單核增生李斯特氏菌檢測概述

單核增生李斯特氏菌

檢測概述張惠媛2005年6月內(nèi)容簡介李斯特氏菌屬單核增生李斯特氏菌生物學(xué)特性流行病學(xué)致病性實(shí)驗(yàn)室危害及其預(yù)防檢測程序快速檢測方法李斯特氏菌屬李斯特氏菌屬（Listeria）普遍存在于環(huán)境中，最新的分類學(xué)研究表明，其分為六個(gè)種：單核增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）伊氏李斯特氏菌（Listeriaivanovii）無害李斯特氏菌（Listeriainnocua）斯氏李斯特氏菌（Listeriaseeligeri）威氏李斯特氏菌（Listeriawelshimeri）格氏李斯特氏菌（Listeriagrayi）

在李斯特氏菌屬的六個(gè)種中，只有兩種致病菌：單核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他動(dòng)物發(fā)病。但是，其中通常只有單核增生李斯特氏菌和人類的李斯特氏菌癥（listeriosis）相關(guān)。因此，李斯特氏菌中最有檢測意義的是單核增生李斯特氏菌。生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及染色特征革蘭氏陽性；小的、類似球形桿菌，0.4~0.5×0.5~2μm，在有些培養(yǎng)基中稍彎，兩端鈍圓，單個(gè)、成短鏈、細(xì)胞彼此連成V形，或成群的細(xì)胞沿長軸方向平行排列，在較老的或生長不良的培養(yǎng)物中，可能形成絲狀；20-25℃以4根周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，在37℃只有較少的鞭毛或1根鞭毛；無芽孢、無莢膜。生物學(xué)特性

---培養(yǎng)特性兼性厭氧；在20--25℃培養(yǎng)有動(dòng)力，穿刺培養(yǎng)2-5天可見倒立傘狀生長，肉湯培養(yǎng)物在顯微鏡下可見翻跟斗運(yùn)動(dòng)。生長溫度范圍為2-42℃（也有報(bào)道在0℃能緩慢生長），最適培養(yǎng)溫度為35--37℃。pH范圍pH4.4-pH9.6。生物學(xué)特性

---培養(yǎng)特性在固體培養(yǎng)基上，菌落初始很小，透明，邊緣整齊，呈露滴狀，但隨著菌落的增大，變得不透明。在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺種血平板培養(yǎng)后可產(chǎn)生窄小的β-溶血環(huán)。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSAYE)瓊脂上，用45°角入射光照射菌落，通過解剖鏡垂直觀察，菌落呈蘭色、灰色或蘭灰色。生物學(xué)特性

---生化反應(yīng)觸酶陽性，氧化酶陰性。能發(fā)酵多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，如發(fā)酵葡萄糖、乳糖、水楊素、麥芽糖、鼠李糖、七葉苷、蔗糖（遲發(fā)酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不發(fā)酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側(cè)金盞花醇、棉子糖、衛(wèi)矛醇和纖維二糖。不利用枸櫞酸鹽，40%膽汁不溶解，吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥氨酸均陰性，VP、甲基紅試驗(yàn)和精氨酸水解陽性。生物學(xué)特性

---血清型根據(jù)菌體（O）抗原和鞭毛(H)抗原，將單增李氏菌分成13個(gè)血清型，分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e和“7”。致病菌株的血清型一般為1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后兩型尤多。生物學(xué)特性

---抵抗力該菌對理化因素抵抗力較強(qiáng)，在土壤、糞便、青儲(chǔ)飼料和食品中能長期存活；對堿和鹽抵抗力強(qiáng)，60-70℃經(jīng)5-20min可殺死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福爾馬林20min可殺死此菌；濕熱滅菌（121℃，至少15min）和干熱滅菌（160-170℃，至少1hr）可殺滅該菌，對紫外線和γ射線敏感；該菌對青霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素（已產(chǎn)生抗性）、氨基糖苷類、氯霉素均敏感。流行病學(xué)

分布：廣泛存在于自然界中，土壤、地表水、污水、廢水、青儲(chǔ)飼料、動(dòng)植物及其食品中均有該菌存在，所以動(dòng)物很容易食入該菌，并通過口腔-糞便的途徑進(jìn)行傳播寄主范圍：哺乳動(dòng)物、鳥類、魚類、甲殼類和昆蟲流行病學(xué)

據(jù)報(bào)道，有1-10%的人類腸道中存在單核增生李斯特氏菌，4-8%的水產(chǎn)品、5-10%的奶及其產(chǎn)品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被該菌污染。相關(guān)食品：鮮奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤其是軟奶酪）、冰激凌、生的蔬菜、發(fā)酵過的生肉制作的香腸、生的和加工過的禽肉、各種生的肉類、生的和煙熏的魚肉。約有85-90%的病例是由被污染的食品引起的。1996年至1999年，因單核增生李斯特氏菌回收的食品種類（來源：USDA及FDA報(bào)告）致病性及其治療該病的臨床表現(xiàn)，健康成人個(gè)體出現(xiàn)輕微類似流感癥狀，新生兒、孕婦、免疫缺陷患者表現(xiàn)為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結(jié)膜炎、發(fā)熱、抽搐、昏迷、自然流產(chǎn)或死嬰、腦膜炎、敗血癥直至死亡。由該菌造成的腦膜炎的致死率可高達(dá)70%，敗血癥的死亡率達(dá)50%，圍產(chǎn)期或新生兒感染的死亡率超過80%，懷孕期婦女的感染，母親通常能存活下來。抗生素治療，用青霉素或氨芐青霉素注射給藥，或與氨基糖苷類抗生素一起用藥。感染人群感染劑量未知，但與該菌的毒力和易感人群的年齡、免疫狀態(tài)有關(guān)。易感者：孕婦/胎兒—圍產(chǎn)期和新生兒的感染；接受皮質(zhì)激素、抗癌劑治療、器官移植治療、艾滋病患者等免疫缺損者；癌癥病人—尤其是白血病的患者；不太常見的報(bào)道—糖尿病、肝硬化、哮喘和潰瘍性結(jié)腸炎的患者；年紀(jì)較大的人；沒有免疫缺陷的健康的人，食用污染該菌尤其是大量污染該菌的食品后，也有患病的危險(xiǎn)。致病糖機(jī)理單增等李氏侮菌的瓣抗原海結(jié)構(gòu)直與毒飯力無薦關(guān)，員它的句致病鵝性與疼毒力階機(jī)理吐如下北：1、寄鐮生物勇介導(dǎo)東的細(xì)乖胞內(nèi)腐增生稍，使床它附估著及煤進(jìn)入術(shù)腸細(xì)系胞與售巨噬模細(xì)胞拌；2、抗密活化艦的巨綱噬細(xì)蛛胞，棗單增惰李氏廚菌有產(chǎn)細(xì)菌鏈性過劃氧化紀(jì)物歧冰化酶場，使睡它能父抗活威化巨原噬細(xì)擦胞內(nèi)俯的過旦氧物硬（為嘆殺菌紋的毒艷性游然離基喚團(tuán)）梁分解思；3、溶血象素，即襪李氏天桿菌槐素O，可以元從培克養(yǎng)物隆上清鉆液中跳獲得孩，有α和β兩種鑰，為刊毒力部因子悲。實(shí)驗(yàn)按室危雨害不是圓一種炸普遍柴的與壘實(shí)驗(yàn)六室相架關(guān)的階傳染政病，順目前廉只有鞏少數(shù)籃有報(bào)盡道的肥案例吊發(fā)生刃；直接眾攝取是最脹普遍離的一詞種感憑染方霜式，弊除此史之外及，暴聲露在肺該菌償高濃吵度的墻氣溶失膠中勁，也燭可通簽過眼稍睛和糟破損靜的皮黑膚、苗粘膜書進(jìn)入雕體內(nèi)斑造成翁感染昨。注意購事項(xiàng)生物距安全2級，操村作時(shí)廳應(yīng)有顏相應(yīng)倒的防芬污染麥設(shè)施芬，在落進(jìn)行續(xù)可能懸產(chǎn)生傲氣溶征膠的欠操作媽時(shí)，紗應(yīng)在押生物啦安全霧柜內(nèi)蹦完成規(guī)；在直嘗接接置觸有碌感染廟性的旺材料然時(shí)，脆必須祖穿著掃實(shí)驗(yàn)群服，保戴手汗套和傷護(hù)目敬鏡；懷孕彎的婦事女應(yīng)避腎免接膜觸傳寫染物縫。操作贊要求濺灑：使地氣溶繭膠沉革降，竊穿著嗎防護(hù)易服裝捷，用鉤紙巾打輕輕爺覆蓋勤濺灑姻處，裕加入1%次氯蠢酸鈉玻溶液事，由俱周邊雷向中界心加園，在摔清理狗之前伸要留頃充足勁的接娃觸時(shí)相間（30蘿mi艦n）；廢棄：在汗廢棄墻前應(yīng)宴先采亭取凈震化措塑施，吧高壓蛙蒸汽闖滅菌挨、化逆學(xué)消蒸毒、尊焚燒個(gè)等；儲(chǔ)存：在騙有適賞當(dāng)標(biāo)艷記的摔密封難容器跨內(nèi)儲(chǔ)竭存。檢測砍程序--體-增菌目前旅常用懇的單四核增奇生李施斯特益氏菌震檢測扭增菌攀肉湯屆主要譯有半量Fr筐as育er肉湯、Fr舟as浩er肉湯（FB）、UV墊M（Mo編di趣fi素ed攜U腳ni宋ve輪rs舞it摘y河of涉V角er獵mo喂nt榨b繼ro曬th，也叫UV鍛M1）、LE沸B（Li浩st它er雜iaen娃r(nóng)i婆ch寄me黎nt念b壇ro朱th）和BL出EB（bu羅ff夸er耀edLi鳥st煮er橡iaen緩ri翅ch半me綢nt乏b故ro稱th）半量Fr著as燦er肉湯差和Fr況as性er肉湯具有選擇僚性和區(qū)別猜性。加入檸檬藥酸鐵乒銨和七葉公靈，起泄到區(qū)惕別的繁作用氏。李巨斯特廢氏菌擋可以修水解訴七葉蓄靈，露與培奧養(yǎng)基遞中的飲鐵離躲子反獄應(yīng)，絡(luò)使培耽養(yǎng)基插變黑衡，可引直觀饅的從拐培養(yǎng)亞液的免顏色覺就可危以判鴨斷是機(jī)否有縱單核家李斯鬼特氏墳菌的凍生長欠。氯化廉鋰、吖啶巾黃和萘啶弱酮酸作為酬選擇尼性因獸子。半量Fr淹as肚er肉湯猴與Fr近as袖er肉湯大所用膜的添悅加劑華一樣半量Fr斥as慢er肉湯摩：萘嘴啶酮衡酸10嫁mg殘/L，吖啶憤黃12殿.5爐mg胸/LFr裝as季er肉湯真：萘蜂啶酮梢酸20書mg炭/L，吖啶遙黃的25予mg逮/LUV艷MUV破M只有套選擇純性沒訊有區(qū)虧別性加入萘啶貨酮酸和鹽酸捕吖啶樂黃，作錦為選作擇性釀因子次。雖陶然其晚中含蜂有七適葉靈獅，但勉是沒午有添村加檸些檬酸裹鐵銨催，不躬能發(fā)捎生黑傷色的馬顏色遲反應(yīng)沫。LE滿B和舉BL伯EB只有旺選擇瘡性沒城有區(qū)管別性LE吐B是在TS惜B-煩YE的基揉礎(chǔ)上繭加入鹽酸料吖啶冶黃、萘啶蔽酮酸和放線奏菌酮等選昂擇性飽因子乓；加替入的丙酮尸酸鈉，有纖助于岔受損蔬細(xì)胞觸的恢昏復(fù)；牽不含痰七葉伯靈和匙檸檬店酸鐵好銨，閣無顏許色反鈔應(yīng)BL身EB是在LE減B基礎(chǔ)瞞上加矛入緩貿(mào)沖體頌系：輪磷酸覺二氫停鉀和劑磷酸染氫二拍鈉檢測載程序--惕-分離分離番培養(yǎng)部基有玩：OX艘A、PA旺LC累OM、LP刷M、MO澆X等，血但首鎮(zhèn)選仍士然是OX質(zhì)A。分離至原理牧主要陳是基嘆于李元斯特若氏菌齊具有β－D－葡萄夫糖苷譜酶的活章性，咐能水樣解培跳養(yǎng)基摔中的聯(lián)七葉繳靈，治產(chǎn)生況七葉簽苷，掉與鐵姜離子薪產(chǎn)生逝顏色沾反應(yīng)橋而，宇使菌怒落為楊棕褐拍色，繞并帶洽有褐讀色暈駁圈，育而致朝病性疏和非位致病悟性李虜斯特羽氏菌體病都不能發(fā)夫生這礙種反請應(yīng)還有品一些陽選擇負(fù)性顯蜓色培室養(yǎng)基壟，如BC門M、AL厭OA、CH瞇RO反Ma搜ga悄rli樓st矛er粥ia、Ra賤pi夜d’笑L.眉m褲on該o等，靜其原作理主區(qū)要是李檢測渡由毒芝力基狡因編炸碼的溶血然素，而嘗此種椒溶血性素只亡存在剩于單呼核增巡壽生李遷斯特竄氏菌強(qiáng)和伊烘氏李含斯特它氏菌元中，踢因而青可以遼很好腹的將乏此兩震種菌螞同李掘斯特侵屬的跑其他染種分陜開。OX見A平板單核比增生址李斯排特氏悔菌AT朽CC慰1艦91據(jù)1748詳h，35℃培養(yǎng)OX梨A平板無害差李斯俯特氏勾菌AT口CC付3南30考9048慮h，35℃培養(yǎng)檢測爪程序--喝-鑒定藍(lán)色伸菌落諒檢驗(yàn)竹（He益nr肝y插il傅lu熱mi搏na馳ti戴on）典型匆運(yùn)動(dòng)揀：相訓(xùn)差顯剖微鏡君，輕界微旋春轉(zhuǎn)或趕翻跟桿頭動(dòng)力棚試驗(yàn)辜：7天，蛋傘形肆生長過氧袍化氫指酶試驗(yàn)悼：陽底性革蘭跌氏染勉色：陽卡性短樹桿菌溶血快試驗(yàn)：穿調(diào)刺接廈種血期平板硝酸朝鹽還蔑原試徒驗(yàn)：5天，盞陰性糖發(fā)應(yīng)酵試絡(luò)驗(yàn)：葡以萄糖定、麥吩芽糖謙和七屆葉靈室，李免斯特沸菌屬藥反應(yīng)撐均為店陽性陳，除年格氏筑李斯工特甘況露醇請陰性巖，李中斯特處其他覽種甘托露醇袖陰性警，木糖和鼠李錢糖最有械檢測鏡意義動(dòng)力燒試驗(yàn)血平腰板單核而增生致李斯料特氏燭菌AT碌CC茄1裝91塊1736筑h，35℃培養(yǎng)血平卵板無害規(guī)李斯胖特氏途菌AT糧CC閱3該30斥9036病h，35℃培養(yǎng)血平慌板伊氏血李斯骨特氏顛菌AT掘CC蜂1屋91貝1924參h，35℃培養(yǎng)單核蜓增生貝李斯愿特氏見菌檢該測流盜程25愛g樣品+2吩25軟ml護(hù)B鴉LE販B基礎(chǔ)私（加在入丙丑酮酸道鈉）加入爺萘啶拾酮酸仔、鹽僅酸吖忽錠黃傾、放鉗線菌走酮30℃4h據(jù)r劃線鞠接種OX層A平板30℃24符hr和48爐hr科瑪于嘉李擦氏菌僵顯色軌培養(yǎng)錯(cuò)基TS呀A-問YE分純35℃24桃hr份-4沫8h存r35℃24除hr過氧是化氫咽酶試霞驗(yàn)、孟革蘭廳氏染定色、死溶血懸試驗(yàn)己、糖揮發(fā)酵氣試驗(yàn)觀（木插糖、倡鼠李緒糖）AP肯I持Li帖st逼er屆ia35℃24廁-4尤8h得r報(bào)告情結(jié)果35℃18承-24奪hr方法名稱一次增菌二次增菌分離鑒定快速方法SN0184-1993加工MBP30℃，18-24hEB30℃，24/48hMMA/OXA（35℃，24-48h）藍(lán)色菌落；典型運(yùn)動(dòng)；過氧化氫酶；革蘭氏染色；溶血試驗(yàn)；尿素酶試驗(yàn)；硝酸鹽還原；MR-VP；三糖鐵；糖發(fā)酵；動(dòng)力試驗(yàn)；協(xié)同溶血*；血清學(xué)檢驗(yàn)*；小鼠毒力試驗(yàn)*無未加工EB（30℃，24/48h）GB/T4789.30-2003EB（30±1℃，48h）MMA（30±1℃，24-48h）藍(lán)色菌落；三糖鐵；動(dòng)力試驗(yàn)；染色鏡檢（革蘭氏染色、典型運(yùn)動(dòng)）；生化特性（溶血反應(yīng)、硝酸鹽還原、尿素酶、MR-VP、糖發(fā)酵）；小鼠毒力試驗(yàn)；協(xié)同溶血無LB1（30±1℃，24h）LB2（30±1℃，24h）FDABLEB+Phy（30℃，4h）BLEB+Phy+三種抑菌劑（30℃，20/44h）OXA/PALOM/MOX/LPM+七葉靈+Fe3+推薦BCM/ALOA/RapidL'mono/CHROMagarListeria藍(lán)色菌落*；典型運(yùn)動(dòng)或動(dòng)力試驗(yàn)；過氧化氫酶；革蘭氏染色；溶血試驗(yàn)；硝酸鹽還原*；糖發(fā)酵；協(xié)同溶血；血清學(xué)檢驗(yàn)；小鼠毒力試驗(yàn)*篩選、鑒定都可以使用快速方法USDAUVM（30±2℃，22±2h）FB（35±2℃，26-48±2h）MOX（35±2℃，26-48±2h）初步鑒定：純菌菌落形態(tài)；典型運(yùn)動(dòng)；生化鑒定：MICRO-ID?

Listeria或Api?

Listeria或BAM等方法中的傳統(tǒng)生化反應(yīng)；協(xié)同溶血遺傳鑒定：核糖體RNA檢測；PFGE*篩選用的快速方法必須經(jīng)過確認(rèn)后才可使用鑒定中用到MICRO-ID?、Api?、GenProbeAccuProbe?、GENE-TRAK?各官算方方兼法比秀較各官乖方方幸法比網(wǎng)較方法名稱一次增菌二次增菌分離鑒定快速方法CFIAMFHPB-30LEB（UVM）（30℃，24/48h）MFB（35℃，24-48h）OXA+LPM或MOX或PALCOM典型運(yùn)動(dòng)或動(dòng)力試驗(yàn)；溶血試驗(yàn)；甘露醇；木糖；鼠李糖；快速鑒定試劑盒*；過氧化氫酶*；革蘭氏染色*；協(xié)同溶血*；血清學(xué)試驗(yàn)*作為鑒定的可選步驟，允許使用快速方法，如Vitek或API、MicroIDListeria、ListeraAccuprobe?ISO11290-1:1996（E）半量Fraser肉湯（30℃，24±2h）Fraser肉湯（35或37℃，48±2h）OXA和PALCOM（30、35或37℃，24-48h，）PALCOM平板微需氧或好氧條件培養(yǎng)藍(lán)色菌落*；過氧化氫酶；革蘭氏染色；動(dòng)力試驗(yàn)或典型運(yùn)動(dòng)*；溶血試驗(yàn)；糖發(fā)酵試驗(yàn)；協(xié)同溶血；送參考實(shí)驗(yàn)室（血清或噬菌體分型）無NMKLNo.1362nd1999LBⅠ（30.0±1.0℃，24±3h）LBⅡ（30.0±1.0℃，24±3h）或Fraser肉湯（37.0±1.0℃，48±4h）OXA和PALCOM（37.0±1.0℃，24±3/48±4h，好氧或微需氧）溶血試驗(yàn)；過氧化氫酶；革蘭氏染色；典型運(yùn)動(dòng)動(dòng)力試驗(yàn)；糖發(fā)酵試驗(yàn)；送參考實(shí)驗(yàn)室（血清、噬菌體、DNA或酶分型）允許使用經(jīng)過確認(rèn)的商業(yè)化生產(chǎn)的單核增生李斯特氏菌菌株鑒定試驗(yàn)，但沒列明具體試劑盒名稱紅肉量、禽委、蛋墾和環(huán)夫境樣蠶品中凡分離跡和鑒慘定單超核增杯生李狗斯特出氏菌竟的方熔法紅肉采、禽刷、蛋搭和環(huán)緩境樣損品中受分離循和鑒賭定單棵核增佛生李約斯特兼氏菌型的方姜法FD庸A：李斯族特氏俗菌屬啞的快趕速篩壯選試須劑盒Ta川bl劣e司2.Li巨st勢er暗iaGe棵nu負(fù)s歌De椒te成ct榜io新n赤Te恢st挎K汗it杜s猜Pr易es凱cr貼ib美ed宗f答or幅R尺eg天ul臭at赤or富y責(zé)Sc傅re清e(cuò)n洋in飾gAO姑AC拖O涌ff厚ic春ia偶l甘Me膠th如od佳9情93企.0漏9.史2眨00照0.Li妥st還er敲iain遠(yuǎn)d腸ai舅ry臂p速ro躺du淺ct仆s,se脖af飛oo部ds,托an蒸d閃me蹄at章s.汁C愿ol菌or顯im尋et毀ri揚(yáng)c竭de兄ox嚇yr愁ib混on散uc計(jì)le醋ic塵a犯ci坑d咽hy帳br圍id背iz送at田io察n小me腳th下od鼓(GE罪NE戀-T者RA膽KLi涉st芹er疫iaAs隊(duì)sa臨y).揀(迅3,當(dāng)1己4)AO仍AC裹O設(shè)ff旅ic轎ia棗l唯Me司th甚od樂9鎮(zhèn)94樣.0璃3.疲2殿00擔(dān)0.Li率st得er攝iamo風(fēng)no稍cy引to陡ge斜ne軌sin劃d剪ai半ry躍p圓ro濤du黨ct刷s,se反af封oo居ds,陰an娛d獸me耍at帖s.尿C指ol份or欄im權(quán)et侮ri討c超mo蒜no掙cl拆on蜜al沾e僅nz諸ym部e-惰li保nk甩edim趕mu降no咐so亦rb烘en傷tas智sa穩(wěn)y雖me拐th霜od族(Li芳st訂er雁iaTe蕉k).探(世5,轟1包5,宇3海2)AO她AC叨O呆ff設(shè)ic撐ia宰l恭Me拍th洗od黎9烈95置.2旁2.物2售00替0.Li辟st盯er燥iain如f療oo關(guān)ds炎.涼Co屑lo責(zé)ri揭me燭tr涂ic辱p土ol濁yc墾lo施na謊l誕en喪zy互me煙i置mm族un容oa搬ss姐ay蚊s瓦cr胃ee鼓ni翁ng燈m象et脈ho役d糞(TE偽CR淺ALi步st刑er簽iaVi富su喝al驢I磨mm柄un渠oa論ss康ay[T效LV嗓IA棒])虜.器(6喜,穗30頃)AO煌AC殿O相ff青ic侵ia雖l貨Me繡th胃od羽9弊96爛.1爹4.罵2嘴00紅0.周A交ss款ur蹦an講ce調(diào)(接Po歪ly僵cl殺on睜al碼E翠nz折ym做e待Im涉mu逝no占as槐sa澆y瓦M(jìn)e斃th怪od粒).啞(窗7,管2城1)AO夫AC掏O怒ff防ic呢ia歸l務(wù)Me傷th何od簡9輸97沫.0歪3.餐2蔬00握0.屑V價(jià)is舉ua俗lIm赴mu并no絞pr貓ec鐘ip顏it墾at婦eAs份sa吃y嘴(VI廊P).漸(警8,葬2價(jià)2)AO午AC栗O復(fù)ff笨ic奸ia滿l欺Me圍th里od錢9速99穿.0音6.敵2侍00咽0.大E蛙nz虎ym對e干Li超nk是edIm沉mu疑no訊fl這uo含re幼sc遞en柿tAs我sa兵y發(fā)(E叫LF餓A)VI笑DA壘S雕LI酬S踐As寬sa騙ySc岡re娛en蹲in導(dǎo)g戀M(fèi)e突th犧od旨.竭(9富,由23跌)FD悔A：生化哄鑒定童的替量代方六法Vi氣te勵(lì)kAu章to鋼mi粉cr吹ob事icGr觀am妥P澡os廊it希iv蕉e巷an驗(yàn)d魄Gr枕am暫N躍eg糖at閑iv刮e多Id擾en桶ti荒fi耳ca蟲ti嚼on寧c仇ar怪ds刮(bi演oM頂er塑ie互ux,店Ha慎ze款lw呼oo溉d,槍M序O)AP少ILi盡st女er展ia(bi疏oM餡er淋ie叔ux,桑Ma禽rc躺y-l'城Et決oi飽le,供Fr飄an嘴ce攤)疲wh包ic漂h饒do控es逢n謀ot肝r博eq趕ui島re原a判n脆ad循di協(xié)ti擱on誓al富C纏AM船P仿te招stTh弱eMI千CR感O-挨IDTMki充t領(lǐng)(bi碑oM幫er柿ie四ux,仿Ha辯ze通lw舉oo愉d,頂M歉O;省1逗,計(jì)24盆)魚pe紛rm京it語s執(zhí)sp凱ec鉤ia框ti下on犬o飼fLi森st意er番iais即ol鎮(zhèn)at右es貫i詞f抱th陶ei能r童CA億MP喂r下ea鋤ct俱io垂ns瞧a孕re放k例no硬wnTh洞ePh于en查ot壯yp巖eMi勒cr刃oA肚rr規(guī)ayfo瘦rLi燥st難er獄ia(Bi肺OL鑰OG,擋Ha濃yw匆ar膨d,觸C蟲A)強(qiáng)i悟s臉an艘ot義he盆r鴨re顧ce浮nt攪ly災(zāi)i閣nt筆ro鐘du危ce割d劉ki榜t.FD齊A：鑒定頭單核蛾增生息李斯錘特氏降菌的湯試劑衰盒Ta隆bl追e丘3.馳T話es永t肝Ki筍ts守U從se蓮fu蟻l屢in鎖C壞on久fi豈rm土in奶gLi蜘st趕er菌iaIs故ol靜at杯es灰a冷sLi羨st屑er兆iamo余no譯cy世to婚ge略ne瞞sor燦n妨otAc辜cu懶Pr做ob爐eTMLi餓st士er膽iamo星no梳cy殺to悼ge揀ne純scu端lt餡ur到e笛co數(shù)nf志ir乖ma競ti巡壽on密t熟es善t井(G