplateiswashedaway目前七頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點3.Newsynthesizedstrandiscovalentlyattachedtoflowcellsurfacetoformabridgeandextendedbypolymerase4.Double-strandbridgeisformed目前八頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點5.Double-strandbridgeisdenaturedandformtwocopiesofcovalentlyboundsingle-strandedtemplates6.Bridgeamplificationcyclerepeat目前九頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點MultiplebridgesareformeddsDNAbridgesaredenaturedandreversestrandsarecleaved目前十頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點9.Cleaved

reversestrandsarewashedawayandleavingaclusterwithforwardstrandsonly在Illumina的測序過程中，無論是單端測序還是雙端測序，都會用到特異選擇性鏈切斷的過程。其中單端測序的要切斷1次，雙端測序中的兩條鏈要先后各切斷1次（共2次）。單端測序：高碘酸希夫反應(yīng)。雙端測序：Illumina巧妙地利用了“甲酰胺基嘧啶糖苷酶（Fpg）”對“8-氧鳥嘌吟糖苷（8-oxo-G）”的選擇性切斷作用。目前十一頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點Illumina測序流程DataAnalysis

數(shù)據(jù)分析Sequencing

測序ClusterGeneration

簇生成LibraryPreparation

文庫制備測序流程目前十二頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點Hiseq2500Twoflowcell目前十三頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點10.

Sequencingprimerishybridizedtoadaptersequence測序引物3‘端5‘端目前十四頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點11.Onlyonenucleotideisaddedeverycycleasthe3’endisblocked目前十五頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點12.Cleavethefluorandfreethe3’endthenrepeatabovestepsfornextcycle目前十六頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點13.Sequencedstrandisstrippedoffandtheindexprimerisaddedfortoseqindex3‘端5‘端Indexprimer目前十七頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點14.Repeatbridgeamplificationtoformreversestrandafterindexsequencing15.Sequencingthereversestrands

目前十八頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點高通量測序的應(yīng)用DNA水平RNA水平基因組denovo、重測序外顯子捕獲測序DNA甲基化測序Chip-Seq16s、宏基因組轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)字表達譜DGESmallRNAlncRNA目前十九頁\總數(shù)二十一頁\編于十四點高通量測序的應(yīng)用RNADNAProte