新課標(biāo)人教版高中生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐知識點(diǎn)復(fù)習(xí)

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1、果酒和果醋的制作

發(fā)酵：利用微生物或其余生物的細(xì)胞在有氧或無氧條件下生殖或累積其代謝產(chǎn)物的過程。

種類：（1）依據(jù)能否需要氧氣分為：需氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵。（2）依據(jù)產(chǎn)生的產(chǎn)物可分為：酒精發(fā)酵、乳酸發(fā)酵、醋酸發(fā)酵等1．酵母菌的細(xì)胞呼吸酶酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大批生殖：C6H12O6+6H2O+6O2→6CO2+12H2O+能量酶酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳：C6H12O6→2CH5OH+2CO能量2．酵母菌發(fā)酵的最正確環(huán)境:酵母菌在有氧和無氧的條件下都能生活

在有氧時(shí)，酵母菌大批生殖，但是起不到發(fā)酵見效；

在無氧時(shí)，生殖速度減慢，但是此時(shí)能夠進(jìn)行發(fā)酵。

在利用酵母菌發(fā)酵時(shí)最好是先通入足夠的無菌空氣在有氧環(huán)境下一段時(shí)間使其生殖，

再間隔氧氣進(jìn)行發(fā)酵。20℃左右最適合酵母菌生殖，酒精發(fā)酵的最正確溫度是在18℃～25℃，

pH最好是弱酸性。

3．醋酸菌好氧性細(xì)菌，當(dāng)缺乏糖源時(shí)和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸。表

酶

達(dá)式為：C2H5OH+O2→CH3COOH+H2；當(dāng)氧氣、糖源都充分時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。醋酸菌生長的最正確溫度

C6H12O6＋2O2——→2CH3COOH＋2CO2＋2H2O是在

30℃～35℃

裝置各部位的作用

充氣口：在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣。排氣口：排出酒精發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的CO2。

出料口：是用來取樣的。

與瓶身相連的長而曲折的膠管：加水后防范空氣中微生物的污染。

該裝置的使用方法：使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)將充氣口連接氣泵，輸入氧氣，酵母菌有氧呼吸時(shí)，產(chǎn)生能量多，可大批生殖；無氧呼吸時(shí)，產(chǎn)生能量少，僅能滿足自己代謝，基本不生殖；所以利用酵母菌進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)時(shí)先進(jìn)行通氣再密封。

流程

優(yōu)選新鮮的水果(如葡萄)→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵

果汁發(fā)酵后酒精的檢驗(yàn)果酒果醋比較組→2mL白酒實(shí)3mol／L的H2SO43滴→振蕩驗(yàn)組→2mL發(fā)酵液混勻→重鉻酸鉀溶液3滴→觀察試管甲→2mL發(fā)酵前液3mol／L的H2SO43滴→振蕩混試管乙→2mL發(fā)酵后液勻→重鉻酸鉀溶液3滴→觀察(1)兩種比較方式都必然依據(jù)單一變量原則。(2)前者是標(biāo)準(zhǔn)比較，后者是自己比較。

1還可以夠夠設(shè)置一組空白比較（2ml蒸餾水）幾種常用發(fā)酵菌種的比較菌種酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌項(xiàng)目生物學(xué)分類真核生物原核生物真核生物原核生物代謝種類異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧生殖方式適合條件下出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖生產(chǎn)應(yīng)用釀酒釀醋制作腐乳制作泡菜發(fā)酵條件先期需氧，后期不需氧向來需氧向來需氧不需氧果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌種及控制條件的比較制作內(nèi)容果酒果醋腐乳泡菜比較項(xiàng)目所用菌種酵母菌醋酸菌主假如毛霉乳酸菌O的有無無氧有氧有氧無氧2最適溫度18℃～25℃30℃～35℃15℃～18℃常溫控制條件時(shí)間控制10～12天7～8天腌制8天左右腌制10天左右其余條件關(guān)閉充氣口合時(shí)充氣控制鹽酒用量控制鹽水比率深入拓展：1、因?yàn)榇姿峋腿樗峋鷮儆谠松铮栽诶眠@兩類微生物時(shí)，其環(huán)境中必然不要加入青霉素等抗生素。

2、發(fā)酵：經(jīng)過微生物技術(shù)的培養(yǎng)來生產(chǎn)大批代謝產(chǎn)物的過程。3、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵||無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵4、在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發(fā)酵過程中,跟著酒精濃度的提升,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒表現(xiàn)深紅色.在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌能夠生長生殖，而絕大多數(shù)其余微生物都因沒法

適應(yīng)這一環(huán)境而遇到限制。

5、控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即便但是

短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為30～35℃，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間縮短，又減少雜菌污染的時(shí)機(jī)。③有兩條門路生成醋酸：

直接氧化和以酒精為底物的氧化。

2、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1、培養(yǎng)基：人們依據(jù)微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同樣需求，配制出供其生長生殖的營養(yǎng)基質(zhì)，

是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

22、培養(yǎng)基依據(jù)物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基頂用作常用的凝固劑，但不但這一種凝固劑）后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，能夠形成肉眼可見的菌落。依據(jù)菌落的特色能夠判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分別和判斷。半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種收藏等。3、依據(jù)成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，此中成分的種類比率明確，常用于微生物的分別判斷。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)。4、依據(jù)培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和判斷培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以控制不需要的微生物生長，促使所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基是依據(jù)微生物的特色，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同樣類其余微生物。5、培養(yǎng)基的化學(xué)成分包含水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、生長因子（部分微生物需要）等。6、碳源：能為微生物的代謝供給碳元素的物質(zhì)。如CO、NaHCO等無機(jī)碳源；糖類、石23油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只好利用有機(jī)碳源。7、氮源：能為微生物的代謝供給氮元素的物質(zhì)。如

單質(zhì)碳不可以夠作為碳源。

-+N、NH、NO、NH（無機(jī)氮源）蛋白2334質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。

8、培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對PH、特別營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。比方，培養(yǎng)乳酸桿

菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中增加維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌

是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要供給無氧的條件

9、無菌技術(shù)：獲取純凈培養(yǎng)物的要點(diǎn)是防范外來雜菌的入侵，要注意以下幾個(gè)方面：①對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行潔凈和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種器具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。③為防范四周環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰周邊進(jìn)行。④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)防范已經(jīng)滅菌辦理的資料器具與四周的物件相接觸。

無菌技術(shù)除了用來防范實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其余外來微生物污染外，還有什么目的？

答：無菌技術(shù)還可以夠有效防范操作者自己被微生物傳染。

、消毒與滅菌的差異

消毒指派用較為平和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的

微生物（不包含芽孢和孢子菌落.芽孢，一種休眠體；孢子，一種生殖細(xì)胞。）。3消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)

藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。

滅菌則是指派用激烈的理化要素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包含芽孢和孢子。

滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

滅菌方法選擇：

①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；

②玻璃器皿、金屬器具等使用干熱滅菌法，所用器材是干熱滅菌箱；

③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器材是高壓蒸汽滅菌鍋。

④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器材是紫外燈。

比較項(xiàng)理化要素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)目芽孢和孢子能否被消滅

消毒較為平和部分生活狀態(tài)的微生物不可以夠

滅菌激烈所有微生物能

制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1）方法步驟：計(jì)算、稱量、熔解、滅菌、倒平板。（融化此后滅菌以前去往需要調(diào)理

2）倒平板操作的步驟：①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速經(jīng)過分焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手馬上蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等候平板冷卻凝

PH）

固，大體需5～10min。此后，將平板倒過來擱置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。純化大腸桿菌（1）微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（2）平板劃線法是經(jīng)過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將齊集的菌種逐步稀釋分別到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，能夠分別到由一個(gè)細(xì)胞生殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞集體，這就是菌落。接種環(huán)第一次灼燒，殺死接種環(huán)上原有的微生物；每次劃線前灼燒，殺死前一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使劃線菌種本源于前一次劃線尾端；劃線結(jié)束灼燒，殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防范污染環(huán)境和傳染操作者。灼燒后冷卻防范接種環(huán)溫度過高殺死菌種。（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，此后將不同樣稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使齊集在一同的微生物分別成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。（5）平板劃線法操作步驟：

4①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。③將試管口經(jīng)過分焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤將試管經(jīng)過分焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一地域劃線的尾端開始往第二地域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五地域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6）涂布平板操作的步驟：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液，滴加到培

養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。

培養(yǎng)基表面菌落顏色、形態(tài)、大小基本一致，符合目的菌特色，說明接種操作成功。

微生物計(jì)數(shù)方法

1、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，利用計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)，但不可以夠劃分活菌與死菌。計(jì)數(shù)板上

2

有1mm×0.1mm的計(jì)數(shù)室，每個(gè)計(jì)數(shù)室400個(gè)小格。

2、活菌計(jì)數(shù)法，在稀釋度足夠高的菌液中齊集在一同的微生物被分別成單個(gè)細(xì)胞，形成

單個(gè)菌落，選擇菌落數(shù)在30-300之間的平板計(jì)數(shù)。菌落數(shù)比活菌實(shí)質(zhì)數(shù)低，因?yàn)楫?dāng)兩

個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一同時(shí)，平板上只觀察到一個(gè)菌落。統(tǒng)計(jì)結(jié)果用菌落數(shù)來表示。

3、濾膜法，飲用水過濾后，濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，計(jì)數(shù)黑色大腸桿菌菌落。

菌種的保存

（1）對于屢次使用的菌種，能夠采納暫時(shí)收藏的方法。

①暫時(shí)收藏方法

將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在適合的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將

試管放入4℃的冰箱中收藏。此后每3～6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。

②弊端：這類方法保存的時(shí)間不長，菌種簡單被污染或產(chǎn)生變異。

（2）對于需要長遠(yuǎn)保存的菌種，能夠采納甘油管藏的方法。

在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。

營養(yǎng)是指生物攝入、利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程。營養(yǎng)物質(zhì)是指保持機(jī)體生命活動(dòng)，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人及動(dòng)物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特別營養(yǎng)物質(zhì)五類。確立培養(yǎng)基制作能否合格的方法：將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2天，無菌落生5長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，不然需要重新制備。培養(yǎng)基的分類和應(yīng)用劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特色用途液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)物理性質(zhì)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、判斷固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物分別、判斷、活菌計(jì)數(shù)天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)構(gòu)成合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確（用化學(xué)成分已分類、判斷知的化學(xué)物質(zhì)配成）培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以選擇培養(yǎng)基控制不需要的微生物的生長，促培養(yǎng)、分別出特定微生物目的用途進(jìn)所需要的微生物的生長鑒別培養(yǎng)基依據(jù)微生物的代謝特色，在培養(yǎng)鑒別不同樣種類的微生物基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品消毒與滅菌的差異比較項(xiàng)目消毒滅菌條件使用較為平和的理化方法使用激烈的理化要素結(jié)果殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包含芽孢微生物（不包含芽孢和孢子）和孢子合用實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣服和手微生物的培養(yǎng)器皿、接種器具和培養(yǎng)基等煮沸消毒法（如在100℃，煮沸5～6min）、常用方法巴氏消毒法（如在80℃，煮15min）；使用灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌酒精、氯氣、石炭酸等化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒三種常用滅菌方法的比較滅菌方法滅菌條件滅菌時(shí)間合用資料或器具灼燒滅菌酒精燈火焰的充分燃燒層直至燒紅接種環(huán)、接種針或其余金屬工具160～170℃1～2h玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）干熱滅菌干熱滅菌箱內(nèi)，和金屬器具等高壓蒸汽滅菌100kPa，121℃15～30min培養(yǎng)基等

3、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)

①優(yōu)選菌株：利用選擇培養(yǎng)基優(yōu)選菌株。6

②測定微生物數(shù)目的常用方法：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。③土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布平板→微生物的培養(yǎng)與觀察→優(yōu)選菌落

尿素：是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素其實(shí)不可以夠直接被農(nóng)作物汲取。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨此后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕?尿素最先是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的

尿素分解菌的分別：尿素分解菌能合成脲酶將尿素分解成氨。氨使培養(yǎng)基的PH高升。以尿素為獨(dú)一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)尿素分解菌，指示劑變紅色。

優(yōu)選菌株

（1）實(shí)驗(yàn)室中微生物的優(yōu)選應(yīng)用的原理

人為供給有益于目的菌株生長的條件（包含營養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)控制或阻截其

他微生物生長。

2）選擇性培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，將贊成特定種類的微生物生長，同時(shí)控制或阻截其余種類微生物生

長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

3）配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)：依據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特色加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。比方，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物能夠選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，能夠選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。

設(shè)置比較：設(shè)置比較的主要目的是除掉實(shí)驗(yàn)組中非測試要素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提升實(shí)

驗(yàn)結(jié)果的可信度。比較實(shí)驗(yàn)是指除了被測試的條件之外，其余條件都同樣的實(shí)驗(yàn)，其作用是比較試驗(yàn)組，除掉任何其余可能原由的攪亂，證明的確是所測試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包含實(shí)驗(yàn)方案，所需儀器、資料、器具和藥品，詳盡的實(shí)行步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。

（1）土壤取樣：同其余生物環(huán)境比較，土壤中的微生物，數(shù)目最大，種類最多。在富含

有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的微生物生長。從富含有機(jī)物、濕潤、pH≈7的土壤中取樣。

鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層取樣。

（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。在實(shí)質(zhì)操作中，

平常采納必然稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲取菌落數(shù)在30~300之間、適于計(jì)數(shù)

的平板。測定土壤中細(xì)菌的數(shù)目，一般采納104105106測定放線菌的數(shù)目，一般采納103104105測定真菌的數(shù)目，一般采納102103104

（3）微生物的培養(yǎng)與觀察

不同樣種類的微生物，常常需要不同樣的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌30~37℃1~2天

放線菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天7每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，采納菌落數(shù)目穩(wěn)準(zhǔn)時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣能夠防范因

培養(yǎng)時(shí)間不足而以致一樓菌落的數(shù)目。一般來說，在必然的培養(yǎng)條件下（同樣的培養(yǎng)基、

獨(dú)一及培養(yǎng)時(shí)間），同種微生物表現(xiàn)出堅(jiān)固的菌落特色。形狀、大小、隆出發(fā)度、顏色

如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，

最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的均勻值

每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M此中，C代表某一稀釋度下平板上生長的均勻菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（

ml），M代表稀釋倍數(shù)

4、菊花的組織培養(yǎng)

一、植物組織培養(yǎng)的基本過程

1、原理：植物細(xì)胞全能性。細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)：基因選擇性表達(dá)的結(jié)果。

2、全能性表達(dá)的條件：離體狀態(tài)和適合環(huán)境條件（如營養(yǎng)物質(zhì)、激素、溫度等）

3、基本過程：離體的植物組織或細(xì)胞→愈傷組織→叢芽、生根（試管苗）→圓滿植株

4、愈傷組織：擺列松弛而無規(guī)則，高度液泡化的呈無定型狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。

二、菊花的組織培養(yǎng)

、資料采納：未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。

2、營養(yǎng)：MS培養(yǎng)基，一般增加植物激素(濃度、使用次序、用量比率都會(huì)影響實(shí)驗(yàn))。

3、過程：制備MS培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→培養(yǎng)→移栽→種植

細(xì)胞分化：在生物個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)堅(jiān)固性差其余

過程。

愈傷組織的細(xì)胞擺列松弛而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。

脫分化（去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。

再分化：愈傷組織連續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又能夠重新分化成根或芽等器官的過程。

擁有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都擁有發(fā)育成圓滿個(gè)體的能力，即每個(gè)生物細(xì)胞都擁有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中其實(shí)不表現(xiàn)出來，這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間條件下，經(jīng)過基因的選擇性表達(dá)，構(gòu)成不同樣組織和器官。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有：實(shí)現(xiàn)優(yōu)異品種的迅速生殖；培養(yǎng)脫毒作物；制作人工種子；培

育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。

細(xì)胞分化是一種長遠(yuǎn)性的變化，它有什么生理意義？：使多細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功

能趨勢特意化，有益于提升各種生理功能的效率。

比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織種類細(xì)胞本源細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞擺列細(xì)胞去向根尖受精卵正方形無液泡親近分化成多種分生組織細(xì)胞組織愈傷組織高度分化細(xì)胞無定形高度液泡化松弛再分化成新個(gè)體同樣點(diǎn)都經(jīng)過有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖影響植物組織培養(yǎng)的條件8

資料：不同樣的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差異很大。植物的種類、資料的年齡和保存時(shí)間的長短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作資料。一般來說，簡單進(jìn)行無性生殖的植物簡單進(jìn)行組織培養(yǎng)。采納生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，簡單引誘脫分化和再分化。

營養(yǎng)：離體的植物組織和細(xì)胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特別，需要配制適合的

培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，此中含有的大批元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。

激素：植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的要點(diǎn)性激素。在生長素存在的狀況下，細(xì)胞分裂素的作用表現(xiàn)增強(qiáng)趨勢。在培養(yǎng)基中需要增加生長素

和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度（依據(jù)生長素作用的雙重性：低濃度促使生長，高濃度控制生長，甚至殺死植物）、使用的先后次序、用量的比率等都影響結(jié)果。

生長素／細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果

使用次序?qū)嶒?yàn)結(jié)果

先生長素，比值高時(shí)促根分化，有益于分裂但不分化抑芽形成后細(xì)胞分裂素先細(xì)胞分裂素，比值低時(shí)促芽分化，細(xì)胞既分裂也分化抑根形成后生長素同時(shí)使用分化頻率提升比值適中促使愈傷組織生長+環(huán)境條件：PH、溫度、光等環(huán)境條件。不同樣的植物對條件的要求常常不同樣。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在5.8左右，溫度控制在18~22℃，并且每日用日光燈照耀12h.1、菊花莖的組織培養(yǎng)與月季的花粉培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目菊花莖的組織培養(yǎng)理論依據(jù)細(xì)胞的全能性基本過程脫分化、再分化影響要素選材、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照等資料采納生長旺盛的嫩枝比pH5.8較溫度18～22℃光照每日光照12h

制備培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→培養(yǎng)

操作流程→移栽→種植9植物組織培養(yǎng)技術(shù)與微生物培養(yǎng)技術(shù)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)微生物培養(yǎng)在無菌條件下，將離體的植物體器官或組織接種在無菌條件下，在適合的營養(yǎng)和環(huán)含義在適合的培養(yǎng)基進(jìn)步行培養(yǎng)，最后發(fā)育成圓滿植境條件下對微生物的培養(yǎng)物體培養(yǎng)基成分水、礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、有機(jī)增加物和植水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等物激素等特別操作要求嚴(yán)格控制無菌操作，在培養(yǎng)過程中要更換培養(yǎng)嚴(yán)格控制無菌操作，整個(gè)培養(yǎng)過程基，調(diào)理細(xì)胞分裂素和生長素的比率無需更換培養(yǎng)基

注：在這兩種技術(shù)中均需要必然的營養(yǎng)物質(zhì)，但營養(yǎng)物質(zhì)的劃分標(biāo)準(zhǔn)不同樣。

4、操作流程配制MS固體培養(yǎng)基：配制各種母液：將各種成分按配方比率配制成的濃縮液（培養(yǎng)基母液）。·使用時(shí)依據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量，并加蒸餾水稀釋。·配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大批元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1000毫升?！ぴ诰栈ńM織培養(yǎng)中，能夠不增加植物激素原由是菊花莖段組織培養(yǎng)比較簡單?！缇翰杉{的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌?！S培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基比較，MS培養(yǎng)基有哪些特色？大批元素和微量元素供給植物細(xì)胞所必要的無機(jī)鹽；蔗糖供給碳源，保持細(xì)胞浸透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主假如為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝門路遇到必然影響后所產(chǎn)生的特別營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需供給大批無機(jī)營養(yǎng)。外植體的消毒外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。采納菊花莖段時(shí)，要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少量洗衣粉，用軟刷輕輕洗刷，洗刷后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中搖動(dòng)2~3次，連續(xù)6~7s，馬上將外植體拿出，在無菌水中沖洗。拿出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中1~2min。拿出后，在無菌水中最少?zèng)_洗3次，漂洗消毒液。注意：對外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，就要考慮藥劑的消毒見效，又要考慮植物的耐受能力。接種：接種過程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端向上，每個(gè)錐形瓶接種7～8個(gè)外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似，操作步驟同樣，并且都要求無菌操作。培養(yǎng)：應(yīng)該放在無菌箱中進(jìn)行，并按期進(jìn)行消毒，保持適合的溫度（18~22℃）和光照（12h）10

移栽：栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾天，此后用流水沖洗根部培養(yǎng)基。此后將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天種植。

種植：外植體在培養(yǎng)過程中可能會(huì)被污染，原由有外植體消毒不完好；培養(yǎng)基滅菌不完好；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。

果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用

（一）基礎(chǔ)知識

1．植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要構(gòu)成成分有纖維素和果膠。并且二者不溶于水，在果

汁加工中，既影響出汁率，又使果汁渾濁。

2．果膠酶的作用是能夠?qū)⒐z分解成可溶性的半乳糖醛酸，崩潰植物的細(xì)胞壁及胞間

層，并且使果汁變得澄清。

3．果膠酶是一類酶總稱，包含多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶等。

4．果膠酶的本源：植物、霉菌、酵母菌和細(xì)菌。

5．影響酶活性的要素包含：溫度、PH、和酶的控制劑等。

6．酶的活性是指酶催化必然化學(xué)反應(yīng)的能力。其高低用必然條件下酶所催化的某一化

學(xué)反應(yīng)的速度來表示。

7．酶的反應(yīng)速度是指單位時(shí)間內(nèi)，單位體積中反應(yīng)物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。

8．果膠酶的用量：生產(chǎn)果汁時(shí)，為了使果膠酶獲取充分的利用，需要控制好酶的用量，

用量的多少常要經(jīng)過實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來研究。

（二）．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

〔設(shè)計(jì)一〕研究溫度對酶活性的影響

1．進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前要解決的幾個(gè)問題：

①此實(shí)驗(yàn)的自變量是溫度；依據(jù)單一變量原則，你應(yīng)保證各實(shí)驗(yàn)組同樣的變量有PH、

底物濃度、底物量、實(shí)驗(yàn)器材、酶的用量等等。

②你準(zhǔn)備如何測定果膠酶的活性，即你要觀察的因變量是出汁量和果汁的澄清度。

③如何控制實(shí)驗(yàn)要求的溫度梯度？各個(gè)燒杯內(nèi)加入不同樣溫度的水

2．設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)（1）實(shí)驗(yàn)原理：在一恒定PH下，經(jīng)過改變溫度來確立最適合的溫度（2）實(shí)驗(yàn)步驟：①攪拌器攪拌制蘋果泥。②將分別裝有蘋果泥和果膠酶的試管在恒

溫水浴中保溫。

③加入果膠酶反應(yīng)一段時(shí)間。④過濾果汁。并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。⑤改變不同樣的溫度后

重復(fù)上邊的實(shí)驗(yàn)。

3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果、結(jié)論：

〔設(shè)計(jì)二〕研究PH對酶活性的影響111．進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前要解決的幾個(gè)問題：①你準(zhǔn)備如何設(shè)置pH梯度，又將如何控制實(shí)驗(yàn)要求

的pH？56789采納不同樣的試管，調(diào)至所需PH

②此實(shí)驗(yàn)應(yīng)選一個(gè)適合的溫度進(jìn)行水浴加熱，并且要控制好其余的要素。

2．設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

可參照溫度對酶活性的影響實(shí)驗(yàn)，作相應(yīng)的改動(dòng)。

〔設(shè)計(jì)三〕研究果膠酶的用量

1．進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前要解決的幾個(gè)問題：

①此研究實(shí)驗(yàn)是建立在溫度和PH對果膠酶活性影響的基礎(chǔ)之上的。此時(shí)，研究的變量

是酶的用量，其余要素保持不變。

②實(shí)驗(yàn)時(shí)能夠配制不同樣濃度的果膠酶溶液，也能夠只配制同樣濃度的果膠酶溶液，然

后使用不同樣的體積即可，但必要保證反應(yīng)液的用量必然同樣，不然影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確

性。

．設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

可參照前兩個(gè)研究實(shí)驗(yàn)，作相應(yīng)的改動(dòng)。

血紅蛋白的提取和分別

一、實(shí)驗(yàn)原理

蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì)：形狀、大小、電荷性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)、親和力等千差萬別，由此提取和分別各種蛋白質(zhì)。

1．凝膠色譜法（分配色譜法）：

（1）原理：分子量大的分子經(jīng)過多孔凝膠顆粒的縫隙，行程短，流動(dòng)快；分子量小

的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，行程長，流動(dòng)慢。

（2）凝膠資料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。

3）分別過程：

混雜物上柱→洗脫→大分子流動(dòng)快、小分子流動(dòng)慢→采集大分子→采集小分子

洗脫：從色譜柱上端不停注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)。

4）作用：分別蛋白質(zhì)，測定生物大分子分子量，蛋白質(zhì)的脫鹽等。12

2．緩沖溶液

（1）原理：由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽構(gòu)成（如

等），調(diào)理酸和鹽的用量，可配制不同樣pH的緩沖液。

H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4

（2）緩沖液作用：抵制外界酸、堿對溶液pH的攪亂而保持pH堅(jiān)固。

3．凝膠電泳法：

1）原理：不同樣蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同樣，在電場中遇到的作用力大小、方向、阻力不同樣，以致不同樣蛋白質(zhì)在電場中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同樣。

（2）分別方法：瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。

（3）分別過程：在必然pH下，使蛋白質(zhì)基團(tuán)帶上正電或負(fù)電；加入帶負(fù)電荷多的SDS，形成“蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物”，使蛋白質(zhì)遷徙速率僅取決于分子大小。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1．樣品辦理

①紅細(xì)胞的沖洗

沖洗紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，采集的血樣要及時(shí)采納低速短時(shí)間隔心分別紅細(xì)

胞，此后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿，將基層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯，再加入

五倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌10min，低速短時(shí)間隔心，這樣重復(fù)沖洗三次，直

至上清液中沒有黃色，表示紅細(xì)胞已沖洗潔凈。

②血紅蛋白的開釋

在蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂開釋出血紅蛋白。

注：加入蒸餾水后紅細(xì)胞液體積與原血液體積要同樣。加入甲苯的目的是溶解細(xì)胞膜，有益于血紅蛋白的開釋和分別。

2．粗分別

①分別血紅蛋白溶液

將攪拌好的混雜溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層，

第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的積淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋

白的水溶液，第4層是其余雜質(zhì)的暗紅色積淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除掉之溶性積淀層，于分液漏斗中靜置片晌后，分出基層的紅色透明液體。

②透析

取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量的濃度

為20mmol/L的磷酸緩沖液中，透析12h。透析能夠去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)，或用于更換樣品的緩沖液。13

3．純化

調(diào)理緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢降落到與凝

↓膠面平齊，關(guān)閉出口。

加入蛋白質(zhì)樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞挪動(dòng)加到色譜柱的頂端。加樣后，

∣打開下端出口，使樣品浸透凝膠床內(nèi)，等樣品圓滿浸透凝膠層后，

↓關(guān)閉出口。

調(diào)理緩沖液面：加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適合高度

↓

洗脫：連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進(jìn)行洗脫。

↓

采集分裝蛋白質(zhì)：待紅色的蛋白質(zhì)湊近色譜柱底端時(shí)，用試管采集。

純度判斷SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做）三、注意事項(xiàng)

電泳技術(shù)

電泳技術(shù)就是在電場的作用下，利用待分別樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子自己

大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同樣的遷徙速度，從而達(dá)到對樣品進(jìn)行分別、判斷或提純的目的。

紅細(xì)胞的沖洗

假如分層不顯然，可能是沖洗次數(shù)少、未能除掉血漿蛋白的原由。其余，離心速度

過高和時(shí)間過長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同積淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)

血紅蛋白的提取純度。

3．如何檢測凝膠色譜柱的裝填能否成功

因?yàn)槟z是一種半透明的介質(zhì)，所以能夠在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠能否裝填得均勻。

其余，還可以夠夠加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶挪動(dòng)的狀況。假如色帶均勻、狹小、平坦，說明凝膠色譜柱的性能優(yōu)異。假如色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消

除氣泡，除掉不了時(shí)要重新裝柱。

4．為何凝膠的裝填重要密、均勻？

假如凝膠裝填得不夠親近、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無效的縫隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些縫隙中經(jīng)過，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分其余見效。

5．開水浴辦理加入洗脫液的濕凝膠的目的

14不但節(jié)約時(shí)間，還可以夠除掉凝膠中可能帶有的微生物和除掉凝膠內(nèi)的空氣。6．G-75“G”代表凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分別范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5g。7．裝填完后，馬上用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填親近8．加入檸檬酸鈉有何目的？為何要低速、短時(shí)離心？為何要緩慢攪拌？防范血液凝固；防范白細(xì)胞積淀；防范紅細(xì)胞破