呼吸道九聯(lián)檢技術(shù)手冊參考分享

一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原體感染人體的鼻腔、咽喉、氣管和支氣管等呼吸系統(tǒng)。分為上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常見的是急性上呼吸道感染（ acuteupperrespirtract infection ），指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱，是呼吸道最常見的一種傳染病。常見病因?yàn)椴《荆贁?shù)由細(xì)菌引起?；颊卟环帜挲g、性別、職業(yè)和地區(qū)。不僅具有較強(qiáng)的傳染性，而且可引起嚴(yán)重并發(fā)癥。下呼吸道感染是最常見的感染性疾患，包括急性氣管——支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎、支氣管擴(kuò)張等，由病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌等微生物引起，其防治應(yīng)遵循預(yù)防為主、準(zhǔn)確診斷、及時治療的原則，治療時必須明確引起感染的病原體以選擇有效的抗生素。十五、 非典型呼吸道病原體已報道的非典型呼吸道病原體有很多， 最常見的有嗜肺軍團(tuán)菌、 肺炎支原體、肺炎衣原體、Q熱立克次體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。嗜肺軍團(tuán)菌嗜肺軍團(tuán)菌(Legionella pneumophila, LP)是一種兼性細(xì)胞內(nèi)致病菌 ，有鞭毛，革蘭氏陰性，軍團(tuán)菌科軍團(tuán)菌屬多形態(tài)性的短小球桿菌。其不抗酸，無孢子，無莢膜，類似于桿菌。不能分解明膠、糖類或是尿素，同時，不可參加酵解反應(yīng)。嗜肺軍團(tuán)菌無色，也非自身熒光，氧化酶與過氧化氫酶測試陽性，β-內(nèi)酰胺酶陽性。專性需氧，在自然界可長期存活，如在蒸餾水中可存活100d以上，污水中可存活一年，對熱和一般消毒劑敏感。菌落特征為灰白色，有光澤，濕潤，圓形，凸起，并有特殊臭味，革蘭氏染色不明顯，多用鍍銀法或Giemsa法染色。廣泛分布于天然淡水環(huán)境或人工水域中，在阿米巴體內(nèi)寄生，亦可感染人巨噬細(xì)胞，在其胞內(nèi)繁殖和殺死人巨噬細(xì)胞，是引起軍團(tuán)菌?。ㄜ妶F(tuán)菌肺炎）的重要病原體。軍團(tuán)菌病在國內(nèi)外時有爆發(fā)流行，中央空調(diào)冷凝塔水系統(tǒng)是引起軍團(tuán)菌病的主要傳染源，病死率較高。目前已知軍團(tuán)菌有48個種70多個血清型，其中嗜肺軍團(tuán)菌有15個血清型，血清型-1是引起社區(qū)獲得性肺炎和院內(nèi)感染性肺炎的重要病原體。通常軍團(tuán)病的爆發(fā)時間是在仲夏和初秋，易發(fā)生在封閉式中央空調(diào)房間里。軍團(tuán)菌的易感人群通常為老年人、吸煙者和有慢性肺部疾患者；同時，免疫功能低下，如癌癥病人、腎透析病人和艾滋病人也特別易感。它的 癥狀類似于肺炎，表現(xiàn)為發(fā)冷、不適、肌痛、頭暈、頭痛，并有煩躁、呼吸困難、胸痛。９０％以上的患者體溫迅速上升，咳嗽并伴有粘痰， 偶爾出現(xiàn)伴有腹瀉嘔吐的胃腸道紊亂， 重癥病人可發(fā)生肝功能變化及腎衰竭。 由于其非典型癥狀， 其診斷主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷。肺炎支原體肺炎支原體，曾名為類胸膜肺炎微生物 (PPLO)，是介于病毒與細(xì)菌之間的一種沒有細(xì)胞壁的病原體，可通過細(xì)菌濾器，在瓊脂培養(yǎng)基中生長時，需要含膽固醇的酵母浸出液及20%馬血清，其菌落很小，很少超過0.5mm，肉眼不易觀察，在顯微鏡下菌落呈圓形均勻的顆粒狀，外圍有透明帶，MP呈球形，桿狀和絲狀等多種形態(tài)，僅有由三層膜組成的胞漿膜，革蘭染色呈陰性，胞質(zhì)內(nèi)含核糖體和雙股DNA，在有氧或無氧條件下生長較其他支原體為慢，接種后5～10天才能見到，能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生乳酸，能產(chǎn)生過氧化酶類溶血素。肺炎支原體對呼吸道上皮細(xì)胞有特殊的親和力，對青霉素耐藥，對紅霉素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素極為敏感。肺炎支原體感染主要通過呼吸道飛沫傳播，平時多為散發(fā)病例，全年均可發(fā)病，以冬季較多。約每隔3～7年發(fā)生一次地區(qū)性流行。學(xué)齡兒童患病較多，學(xué)齡前兒童包括嬰幼兒也可發(fā)生肺炎支原體感染。其發(fā)病機(jī)制主要由于支原體穿過宿主呼吸道黏膜表面的黏液纖毛層，黏附于黏膜上皮細(xì)胞上，此黏附作用與肺炎支原體表面的P1蛋白的末端結(jié)構(gòu)有關(guān)，當(dāng)此黏附因子附著于呼吸道黏膜上皮細(xì)胞時，釋放的有毒代謝產(chǎn)物可導(dǎo)致纖毛運(yùn)動減弱，細(xì)胞損傷。其病癥主要為支氣管炎，毛細(xì)支氣管炎及間質(zhì)性肺炎，管壁水腫，增厚，有浸潤斑，支氣管及細(xì)支氣管內(nèi)有黏液甚至膿性分泌物，鏡下所示為急性細(xì)支氣管炎伴有間質(zhì)性肺炎，肺泡內(nèi)可見有少量水腫液及巨噬細(xì)胞，細(xì)支氣管壁有水腫，充血以及單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)可見到中性粒細(xì)胞，脫落上皮細(xì)胞及細(xì)胞殘片，附近的肺泡間隔內(nèi)有淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，重癥可見彌漫性肺泡壞死和透明膜病變。要確診是否為肺炎支原體感染，要到醫(yī)院去檢測血中肺炎支原體抗體，特異性IgM、IgG抗體檢測和聚合酶鏈反應(yīng)檢測是目前公認(rèn)的確診標(biāo)準(zhǔn)之一，抗體滴定度>1:40（+）是診斷肺炎支原體感染的客觀證據(jù)。Q熱立克次體Q熱立克次體，又名伯納特立克次體， 是介于最小細(xì)菌和病毒之間的一類獨(dú)特的微生物，是一類嚴(yán)格的活細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型微生物。 它的許多生物學(xué)性狀接近細(xì)菌， 具有濾過性，多在宿主細(xì)胞空泡內(nèi)繁殖， 不含有與變形桿菌 X株起交叉反應(yīng)的 X凝集原，對實(shí)驗(yàn)室動物一般不顯急性中毒反應(yīng)，對理化因素抵抗力強(qiáng)。在干燥沙土中 4～6℃可存活 7～9個月，-56℃能活數(shù)年，加熱60～70℃30～60分鐘才能滅活。抗原分為二相。初次從動物或壁虱分離的立克次體具Ⅰ相抗原（表面抗原，毒力抗原）；經(jīng)雞胚卵黃囊多次傳代后成為Ⅱ相抗原（毒力減低），但經(jīng)動物或蜱傳代后又可逆轉(zhuǎn)為Ⅰ相抗原。兩相抗原在補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、吞噬試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)及免疫熒光試驗(yàn)的反應(yīng)性均有差別。家畜是主要傳染源，如牛、羊、馬、騾、犬等，次為野嚙齒動物，飛禽（鴿、鵝、火雞等）及爬蟲類動物。有些地區(qū)家畜感染率為20～80%，受染動物外觀健康，而分泌物、排泄物以及胎盤、羊水中均含有Q熱立克次體?；颊咄ǔ２⒎莻魅驹矗∪搜?、痰中均可分離出Q熱立克次體。其傳播途徑多樣，可通過呼吸道傳播、接觸傳播、消化道傳播，其中呼吸道傳播，Q熱立克次體隨動物尿糞、羊水等排泄物以及蜱糞便污染塵?；蛐纬蓺馊苣z進(jìn)入呼吸道致病。Q熱立克次體普遍易感，特別是屠宰場肉品加工廠、牛奶廠、各種畜牧業(yè)、制革皮毛工作者受染機(jī)率較高，受染后不一定發(fā)病，血清學(xué)調(diào)查證明隱性感染率可達(dá)0.5～3.5%。病后免疫力持久。其流行行分布全世界，多見于男性青壯年，我國吉林、四川、云南、新疆、西藏、廣西、福建、貴州等十幾個省市、自治區(qū)均有本病流行。其潛伏期12～39天，平均18天。起病大多急驟，少數(shù)較緩。突然發(fā)作，伴發(fā)熱，劇烈頭痛，寒顫，嚴(yán)重乏力，肌痛，且常有胸痛.體溫可升至40℃持續(xù)1～3周.與其他立克次體病不同，Q熱無皮膚出疹.在發(fā)病第2周，有干咳，X線顯示有肺炎.在嚴(yán)重病例，常發(fā)生大葉實(shí)變，肺的大體影像類似細(xì)菌性肺炎.Q熱肺炎組織學(xué)變化相似于鸚鵡熱和某些病毒性肺炎，小支氣管和血管及鄰近肺泡壁有嚴(yán)重的間質(zhì)浸潤，且多漿細(xì)胞.小支氣管腔可能含多形核白細(xì)胞，肺泡內(nèi)層細(xì)胞腫脹，肺泡內(nèi)出現(xiàn)脫落的內(nèi)層細(xì)胞和大的單核細(xì)胞.約1/3病程拖延的Q熱病人會發(fā)生肝炎，特點(diǎn)為發(fā)熱，乏力，肝腫大伴右上腹疼痛及黃膽.肝活檢標(biāo)本顯示彌散的肉芽腫變化，免疫熒光可檢出Q熱立克次體.頭痛和呼吸道癥狀常常缺如，但在老年人或體弱者大葉性肺炎可能特別嚴(yán)重.重型慢性Q熱常有慢性肝炎和心內(nèi)膜炎.慢性Q熱肝炎必須與其他肝肉芽腫相區(qū)別(如結(jié)核，肉瘤，組織漿胞菌病，布氏菌病，兔熱病和梅毒).Q熱立克次體引起的心內(nèi)膜炎嚴(yán)重但不常見，臨床上類似亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎但更多累及主動脈瓣.常規(guī)血培養(yǎng)陰性，Q熱很少致死(未治療者為1%，治療者更低).其診斷多為臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查相結(jié)合。肺炎衣原體肺炎衣原體是一種比細(xì)菌小但比病毒大的生物，具有兩相生活環(huán)。即具有感染性的原體（elementary body，EB）和無感染性的始體（initial body, 亦稱網(wǎng)狀體reticulatebody,RB ）。EB顆粒呈球形，小而致密，直徑 0.2~0.4μm,普通光學(xué)顯微鏡下勉強(qiáng)可見； EB是發(fā)育成熟了的衣原體，主要存在細(xì)胞外。 RB是衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)發(fā)育周期的幼稚階段，是繁殖型，不具感染性。衣原體是專性細(xì)胞內(nèi)寄生的、近似細(xì)菌與病毒的病原體，屬于衣原體目（ Chlamydiales ）、衣原體科 (Chlamydiaceae ，僅有一個科）、衣原體屬（ Chlamydia ），有四個種。其具有脫氧核糖核酸和 RNA 兩種核酸，二分裂增殖，有核糖體和近似細(xì)胞壁的膜；細(xì)胞內(nèi)寄生，完全依賴宿主細(xì)胞供應(yīng)能量（因缺乏 ATP 酶）；其生活周期分為細(xì)胞外期（即具有感染性的原始小體）和細(xì)胞內(nèi)期（即增殖性的網(wǎng)狀小體）兩個時期；用 Giemsa 或熒光抗體染色可在細(xì)胞核附近原漿查見衣原體包涵體； 衣原體基因組的 Mr為660×10６,比除支原體外的任何原核生物都小。肺炎衣原體常在兒童和成人中產(chǎn)生上呼吸道和呼吸道感染。現(xiàn)僅知人是該衣原體宿主，感染方式可能為人與人之間通過呼吸道分泌物傳播。 5歲以下兒童極少受染 ，8歲以上兒童及青年易被感染，尤其是人群聚集處，如家庭、學(xué)校、兵營中易于流行。經(jīng)血清流行病學(xué)調(diào)查，證實(shí)成人中至少有 40%已受到該衣原體感染，大部分為亞臨床型。老年人可再次受到感染。其無特異性臨床表現(xiàn)， 早期多為上感癥狀，咽痛、聲音嘶啞，呼吸系統(tǒng)最多見的癥狀是咳嗽， 1—2周后上感癥狀逐漸消退而咳嗽逐漸加重 ，并出現(xiàn)下呼吸道感染征象，如未經(jīng)有效治療，則咳嗽可持續(xù) 1—2個月或更長，肺部偶聞及干、濕羅音或喘鳴音。由于其非典型癥狀，其診斷主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷。腺病毒腺病毒是一種無外殼的雙鏈DNA病毒，基因組長約36kb，衣殼（capsid）呈規(guī)則的20面體結(jié)構(gòu)，直徑約80-110nm。自上個世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)并成功分離腺病毒以來，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了100余個血清型，其中人腺病毒有47種，分為A、B、C、D、E和F六個亞群（subgroup），其很多與人類上、下呼吸道感染密切有關(guān)。腺病毒主要在細(xì)胞核內(nèi)繁殖，耐溫、耐酸、耐脂溶劑的能力較強(qiáng)，除了咽、結(jié)合膜及淋巴組織外，還在腸道繁殖。1958年以來我國各地相繼證實(shí)，腺病毒除引起上呼吸道感染外，還可引致小兒肺炎，多見于6個月至2歲的嬰幼兒腺病毒肺炎最為危重，尤以北方各省多見，病情嚴(yán)重者也較南方為多。華北，東北及西北于1958年冬及1963年冬有較大規(guī)模的腺病毒肺炎流行，病情極其嚴(yán)重。腺病毒一般通過呼吸道傳染，在集體兒童機(jī)構(gòu)中往往同時發(fā)生腺病毒上呼吸道感染及肺炎。人群血清學(xué)研究說明，生后最初數(shù)月常存留從母體傳遞的腺病毒特異抗體，此后一直到2歲抗體缺乏，2歲以后才逐漸增加。這與腺病毒肺炎80%發(fā)生在7～24月嬰幼兒的臨床觀察完全符合，各年齡組易感人群數(shù)量越多， 發(fā)生腺病毒呼吸道感染的人數(shù)就多， 而嬰幼兒發(fā)生腺病毒肺炎的機(jī)會也越大，腺病毒肺炎在我國北方多見于冬春兩季，夏、 秋季僅偶見，在廣州的高流行年則多見于秋季。這類肺炎在北京約占病毒性肺炎的 20%～30%。其癥狀主要表現(xiàn)為病灶性或融合性壞死性肺浸潤和支氣管炎， 起病時潛伏期 3～8天，一般急驟發(fā)熱，往往自第 1～2日起即發(fā)生39℃以上的高熱，至第 3～4日多呈稽留或不規(guī)則的高熱； 3/5以上的病病例最高體溫超過 40℃。另外其在呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)也都有癥狀顯現(xiàn)。其診斷可根據(jù)臨床和實(shí)驗(yàn)室結(jié)合 。呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是RNA病毒，屬于副粘液病毒屬，按血清學(xué)確認(rèn)有兩種亞型(A和B)。在生物學(xué)表現(xiàn)方面呼吸道合胞病毒比其他病毒更接近于流感和副流感病毒，但在血清學(xué)和其他方面(例如不能在雞蛋中生長及產(chǎn)生血凝素)可與之進(jìn)行鑒別。它是嬰幼兒下呼吸道感染(包括毛細(xì)支氣管炎和肺炎)最重要的病因之一，可能是致命性的；在健康成人和年長兒，呼吸道合胞病毒僅引起輕癥呼吸道感染，但也可引起支氣管肺炎和慢性支氣管炎，致使病情加劇。老年人和那些原有肺部疾病患者對呼吸道合胞病毒特別易感。其流行于每年的冬季或早春，成為流行很廣的急性呼吸道疾病，能使支氣管炎和肺炎的發(fā)病率和病死率上升。呼吸道合胞病毒亞型每年反復(fù)流行表明，病人可反復(fù)感染得病。雖然在5歲兒童中有70%存在血清抗呼吸道合胞病毒的抗體，但感染仍可不斷發(fā)生于任何年齡。血清抗體抗感染作用不很明顯的典型例子可見于6個月以下的嬰兒，這類小兒的支氣管，肺均未發(fā)育成熟；雖然這些嬰兒具有母親的抗體，但仍能發(fā)生嚴(yán)重的下呼吸道疾病，導(dǎo)致病死數(shù)明顯上升。其感染癥狀差異很大。一般說來，與年齡，以前接觸呼吸道合胞病毒和潛在疾病(尤其是呼吸道疾病)有關(guān)。臨床體征沒有什么特殊，呼吸困難，咳嗽，喘鳴是最突出的癥狀，通常出現(xiàn)在上呼吸道體征后的數(shù)日之內(nèi)。嬰幼兒常伴發(fā)熱，氣急可見于嬰兒中，并可在其他癥狀和體征以前最早出現(xiàn)。X線胸片常顯示明顯的支氣管肺炎和/或毛細(xì)支氣管炎表現(xiàn)。白細(xì)胞計數(shù)正常也可能增高，但中性粒細(xì)胞可能中度升高。在成人和年長兒，感染可能不明顯或僅表現(xiàn)為無熱性上呼吸道感染(普通感冒)，呼吸道合胞病毒感染還非常像流感。因慢性支氣管炎急性惡化而住院者中有15%是合胞病毒感染。由于其非典型癥狀，其診斷主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷，另外由于呼吸道合胞病毒不耐冰凍和凍融，除非通過特殊的培養(yǎng)基保護(hù)，標(biāo)本很難貯存或遠(yuǎn)距離運(yùn)送。流感病毒流行性感冒病毒，簡稱流感病毒，是一種造成人類及動物患流行性感冒的 RNA病毒，呈球形，新分離的毒株則多呈絲狀，其直徑在 80至120納米之間，絲狀流感病毒的長度可達(dá) 400納米。其病毒結(jié)構(gòu)自外而內(nèi)可分為包膜、 基質(zhì)蛋白以及核心三部分，其傳染性強(qiáng)，傳播速度快。在分類學(xué)上，流感病毒屬于正黏液病毒科，它會造成急性上呼吸道感染，并借由空氣迅速的傳播，在世界各地常會有周期性的大流行，一年四季人都可能受到流感病毒的攻擊，但冬季是一個高發(fā)季節(jié)。流行性感冒病毒對免疫力較弱的老人或小孩及一些免疫失調(diào)的病人會引起較嚴(yán)重的癥狀， 如肺炎或是心肺衰竭等根據(jù)流感病毒感染的對象，可以將病毒分為人類流感病毒、豬流感病毒、馬流感病毒以及禽流感病毒等類群，其中人類流感病毒根據(jù)其核蛋白的抗原性可以分為三類:甲型流感病毒（InfluenzaAvirus），又稱A型流感病毒，乙型流感病毒（InfluenzaBvirus），又稱B型流感病毒，丙型流感病毒（InfluenzaCvirus），又稱C型流感病毒，在核蛋白抗原性的基礎(chǔ)上，流感病毒還根據(jù)血凝素和神經(jīng)氨酸酶的抗原性分為不同的亞型。在感染人類的三種流感病毒中，甲型流感病毒有著極強(qiáng)的變異性，乙型次之，而丙型流感病毒的抗原性非常穩(wěn)定。乙型流感病毒的變異會產(chǎn)生新的主流毒株，但是新毒株與舊毒株之間存在交叉免疫，即針對舊毒株的免疫反應(yīng)對新毒株依然有效。流感病毒侵襲的目標(biāo)是呼吸道粘膜上皮細(xì)胞，它會引起宿主細(xì)胞變性、壞死乃至脫落，造成粘膜充血、水腫和分泌物增加，從而產(chǎn)生鼻塞、流涕、咽喉疼痛、干咳以及其它上呼吸道感染癥狀，當(dāng)病毒蔓延至下呼吸道，則可能引起毛細(xì)支氣管炎和間質(zhì)性肺炎。偶有侵襲腸粘膜的病例，則會引起胃腸型流感。另外，病毒感染還會誘導(dǎo)干擾素的表達(dá)和細(xì)胞免疫調(diào)理，造成一些自身免疫反應(yīng)，包括高熱、頭痛、腓腸肌及全身肌肉疼痛等，病毒代謝的毒素樣產(chǎn)物以及細(xì)胞壞死釋放產(chǎn)物也會造成和加劇上述反應(yīng)。由于流感病毒感染會降低呼吸道粘膜上皮細(xì)胞清除和黏附異物的能力，所以大大降低了人體抵御呼吸道感染的能力，因此流感經(jīng)常會造成繼發(fā)性感染，由流感造成的繼發(fā)性肺炎是流感致死的主要死因之一。早期與傳染性非典型肺炎的鑒別診斷困難。副流感病毒人類副流感病毒 (HPIVs) 是常常引起兒童下呼吸道感染的一種病毒，其致病性僅次于呼吸道合胞病毒 ，它是單鏈的 RNA 病毒，病毒表面含有溶合酶和紅血球凝聚素—神經(jīng)氨酸苷酶的糖蛋白質(zhì)。從血清學(xué)上人類副流感病毒可分為 4型（1型到4型），其中4型又分a和b兩個亞型。病毒顆粒大小不一（平均直徑大小在150納米～300納米之間），形態(tài)各異。在外環(huán)境下不穩(wěn)定，在物體表面存活幾個小時，肥皂水就很容易使其失去活性。當(dāng)有傳染性的物質(zhì)接觸了人的眼睛、口腔或鼻子里的粘膜后就會發(fā)生感染，或通過吸入由于噴嚏和咳嗽產(chǎn)生的呼吸道分泌物的飛沫而感染。人類副流感病毒可以在這種懸浮狀態(tài)下存活一個小時以上。副流感病毒感染全年均可發(fā)生(尤其是第3型)。第1和第3型副流感病毒感染常見于幼兒，局部流行發(fā)生于托兒所，兒科病房，小學(xué)及其他兒童場所。第3型為地方性流行，傳染性強(qiáng)，四季均可發(fā)生，多數(shù)兒童1歲內(nèi)可感染。由副流感病毒1型或2型引起的流行性疾病有每年均可發(fā)生并交替占主導(dǎo)地位的傾向。第2型引起的疾病更趨于散發(fā)。第1，2，3型可在秋季流行。第4型引起輕度呼吸道疾?。辉诔扇酥袔缀跗毡榇嬖诘拿庖吡蓽p輕疾病的嚴(yán)重程度并阻止副流感病毒的傳播。然而，同一型副流感病毒，尤其是第1型和第3型，可引起第2次甚至第3次感染。與呼吸道合胞病毒(RSV)一樣，人類副流感病毒可以造成反復(fù)發(fā)作的上呼吸道感染（如感冒和喉嚨痛）。它也能造成嚴(yán)重的反復(fù)感染的下呼吸道疾?。ㄈ绶窝祝夤苎缀图?xì)支氣管炎），特別是在老年人中和有免疫缺陷人群中。人類副流感病毒的四種亞型各有不同的臨床和流行病學(xué)特征。1型和2型的最典型的臨床特征是造成兒童喉氣管支氣管炎，1型是這種兒童喉氣管支氣管炎的主要原因，而2型次之。1型和2型均能造成其它的上呼吸道和下呼吸道疾病。3型經(jīng)常導(dǎo)致肺炎和細(xì)支氣管炎。4型很難檢出，可能是因?yàn)樗苌賹?dǎo)致嚴(yán)重的疾病。人類副流感病毒的潛伏期一般在1～7天左右。其主要通過實(shí)驗(yàn)室檢測來診斷，臨床上無法作出副流感的特異性診斷。需要時，病毒的分離和鑒定可通過組織培養(yǎng)接種；應(yīng)用免疫和分子生物學(xué)技術(shù)可檢測呼吸道受感染細(xì)胞中的病毒抗原。用急性期和恢復(fù)期血清作CF(補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn))，HI(血凝集抑制反應(yīng))和中和試驗(yàn)可證實(shí)副流感病毒感染，但如果不作病毒分離，由于血清學(xué)的交叉反應(yīng)，就難以鑒定特異的病毒型。十六、 非典型呼吸道病原體的實(shí)驗(yàn)室檢查方法非典型呼吸道病原體因其臨床的非特異性癥狀，大部分依靠實(shí)驗(yàn)室檢查方法，而檢測方法多種多樣，主要的方法有 :細(xì)菌的病原體分離培養(yǎng)及病毒的培養(yǎng)組織細(xì)胞培養(yǎng)法，血清學(xué)和直接檢測法 (包括電鏡法 )；間接、直接免疫熒光抗體法 (IFA/DFA); 酶免疫測定 (EIA)、核酸擴(kuò)增法 (PCR)。常用的實(shí)驗(yàn)室檢測方法有：1. 病原分離培養(yǎng)分離前對感染病原的種類應(yīng)有所估計，以便選擇適當(dāng)?shù)姆椒?。收集?biāo)本時可用鼻洗液、咽漱液、咽拭子、鼻拭子、痰、血、穿刺標(biāo)本和尸檢材料等。標(biāo)本以床邊接種為宜，或?qū)?biāo)本置于冰壺內(nèi)送交化驗(yàn)室，選定合適的培養(yǎng)基或細(xì)胞，在2～3小時內(nèi)接種培養(yǎng)。分子生物學(xué)方法通過特定的 DNA 引物擴(kuò)增檢測病原體的特異性 DNA,具有特異性強(qiáng) ,敏感性高等優(yōu)點(diǎn)，適用于多種病原體的檢測。3. 血清學(xué)檢測本方法是通過患者血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原或由患者分離的新病原作抗原來進(jìn)行的。常用的方法有：1）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：可用于各種呼吸道病原感染或需要鑒別的其他病原體感染。2）血凝擬制試驗(yàn)：本試驗(yàn)需要病毒較多，要先除去非特異的紅細(xì)胞擬制物質(zhì)。常用于流感、副流感、腸道病毒、 ECHO病毒、腺病毒等。3）中和試驗(yàn)：針對不同的病毒，選取相應(yīng)的敏感動物，雞胚或組織培養(yǎng)，鼻病毒和其他一些病毒感染的診斷，均常用此法。4）間接（被動）血凝試驗(yàn)：可用于多種呼吸道病原體感染。5）酶聯(lián)免疫法或免疫熒光法： 可通過檢測抗原或者抗體而檢測多種呼吸道感染病原體。盡管呼吸道病原的檢測方法多種多樣，但確診感染病原仍非常困難。細(xì)菌的病原體分離培養(yǎng)及病毒的培養(yǎng)組織細(xì)胞培養(yǎng)法過去常作為 “金標(biāo)準(zhǔn)”，但因其操作復(fù)雜、培養(yǎng)時間長、技術(shù)難度大、 陽性率低等缺點(diǎn)而很難實(shí)現(xiàn)， 近10 年已被分子方法所取代。隨著快速診斷技術(shù)的迅速發(fā)展，分子檢測技術(shù)愈趨完善，已經(jīng)被作為呼吸道病原體檢測的新標(biāo)準(zhǔn)，但因其對實(shí)驗(yàn)室條件要求高而無法普及，而且商品化的產(chǎn)品較少，未形成系列，多數(shù)病原尚不能檢測。近年來由于免疫技術(shù)的發(fā)展，特別是免疫標(biāo)記技術(shù)的廣泛應(yīng)用，如直接、間接免疫熒光法、抗堿性磷酸酶橋聯(lián)酶標(biāo)法等標(biāo)記技術(shù)，檢測方便，快速且成本低廉適，適合于臨床要求，因此在臨床上有重要意義。但像肺炎這樣難以診斷的臨床病例，應(yīng)該使用不同的診斷方法同時檢測， 以獲得最佳的診斷結(jié)果， 每種方法都是對其它診斷方法的一種證實(shí)和有效的確認(rèn)，各種方法之間應(yīng)該是一種互補(bǔ)的關(guān)系。十七、 免疫熒光法介紹免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。Coons等于1941年首次采用熒光素進(jìn)行標(biāo)記而獲得成功。這種以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體而進(jìn)行抗原定位的技術(shù)稱為熒光抗體技術(shù)（fluorescentantibodytechnique）。用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù)，因?yàn)闊晒馍夭坏芘c抗體球蛋白結(jié)合，用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，用于檢測或定位抗體，但是在實(shí)際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用，所以人們習(xí)慣稱為熒光抗體技術(shù)，或稱為免疫熒光技術(shù)。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)技術(shù)。熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同，還可進(jìn)一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染，并且大多操作簡便，便于推廣。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。主要缺點(diǎn)是：非特異性染色問題尚未完全解決，結(jié)果判定的客觀性不足，技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。但近年來發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測定，已經(jīng)很好改善了這些缺點(diǎn)，與酶免疫測定和放射免疫分析一樣，應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)中。1．原理免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原 -抗體反應(yīng)。 由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性， 所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。其根據(jù)反應(yīng)體系的不同可分為： 直接法：將標(biāo)記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定的溫度和時間的染色， 用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體， 室溫下干燥后封片、 鏡檢。間接法：如檢查未知抗原，先用已知未標(biāo)記的特異抗體（第一抗體）與抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)，用水洗去未反應(yīng)的抗體，再用標(biāo)記的抗抗體（第二抗體）與抗原標(biāo)本反應(yīng)，使之形成抗原—抗體—抗體復(fù)合物， 再用水洗去未反應(yīng)的標(biāo)記抗體， 干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體，則表明抗原標(biāo)本是已知的，待檢血清為第一抗體，其它步驟的抗原檢查相同。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后定量方法的不同可分為： 熒光抗體技術(shù) (熒光顯微鏡技術(shù))：抗原抗體反應(yīng)后，利用熒光顯微鏡判定結(jié)果的檢測方法。 免疫熒光測定技術(shù)：抗原抗體反應(yīng)后，利用特殊儀器測定熒光強(qiáng)度而推算被測物濃度的檢測方法。2.熒光物質(zhì)許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。 常用的熒光色素有：1）異硫氰酸熒光素 （fluoresceinisothiocyanate ，F(xiàn)ITC）：為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為 389.4，最大吸收光波長為 490～495nm，最大發(fā)射光波長 520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，有兩種同分異結(jié)構(gòu)，其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方面都更好，在冷暗干燥處可保存多年，是應(yīng)用最廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點(diǎn)是：①人眼對黃綠色較為敏感，②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。2）四乙基羅丹明 （rhodamine ，RIB200）：為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定，可長期保存。最大吸收光波長為 570nm，最大發(fā)射光波長為595～600nm，呈橘紅色熒光。3）四甲基異硫氰酸羅丹明 （tetramethylrhodamineisothiocyanate ，TRITC）：最大吸引光波長為 550nm，最大發(fā)射光波長為 620nm，呈橙紅色熒光。與 FITC 的翠綠色熒光對比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合，但熒光效率較低。3.熒光顯微鏡熒光顯微鏡是本試劑盒結(jié)果觀察需要用到的唯一設(shè)備， 根據(jù)生產(chǎn)商提供的說明書使用顯微鏡，選擇合適的濾色塊觀察結(jié)果。3.1熒光顯微鏡的使用方法3.1.1準(zhǔn)備工作顯微鏡初次使用，準(zhǔn)備工作必不可少，具體步驟如下：1）打開開關(guān)。2）指示燈亮后，按下啟動按鈕 2-3秒后點(diǎn)燃汞燈。 注意：一般等 5分鐘后，即能進(jìn)行顯微鏡觀察工作，但汞燈光源至完全穩(wěn)定約需 15分鐘。除下物鏡轉(zhuǎn)換器上的一個物鏡，并在這位置上裝上對中工具，使對中工具進(jìn)入光路。旋松燈室固定螺桿，沿主體前后移動，至燈絲的像聚焦在對中工具窗上，旋緊固定螺桿。松開燈座套固定螺桿，轉(zhuǎn)動燈橫向?qū)χ新輻U和縱向?qū)χ协h(huán)，使燈絲像投至窗口中心。6）均勻松開縱向?qū)χ协h(huán)，使燈絲像偏離中心，旋轉(zhuǎn)后鏡鏡導(dǎo)桿，使反射出來的燈絲像，聚焦在這工具的對中窗上。7）轉(zhuǎn)動后鏡對中螺桿，使燈絲的反射像對稱。8）轉(zhuǎn)動燈絲縱向?qū)χ协h(huán)，使燈絲像和燈絲反射像疊和在對中工具窗上。3.1.2顯微鏡的操作在反射熒光裝置主機(jī)的濾色塊裝入口中，插入適合所采用激發(fā)方式的濾色塊。推進(jìn)激發(fā)方式轉(zhuǎn)換鈕，以使濾色塊進(jìn)入光路。點(diǎn)亮汞燈。檢查照明是否正確。將標(biāo)本放上載物臺，并將10×物鏡放入觀察位置，對標(biāo)本調(diào)整焦距。調(diào)整目鏡眼幅間距和視力。將需要的物鏡轉(zhuǎn)入位置再一次對標(biāo)本調(diào)焦。調(diào)節(jié)視場光闌。注意：把左右兩個激發(fā)方式轉(zhuǎn)換鈕都拉出，可進(jìn)行常規(guī)觀察。使用熒光顯微鏡的注意事項(xiàng)1）嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。2）應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，點(diǎn)燃超高壓汞燈 5～15min，待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后，眼睛完全適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。3）防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。4）檢查時間每次以 1～2h為宜，超過 90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射 3～5min后，熒光也明顯減弱；所以，最多不得超過 2～3h。5）熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護(hù)光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。6）標(biāo)本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中 4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。7）熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn)：一般分為四級，即 “一”—無或可見微弱熒光。 “+”僅—能見明確可見的熒光。“++”—可見有明亮的熒光。 “+++”—可見耀眼的熒光。十八、 呼吸道九聯(lián)檢產(chǎn)品介紹九項(xiàng)呼吸道感染病原體 IgM抗體檢測試劑盒，采用間接免疫熒光法（ IFA），同時檢測人血清中呼吸道感染主要病原體的 IgM抗體，可檢的病原體包括：嗜肺軍團(tuán)菌血清 1型、肺炎支原體、Q熱立克次體、肺炎衣原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒 1、2和3型。用于呼吸道感染疾病的輔助診斷。1.檢測原理間接免疫熒光法（ IFA）（圖1）是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)， 未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原 -抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，用免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果。1：九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒檢測原理試劑盒組成及用途組分 成分和用途檢測的物理載體，覆有聚四氟乙烯并包被有針對檢測物的特異性抗原，載玻片包裝袋內(nèi)有一袋硅膠以防潮。質(zhì)控品 用于證明試劑盒及試驗(yàn)的有效性，含有人血清及防腐劑。吸附劑羊抗人IgG用來吸附人IgG避免干擾IgM檢測，含有防腐劑。熒光素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白結(jié)合物，含有染色液、防腐劑和蛋白穩(wěn)定FITC結(jié)合物劑。和抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)，并顯色。封閉介質(zhì)甘油緩沖液，便于觀察。磷酸鹽緩沖液用于洗滌步驟，從反應(yīng)介質(zhì)中除去未結(jié)合的免疫球蛋白和結(jié)合物。(PBS)3.操作步驟3.1實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備1）實(shí)驗(yàn)所需物品準(zhǔn)備： 1000ml量筒、1000ml燒杯、離心管、微量移液器、溫育濕盒、洗瓶、水平搖床、恒溫箱、蓋玻片、熒光顯微鏡。2）PBS洗液的準(zhǔn)備：將 1瓶PBS粉末倒入燒杯中，加入 1L蒸餾水中，搖勻直至完全溶解，配好后儲存在 2-8oC備用。3）使用前，將所有試劑平衡至室溫，將恒溫箱調(diào)至 37℃。3.2實(shí)驗(yàn)步驟1）樣本的稀釋：按 1:1比例稀釋血清標(biāo)本，即 25μL血清加入25μLPBS中。陰陽性對照不需要稀釋。2）用吸附劑處理稀釋后的血清：將 30μL稀釋后的血清加入 150μL吸附劑中，徹底混勻。陰陽性對照不需吸附劑處理。 處理后的血清要離心 10-15分鐘除去沉淀，以防干擾檢測。3）在載玻片的每孔中加 15μL吸附劑處理過的血清。 在一個載玻片的每孔中加入 15μL不稀釋的陽性對照，在另一個載玻片的每孔中加入 15μL不稀釋的陰性對照。4）將載玻片放入濕盒中， 37℃溫育90分鐘。5）用PBS洗液的緩慢水流沖洗載玻片（避免直接沖入孔內(nèi)）后，浸泡在 PBS中并放置在水平搖床上輕輕搖動 10分鐘。將載玻片用蒸餾水緩慢水流沖洗（避免直接沖入孔內(nèi)） 。6）載玻片自然晾干。7）每孔加入 15μL FITC結(jié)合物溶液（不需稀釋） 。8）將載玻片放入濕盒， 37℃溫育30分鐘。9）重復(fù)6和7的洗滌步驟。10）加幾小滴封閉介質(zhì)，小心蓋上蓋玻片。11）盡快用熒光顯微鏡在 400倍放大率下觀察結(jié)果。 如果不能立即觀察， 可將其避光放置于2-8oC不超過24小時。簡明操作程序：4.結(jié)果判斷4.1有效性判斷每一次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立陽性和陰性對照， 以確認(rèn)試驗(yàn)和試劑盒的有效性。 觀察到的熒光模式應(yīng)為：陽性對照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性質(zhì)控的 1-15%細(xì)胞出現(xiàn)蘋果綠細(xì)胞核、胞漿或胞膜熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時觀察到著色的合胞）；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠熒光；支原體對陽性質(zhì)控在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。陰性對照：軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。陽性結(jié)果熒光圖譜：陰性結(jié)果熒光圖譜：4.2樣本結(jié)果判斷陽性結(jié)果：可以觀察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性血清的 1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時觀察到著色的合胞） ；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光；支原體對陽性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。陰性結(jié)果：可觀察到軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。5.性能指標(biāo)5.1.臨床靈敏度和特異性采用方法學(xué)對比進(jìn)行陰陽性符合率分析， 陽性符合率代表靈敏度， 陰性符合率代表特異性，結(jié)果如下：病原體對比方法樣本數(shù)量陽性符合率陰性符合率嗜肺軍團(tuán)菌IFA8294.4%98.4%肺炎支原體ELISA6296.8%100.0%Q熱立克次體IFA74100.0%97.6%肺炎衣原體IFA61100.0%98.0%腺病毒ELISA7485.7%97.0%呼吸道合胞病毒ELISA9793.8%100.0%甲型流感病毒ELISA4694.1%96.4%乙型流感病毒ELISA40100.0%96.4%副流感病毒ELISA36100.0%96.3%5.2精密度5.2.1分析內(nèi)精密度在相同實(shí)驗(yàn)條件下由同一個操作人員在同一次試驗(yàn)中對3份血清（2份陽性和1份陰性）分別進(jìn)行5組加樣檢測。結(jié)果：滴度變化不超過一個稀釋度。5.2.2分析間精密度在5種不同條件下（不同操作人員或不同試驗(yàn)日期）對3份血清（2份陽性和1份陰性）進(jìn)行檢測。結(jié)果：滴度變化不超過一個稀釋度。5.3交叉反應(yīng)和干擾病原體干擾物質(zhì)樣本例數(shù)結(jié)果肺炎支原體、肺炎衣原體和Q熱立克次嗜肺軍團(tuán)菌體、革蘭氏陰性細(xì)菌（布魯氏菌，沙門20氏菌）和抗核抗體肺炎支原體嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和Q熱立克次12體肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團(tuán)立克次體菌、同種屬的細(xì)菌（發(fā)疹傷寒等的病原20體）和抗核抗體無交叉反應(yīng)或干嗜肺軍團(tuán)菌、Q熱立克次體和肺炎支原擾肺炎衣原體體，同種屬的細(xì)菌（發(fā)疹傷寒等的病原20體）和抗核抗體RSV、甲型和乙型流感病毒和副流感病腺病毒毒8呼吸道合胞病腺病毒、甲型和乙型流感病毒和副流感毒病毒或根據(jù)病毒分類（麻疹）10RSV、乙型流感病毒、腺病毒和副流感甲型流感病毒病毒8RSV、甲型流感病毒、腺病毒和副流感乙型流感病毒病毒8副流感病毒RSV、甲型和乙型流感病毒和腺病毒85.4其它干擾研究對25份類風(fēng)濕因子陽性血清進(jìn)行了 2種病毒和 2種細(xì)菌抗原 IgG和IgM 抗體的檢測。對另外兩份血清進(jìn)行了每種抗原 IgG和IgM抗體的檢測。在IgM檢測中，用抗IgG抗體對血清進(jìn)行了吸附處理。結(jié)果顯示，吸附劑可以有效避免類風(fēng)濕因子的干擾。經(jīng)驗(yàn)證，吸附劑也可以有效地避免 IgG抗體過量造成的假陰性。十九、 產(chǎn)品問題答疑1. 本產(chǎn)品對所需檢測的樣本有何要求？答：本試劑盒僅適用與于檢測人血清。其血液采集需由專業(yè)人員無菌靜脈穿刺采集。建議使用消毒或無菌技術(shù)，以保持樣本的完整性。血清樣本采集后如不在 8小時內(nèi)檢測應(yīng)2～8oC冷藏，如 7天內(nèi)不檢測，則應(yīng)冷凍（ -20oC）保存。不要反復(fù)凍融以防止免疫球蛋白滴度降低，特別是 IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若樣本中含有微粒要離心使之澄清。本產(chǎn)品與九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgG抗體檢測試劑盒應(yīng)用條件的不同之處？答：在感染早期采集的樣本可能是檢測不到 IgG的，在這種情況下可采用 IgM檢測，或者在14-21天后采集第二個血清樣本，并與原標(biāo)本同時檢測來確定是否發(fā)生血清轉(zhuǎn)換。另外，在初次感染和再次感染的過程中， IgG和IgM抗體有不同的表現(xiàn)方式：初次感染時，幾乎在所有的情況下 IgM和IgG均出現(xiàn)（IgM早于IgG出現(xiàn)）；而再次感染時，可能不出現(xiàn)IgM，因此IgG的檢測是唯一有用的診斷方法。在許多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的 IgG，而IgM一般情況下僅在感染后 2—3個月存在于血清中，因此是近期感染的一個有效標(biāo)志物。再次，對與嬰兒來說，因?yàn)槌錾澳阁w的 IgG會被動的傳遞給了胎兒，所以對 6個月以下的嬰兒 IgM檢測是更為有用感染標(biāo)志物。3.載玻片上第十孔的質(zhì)控孔有何作用？答：對患有自身免疫性疾病患者的血清，用 IFA檢測時，支原體、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒這些孔含有細(xì)胞，會與某些自身抗體發(fā)生非特異性反應(yīng)，呈現(xiàn)多種病原體陽性，質(zhì)控孔也為陽性，表明不能使用本試劑盒檢測。質(zhì)控孔用于提示這種干擾現(xiàn)象。4.如何觀察結(jié)果，每種病原體的觀察到的形態(tài)是怎樣的？在觀察結(jié)果時，先對一個病毒類的病原體進(jìn)行觀察找到觀察點(diǎn)，因?yàn)榧?xì)菌類病原體如果是陰性則為黑色背景不易找到，而病毒類病原體為即便為陰性也會觀察到染成紅色的細(xì)胞易于找到。另外，在觀察時應(yīng)上下左右調(diào)整視野，觀察整個視野的病原體形態(tài)及熒光的數(shù)量和強(qiáng)弱，最終做出結(jié)果判斷。每種病原體觀察到的形態(tài)或熒光模式如下：病原體形態(tài)或熒光模式嗜肺軍團(tuán)菌桿狀肺炎支原體細(xì)胞外圍熒光模式立克次體球桿狀肺炎衣原體球狀腺病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）呼吸道合胞病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）甲型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）乙型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）副流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）5.本試劑盒應(yīng)用中所需注意事項(xiàng)有哪些？答：在使用本產(chǎn)品中所需注意事項(xiàng)如下：1）本產(chǎn)品用于體外診斷，僅限專業(yè)人員使用。2）在使用前，建議用戶仔細(xì)閱讀和理解說明書，嚴(yán)格按照程序進(jìn)行操作才能獲得可靠的檢測結(jié)果。特別是樣本和試劑的正確吸取以及仔細(xì)的洗板、 溫育的時間控制對獲得準(zhǔn)確結(jié)果都很重要。 另外使用前，應(yīng)將所有試劑平衡至室溫， 載玻片要平衡至室溫后再打開。3）每一次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立陽性和陰性對照，以確認(rèn)試驗(yàn)和試劑盒的有效性。觀察到的熒光模式應(yīng)與說明書要求相符合，否則檢驗(yàn)無效。4）洗滌時注意不要直接對著孔直接沖洗，以免沖洗掉已經(jīng)固化反的應(yīng)復(fù)合物。5）單一樣本抗體檢測結(jié)果不能幫助作出近期感染的診斷。應(yīng)采集雙份樣本（急性期和康復(fù)期）同時檢測來觀察血清轉(zhuǎn)化或抗體水平的明顯升高。6）僅使用試劑盒內(nèi)的組分，不要混用不同試劑盒或不同廠家的試劑組分。只有 PBS、吸附劑、封閉介質(zhì)和載玻片可與其他批次 VIRCELLIFA試劑盒通用，其它組分同批次可以混用。使用時，最好在無菌條件下操作試劑以防微生物污染。 僅使用試驗(yàn)所需量的吸附劑、 PBS、質(zhì)控血清和結(jié)合物，剩余的試劑不要倒回瓶中。 PBS溶解后儲存在2～8oC一般為4個月，使用前需檢查，如出現(xiàn)渾濁請勿使用。7）每步操作必須使用干凈吸頭，僅使用干凈的耗材，最好是一次性使用的耗材。8）包裝如有損壞請勿使用。9）切勿用嘴吸移液管加樣。10）本試劑盒中的吸附劑、結(jié)合物和質(zhì)控血清含有動物源性物質(zhì)，質(zhì)控血清還含有人源性物質(zhì)。盡管本試劑盒中的人血清質(zhì)控品已經(jīng)測試為 HBsAg、HCV抗體和HIV抗體陰性,質(zhì)控血清和病人樣本仍應(yīng)作為潛在感染性物質(zhì)進(jìn)行處理。 孔內(nèi)包被的經(jīng)滅活的嗜肺軍團(tuán)菌血清 1型、肺炎支原體、 Q熱立克次體、肺炎衣原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒 1、2和3型，也仍應(yīng)視為具有潛在感染性并小心處置。目前沒有方法可以確保這些或其他感染性物質(zhì)不存在，因此所有的材料應(yīng)視為具有潛在感染性進(jìn)行處置，應(yīng)遵守當(dāng)?shù)仃P(guān)于臨床廢棄物處理的法規(guī)。11）結(jié)合物、吸附劑、封閉介質(zhì)和質(zhì)控品含有疊氮鈉（濃度＜ 0.1%），避免接觸酸和重金屬。12）封閉介質(zhì)含有甘油，請勿接觸酸和暴露在高溫下。13）伊文斯藍(lán)（濃度＜0.1%）是一種致癌物。請勿接觸皮膚和眼睛。萬一接觸到該溶液，用水徹底沖洗并到醫(yī)院檢查。14）僅按本說明書進(jìn)行操作，不遵守規(guī)定的溫育時間和溫度會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。15）載玻片上病人樣本交叉污染會導(dǎo)致錯誤結(jié)果，要小心操作防止發(fā)生。16）顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)、光源條件和類型會影響熒光質(zhì)量。17）不要將試劑不必要地放置在室溫下過長的時間。18）每個載玻片只能使用一次。不要分割，也不要再使用沒有用過的孔。19）試劑盒里的玻璃組分破碎時可能傷及身體，小心處理。20）吸附劑加入樣本后要注意觀察是否有明顯的沉淀出現(xiàn)。6.出現(xiàn)異常結(jié)果的可能原因是什么？答：建議在實(shí)驗(yàn)過程中做好每一步的實(shí)驗(yàn)記錄，以方便出現(xiàn)異常結(jié)果時的分析溯源。1）所有細(xì)胞或第 10孔出現(xiàn)熒光：此種情況表明存在抗核或抗細(xì)胞抗體，不能判為陽性，應(yīng)用其他方法進(jìn)行檢測。當(dāng)質(zhì)控孔中無熒光時需進(jìn)一步查明病因。2）軍團(tuán)菌檢測孔出現(xiàn)假陽性：由于非軍團(tuán)菌感染的病人中經(jīng)常出現(xiàn)交叉抗體，所以軍團(tuán)菌陽性結(jié)果需結(jié)合臨床癥狀綜合評價。也可做較高稀釋度的檢測來提高陽性預(yù)測值。3）檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰現(xiàn)象： （1）檢查陰陽性對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以確認(rèn)試劑盒是否在有效期；2）檢查實(shí)驗(yàn)記錄，是否嚴(yán)格按照操作規(guī)程，是否漏加、錯加酶結(jié)合物或樣本；3）是否洗滌時正對孔沖洗、水流過猛，使固相化的復(fù)合體被沖洗掉；4）加樣量、反應(yīng)時間、溫度不夠；5）沒有及時觀察結(jié)果或判斷有誤。4）檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象：（1）加樣時操作不規(guī)范造成加樣污染；（2）洗滌時發(fā)生交叉污染或洗滌不徹底；（3）檢查實(shí)驗(yàn)記錄， 是否嚴(yán)格按照操作規(guī)程， 是否忘記加 IgG吸附劑；4）判斷有誤；5）試劑盒過期。二十、 相關(guān)疾病的防治方案呼吸道病原體感染引起的呼吸道疾病是一種常見病、 多發(fā)病，近年來，由于抗生素的濫用已經(jīng)造成了嚴(yán)重的耐藥現(xiàn)象， 降低了治療效果， 同時也增加了經(jīng)濟(jì)壓力、 心理壓力等疾病負(fù)擔(dān)。因此，呼吸道疾病應(yīng)以預(yù)防和治療相結(jié)合，減少其流行的機(jī)會。1.呼吸道傳染病的預(yù)防措施春季、冬季寒冷，各類致病微生物滋生繁衍，人們在外邊活動減少，多集中在室內(nèi)，這更增加了傳染機(jī)會。為了御寒，人們習(xí)慣把門窗關(guān)得很嚴(yán)，這樣，室內(nèi)外的空氣很難交換，在空氣相對靜止的室內(nèi)， 帶有病菌、病毒的飛沫在空氣中飄浮，人在屋子里呆的時間長，空氣又不新鮮，自然容易感染呼吸道傳染病。另外， 寒冷的空氣會使鼻黏膜的血管收縮， 降低呼吸道的抵抗力，這也是容易得病的一個原因， 所以春冬兩季一定要做好呼吸道疾病預(yù)防措施，具體如下：1）避免受涼 當(dāng)人體受涼時，呼吸道血管收縮，血液供應(yīng)減少，局部抵抗力下降，病毒容易侵入。2）凈化環(huán)境 保持室內(nèi)空氣清新。新鮮空氣能夠去除過量的濕氣和稀釋室內(nèi)污染物。應(yīng)定時開窗通風(fēng)，保持空氣流通 ;讓陽光射進(jìn)室內(nèi)，因?yàn)殛柟庵械淖贤饩€具有殺菌作用;也可用食醋熏蒸房間，起到消毒效果。3）管理傳染源，切斷傳播途徑 患者應(yīng)隔離，痰及大小便應(yīng)消毒處理。注意家畜、家禽的管理，使孕畜與健畜隔離，并對家畜分娩期的排泄物、胎盤及其污染環(huán)境進(jìn)行嚴(yán)格消毒處理。同時，屠宰場、肉類加工廠、皮毛制革廠等場所，與牲畜有密切接觸的工作人員，必須按防護(hù)條例進(jìn)行工作。4）補(bǔ)充營養(yǎng) 適當(dāng)增加水分和維生素的攝入。平衡飲食，少抽煙、少飲酒，注意多補(bǔ)充些魚、肉、蛋、奶等營養(yǎng)價值較高的食物，增強(qiáng)肌體免疫功能 ;多吃富含維生素 c的新鮮蔬菜水果，可中和體內(nèi)毒素，提高抗病能力;冬季氣候干燥，空氣塵埃含量高，人體鼻黏膜容易受損，要注意多喝水，讓鼻黏膜保持濕潤，能有效抵御病毒的入侵，還有利于體內(nèi)毒素排泄，凈化內(nèi)環(huán)境。5）注意生活規(guī)律 保證睡眠充足。生活不規(guī)律易使免疫系統(tǒng)功能減弱 ;充足睡眠能消除疲勞，調(diào)節(jié)人體各種機(jī)能，增強(qiáng)免疫力。加強(qiáng)鍛煉，增強(qiáng)體質(zhì) 鍛煉可增強(qiáng)血液循環(huán)，提高免疫力。但霧天不要晨練，因?yàn)闈忪F中不僅含有大量有害物質(zhì)，而且水汽較多，會影響人體肺部的氣體交換。6）加強(qiáng)個人衛(wèi)生和個人防護(hù) 要注意勤洗手、勤漱口，不要用臟手觸摸臉、眼、口等部位。與病人接觸時注意個人防護(hù)。家中若有可疑病人，應(yīng)戴口罩，并及時就診。與其密切接觸者， 也應(yīng)戴上口罩，減少感染機(jī)會。出門在外要盡量站在空氣通暢的地方。盡量少到擁擠的公共場所。霧天外出可戴口罩。7）自動免疫 流行季節(jié)前進(jìn)行相應(yīng)的預(yù)防接種。 如流感、肺炎等疫苗。接觸家畜機(jī)會較多的工作人員可予疫苗接種， 以防感染。牲畜也可接種，以減少發(fā)病率。 死疫苗局部反應(yīng)大；弱毒活疫苗用于皮上劃痕或糖丸口服，無不良反應(yīng)，效果較好。2．呼吸道傳染病的治療措施呼吸道傳染病的治療不可盲目使用抗生素，應(yīng)在辨證施治中結(jié)合病情、病程、肺外的不同臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢測 ,靈活用藥,方能藥到病除。嗜肺軍團(tuán)菌引起的呼吸道感染疾病治療措施軍團(tuán)菌為胞內(nèi)感染， 因此，體外藥敏性往往不能反映體內(nèi)， 理想的抗菌藥物應(yīng)在吞噬細(xì)胞內(nèi)具有一定濃度并能在呼吸道分泌物中保持良好的穿透性。 首選紅霉素靜脈滴注2g/d，病情好轉(zhuǎn)后改為口服 1～2g/d，重癥病人可用紅霉素 2～4g/d靜脈滴注或1200mg/d口服，療程不少于 3周，選用抗生素的基本原則是劑量足、療程夠、聯(lián)合用藥(一般二聯(lián))，病情特別危重者可以三聯(lián)用藥靜脈途徑給藥和選用殺菌藥物為主。近來有人主張首次給沖擊量 (一般為每次用藥量的加倍量 )有利于迅速達(dá)到有效殺菌濃度，實(shí)際證明每隔 4～6h靜脈滴注抗生素較只用同等劑量 24h緩慢靜脈滴注收到的效果更好。肺炎支原體引起的呼吸道感染疾病治療措施對于肺炎支原體的感染， 早期使用適當(dāng)抗菌藥物可減輕癥狀及縮短病程。 本病有自限性，多數(shù)病例不經(jīng)治療可以自愈。大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物為首選，如紅霉素、羅紅霉素和阿奇霉素。 氟喹諾酮類如左氧氟沙星、 加替沙星和莫西沙星等， 四環(huán)素也可用于肺炎支原體肺炎的治療。療程一般 2--3周。因肺炎支原體無細(xì)胞壁，青霉素或頭孢菌素類等抗菌藥物無效。對劇烈嗆咳者，應(yīng)適當(dāng)給予鎮(zhèn)咳藥。若繼發(fā)細(xì)菌感染， 可根據(jù)痰病原學(xué)檢查，選用針對性的抗菌藥物治療。同時也可根據(jù)癥狀選擇適當(dāng)?shù)闹兴幹委?。Q熱立克次體引起的呼吸道感染疾病治療措施氯霉素、四環(huán)素類抗生素（包括強(qiáng)力霉素）對各種立克次體均有效，可使病程縮短，病死率明顯下降。但病原體徹底清除或病人的健康恢復(fù)主要依賴于人體的免疫功能，特別是細(xì)胞免疫功能狀況。應(yīng)注意磺胺類藥物不能抑制立克次體生長，反而會促進(jìn)其繁殖作用。肺炎衣原體引起的呼吸道感染疾病治療措施紅霉素或其他大環(huán)內(nèi)酯類藥物、四環(huán)素治療肺炎衣原體肺炎甚為有效。劑量為紅霉素2g/d，分4次口服，1～14天為一療程。為避免復(fù)發(fā)，用藥可延長至 3周。喹諾酮類如氧氟沙星治療肺炎衣原體感染亦有療效。 對臨床出現(xiàn)的高熱， 可采用物理降溫，咳嗽、咳痰者可口服鎮(zhèn)咳化痰藥。腺病毒引起的呼吸道感染疾病治療措施對于腺病毒的防治，主要從以下幾個方面著手：①抗病毒藥物：靜脈和/或肌注在早期病例較為有效，晚期病例則效果不明顯。②注意繼發(fā)細(xì)菌感染的防治：如初步斷定有繼發(fā)感染即應(yīng)積極治療，例如金黃色葡萄球菌感染用新型青霉素，先鋒霉素等大腸桿菌用氨基芐青霉素等治療③用氯丙嗪、異丙嗪等鎮(zhèn)靜劑解痙止喘④用洋地黃劑控制心力衰竭⑤輸血或輸血漿或應(yīng)用丙種球蛋白可起到支持作用⑥正確輸氧及輸液如處理恰當(dāng)能幫助病兒渡過極期⑦暫短的激素療法：腎上腺皮質(zhì)激素在遇明顯呼吸道梗阻，嚴(yán)重中毒癥狀（驚厥、昏迷、休克、40.6℃以上的持續(xù)高熱等）時宜靜脈應(yīng)用⑧在恢復(fù)期中如肺部體征消失遲緩宜作物理治療。除了以上的方法之外，對腺病毒肺炎也可采用中醫(yī)療法，早期以宣肺清熱解毒為主中期加用滌痰豁痰，重癥極期扶正救逆。治療分正治法和救逆法兩種，其治則為邪實(shí)當(dāng)宜宣肺祛邪，正虛救逆須用育陰、回陽、氣液兩補(bǔ)等法即正治以宣肺透表為主，救逆以隨證論治為要。具體歸納為八法即①解表法：風(fēng)熱犯肺以桑菊飲套蔥豉湯加減；若熱甚則合銀翹散加減；風(fēng)寒襲肺，以杏蘇散和蔥鼓湯加減；暑邪，以香薷飲加減②表里雙解法：表寒里熱以麻杏石甘湯加味；外寒內(nèi)熱，曾用小青龍加石膏湯，若內(nèi)飲不重，咽間有痰，作水雞聲，舌淡或微紅，脈浮數(shù)，治以射干麻黃湯；表陷里寒，治宜桂枝厚樸杏仁湯；表陷里熱用葛根芩連湯加味；表陷結(jié)胸用小陷胸湯套瓜蔞薤白湯加減。③通陽利濕法：濕邪以千金葦莖湯加味；若濕熱閉肺，神昏，身有白則以薏苡竹葉散治之。④清熱養(yǎng)陰法：氣虛熱閉乃以西洋參3g扶正，用牛黃散5g勻分五次服；若正虛入營，則以清營解毒之劑，佐以宣閉；余熱未盡，以竹葉石膏湯加減；暑傷肺氣，仿王氏清暑宜氣法加減。⑤降氣豁痰法：氣逆而喘，宜蘇子降氣湯加減；肝氣上逆，宜旋覆代赭石湯加味。⑥扶正開閉法病久，肺氣已虛，邪閉尚甚，宜用玉竹、遠(yuǎn)志、粳米、大棗、訶子，補(bǔ)益肺氣以扶正；若肺閉甚，可佐焦麻黃少許，并選用杏仁、生石膏、桔梗、蔥白之類，攻補(bǔ)兼施以開閉。⑦固陰降逆法：火逆而喘，宜麥門冬湯加減； 氣液兩傷，宜生麥散加味；陰液枯竭，宜三甲復(fù)脈湯加味；久病傷陰，宜大小定風(fēng)珠加減。⑧回陽救逆法：用參附湯或姜附湯加味頻頻飲之。此外病后調(diào)理：脾胃不調(diào)，以二陳湯加味；脾胃不調(diào)虛滿者，治以厚樸生姜半夏甘草人參湯；病后虛煩，治以梔子豉湯；中虛氣陷，用補(bǔ)中宜氣湯加減。呼吸道合胞病毒引起的呼吸道感染疾病治療措施輕癥和不明顯的感染可能相當(dāng)多， 往往未加注意而自行痊愈。 嬰幼兒中重癥者需要住院和密切觀察以保證呼吸道通暢。 低氧血癥在嬰兒患呼吸道合胞病毒感染時十分常見。動脈血氧測定和 /或血氧量測定能提供感染嚴(yán)重程度的客觀資料，并能提供是否需作重癥監(jiān)護(hù)的依據(jù)。 在呼吸道合胞病毒引起的毛細(xì)支氣管炎和肺炎的研究中， 三氮唑核苷(一種新型抗病毒藥物 )開始使用，能使嚴(yán)重的病人減少排毒以及促進(jìn)恢復(fù)。三氮唑核苷 6g溶入300ml滅菌水中(20mg/ml)，12～20小時內(nèi)霧化吸入，連用 3～5日，某些病人可能需要更