一種靶向復(fù)合體的訂書釘肽可抑制癌細(xì)胞侵襲

一種靶向復(fù)合體的訂書釘肽可抑制癌細(xì)胞侵襲第一頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四第二頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四12344IntroductionMaterialsandMethodsResultsDiscussionContents第三頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四1.Introduction綜合征蛋白家族成員（WASF）包括WASF1，WASF2和WASF3，這些成員與細(xì)胞運(yùn)動有關(guān)，如創(chuàng)傷修復(fù)（woundhealing）,神經(jīng)元遷移（neuronalmigration）,趨化運(yùn)動（chemotaxis）,免疫細(xì)胞激活（immunecellactivation）。機(jī)制：WASF蛋白的C末端攜帶VCA粒子可與單體肌動蛋白或ARP2/3復(fù)合物結(jié)合，從而促進(jìn)肌動蛋白的復(fù)合及蛋白骨架的重組。WASF的基因在健康細(xì)胞中處于靜默狀態(tài)，經(jīng)過酪氨酸殘基的磷酸化作用或與Rac蛋白結(jié)合后，WASF被活化，解除其構(gòu)象限制。第四頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四WASF3的基因可促進(jìn)細(xì)胞移動、侵襲和新陳代謝，在高度侵襲性的乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞中可高水平的持續(xù)性表達(dá)。1、調(diào)節(jié)KISS1,ZEB1,及miRNA-200s等蛋白2、被JAK2,HSP70,ABL,及HIF1蛋白調(diào)節(jié)3、與ATAD3A線粒體蛋白相互作用從而調(diào)節(jié)它在線粒體膜上的穩(wěn)定性WASF3與其它蛋白相互作用形成CYFIP1–NCKAP1二聚體(主要)或ABI2–HSPC300–WASF三聚體發(fā)揮作用，第五頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四“stapledpeptides”：WASFHelixMimics(WAHM)優(yōu)點(diǎn)：化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，細(xì)胞透性強(qiáng)，抗蛋白酶降解缺點(diǎn)：近來才被應(yīng)用于生物治療學(xué)方面，仍面臨挑戰(zhàn)，但有些研究已進(jìn)入I期臨床試驗階段。研究人員證明stapledpeptides可阻斷WASF3與CYFIP1之間的相互作用從而能夠抑制WASF3的功能。第六頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四2.

MaterialsandMethods2.1.Stapledpeptidesynthesis：standardFmocsolidphasepeptidesynthesisMw：2291.4(expected：2291.8),Mw：2305.2(expected：2305.8),Mw：2291.4(expected：2291.8),Mw：2305.8(expected：2305.8),2.2.MolecularreagentsandconstructsshRNAs,shCYFIP1,WASF2andWASF3antibodies,antibodiesagainstCYFIP1,NCKAP1,WASF1,Rac1,andRac2,antibodiesagainstPY20andb-actin,HSP90inhibitor17-AAG.第七頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四Celllines:MDA-MB-231cells,DU145cellsstandardassays:Lentiviraltransduction,cellproliferationassays,wound-healingassays,Transwellinvasionassays,Westernblotting,flowcytometry,andreal-timeRT-PCRanalysis2.3.Celllinesandstandardassays2.4.Quantitationoffilamentousactin2.5.Immunoprecipitationassays2.6.DetectionofMMP-9secretioninculturesupernatantbyELISAassays2.7.Experimentalmetastasisassays第八頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四3.1.LossofCYFIP1proteinleadstoWASF3instability,resultinginsuppressionofinvasion3.

Results第九頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四Thesedatasuggestthatdisruptingtheprotein–proteincomplexinvolvingCYFIP1couldleadtosuppressionofinvasionbyaffectingWASF3function.第十頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四3.2.RoleofWASFfamilymembersininvasionandmetastasis第十一頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四第十二頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四Theseobservationssuggestthat,althoughtheWASFproteinshavebeenimplicatedincellmovement,onlyWASF3isparticularlyandspecificallyassociatedwithinvasionandmetastasisofcancercells.第十三頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四3.3.TargetingtheCYFIP1–WASFinteractionwithstapledpeptides第十四頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四TodeterminewhetherthestapledpeptidesformedacomplexwithWASF3withinthecells,MDA-MB-231cellswereexposedtobiotinylatedWAHM1andWAHM2for6hours,afterwhichthecellswerelysedandpulldownassayswereperformedusingavidin-coatedbeads.第十五頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四3.4.WAHM1/2peptidessuppresscancercellmotilityandinvasion第十六頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四Thus,targetingtheCYFIP1–WASF3interactionwithstapledpeptidesaffectscancercellcytoskeletonorganization,motility,andinvasion,consistentwithknockdownofWASF3functionachievedbyothermeans.第十七頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四ShRNAknockdownofCYFIP1leadstoWASF3proteindestabilization(Fig.1).Inthestapledpeptidetreatedcells,however,therewasnochangeinWASF3proteinlevelscomparedwithcontroltreatedcells(Fig.3andSupplementaryFig.S3).Thus,targetingtheWASF3complexwithWAHM1/2doesnotleadtoitsdegradationasseenfollowinggeneticknockdownofanyofthethreeWASFproteins,eventhoughinvasionandmigrationaredramaticallyaffected.3.5.WAHMtreatmentleadstolossofWASF3activation第十八頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四ThesedatasuggestthattheinactiveformofWASF3ismoresusceptibletodegradationfollowingdisruptionoftheCYFIP1–WASF3complex.第十九頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四3.6.WAHM1/2suppressesMMP9secretionthroughinactivationofWASF3第二十頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四3.7.WAHMpeptidesdisruptthebindingofRac1/2totheWASF3complex第二十一頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四4.1.研究發(fā)現(xiàn)WASF3蛋白能夠促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲，科學(xué)家們通過一種訂書釘肽阻斷該蛋白與另外一個幫助其維持功能的蛋白的相互作用，發(fā)現(xiàn)能夠抑制具有高度侵襲性的人類乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。4.2.CYFIP1蛋白↓，WASF3基因↓，細(xì)胞侵襲能力↓，證明破壞此WRC復(fù)合體對其作用的影響。4.3.用WAHM肽（可靶向CYFIP1-WASF3α螺旋界面）處理細(xì)胞并不影響WASF3基因水平，而是通過影響WASF3的磷酸化而發(fā)揮作用。4.4.Rac鍵合作用不會破壞WRC復(fù)合體，但會導(dǎo)致其構(gòu)象變化WAHM肽與WRC復(fù)合體相互作用影響Rac鍵合作用。4.5.與細(xì)胞侵襲相關(guān)的信號通路的下調(diào)也與WASF3基因有關(guān)，例如由于WASF3所致的KISS1和MMP-9水平的變化，從而影響細(xì)胞活動。4.

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