感染性疾病的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)-遺傳學(xué)疾病的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)-醫(yī)學(xué)院課件

感染性疾病分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)遺傳性疾病的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

感染性疾病是由特定病原體感染機(jī)體后所產(chǎn)生的一類疾病。病原體包括病毒、細(xì)菌、原蟲、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體、放線菌和寄生蟲等。

可采用微生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)和血液學(xué)的方法對這些病原體進(jìn)行檢測，但是這些方法受靈敏度和特異性的限制，在明確病因、潛在感染、早期診斷以及對病原體進(jìn)行分類、分型鑒定等方面還存在著較大的缺陷。

隨著分子生物學(xué)的突破性發(fā)展以及相關(guān)技術(shù)的進(jìn)步，優(yōu)于傳統(tǒng)診斷方法的分子診斷技術(shù)在疾病早期診斷、療效監(jiān)測、耐藥基因分析等凸顯優(yōu)勢，并被廣泛應(yīng)用于病原生物感染性疾病的檢測中。第十章

病毒病的分子生物學(xué)檢驗(yàn)一、病毒感染的一般性檢出策略一般性檢出策略，只能提供是否存在某種病毒感染，通過常用核酸雜交或PCR技術(shù)直接檢出病原體的核酸，是快速診斷機(jī)體有無病毒感染的首選方法?？梢愿鶕?jù)病毒本身的保守序列設(shè)計(jì)PCR引物或制備特異性探針。第一節(jié)病毒病分子生物學(xué)檢驗(yàn)策略二、病毒感染的完整性檢出策略

完整性檢出策略，不僅對病原體的存在與否做出明確判斷，同時(shí)能夠診斷出病毒攜帶者和潛在感染者，并能對病毒進(jìn)行拷貝數(shù)測定、基因分型（包括亞型）檢測和耐藥性鑒定。常采用核酸雜交、PCR、基因芯片和DNA測序等技術(shù)。第二節(jié)

乙型肝炎病毒的分子生物學(xué)檢驗(yàn)乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）是引起病毒性肝炎的主要病原體之一。根據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì)，全球約有3.5億乙肝病毒攜帶者，我國約50％-70％的人群感染過乙肝病毒，其中乙肝病毒攜帶者已超過1.3億，肝癌發(fā)病率也在增加。HBV感染后可以引起急性、慢性病毒肝炎，而且與肝硬化和肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展有密切的關(guān)系。HBVDNA是帶有單鏈區(qū)的環(huán)狀雙鏈DNA分子，是已知可感染人類最小的DNA病毒?；蚪M長為3.2k,HBV的兩條鏈長度不等。長鏈為負(fù)鏈L(-)：攜帶有病毒全部的編碼信息，模板編碼病毒蛋白；短鏈為正鏈S(+)：在不同的分子中長度不等，約負(fù)鏈的50%～100%。乙型肝炎病毒基因組結(jié)構(gòu)一、乙型肝炎病毒的基因組結(jié)構(gòu)特征HBVDNA為了能在細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立復(fù)制，其編碼區(qū)有廣泛的重疊，以擴(kuò)允其編碼容量。多個(gè)ORF可讀碼2次以上，編碼2個(gè)以上蛋白質(zhì)。HBV基因組負(fù)鏈DNA核苷酸序列上含有6個(gè)可讀框（ORF)，其中S、C、P、X4個(gè)ORF是早已公認(rèn)的。2、C基因區(qū)1、S基因區(qū)S基因區(qū)分為：前S1區(qū)、前S2區(qū)和S區(qū)。編碼外膜蛋白，前S區(qū)與病毒的嗜肝性有關(guān)。其中S基因編碼外膜主蛋白（即S蛋白）是乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的主要成分。C基因區(qū)分為前C區(qū)和C區(qū)兩部分。C區(qū)由459個(gè)核苷酸組成，編碼產(chǎn)物為183個(gè)氨基酸殘基組成的多肽序列，稱為乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）；由前C基因和C區(qū)編碼212氨基酸殘基組成的多肽稱為乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）。3、P基因區(qū)4、X基因區(qū)是HBVDNA中最大的一個(gè)ORF，與其他基因區(qū)均有重疊，編碼產(chǎn)物是乙型肝炎病毒DNA的多聚酶蛋白(HBVDNAP）。通過研究P基因的結(jié)構(gòu)與功能，可進(jìn)一步探索抗HBV治療的新方法。是HBVDNA中最小的一個(gè)ORF，編碼產(chǎn)物為x蛋白(HBxAg)。可能是一種反式激活因子，與病毒基因組的表達(dá)調(diào)控及HBVDNA的整合有關(guān)。x蛋白所誘生的抗體常見于原發(fā)肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)。A(n)mRNAcccDNAHBsAg

包膜負(fù)鏈DNA包裹后的前基因

mRNA傳染性HBV病毒顆粒傳染性HBV病毒顆粒部分雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶肝細(xì)胞二、乙型肝炎病毒的分子生物學(xué)檢測方法（一）乙型肝炎病毒DNA的檢驗(yàn)HBVDNA是病毒復(fù)制和傳染性的直接標(biāo)志。定量檢測HBVDNA對于判斷病毒復(fù)制程度、傳染性大小、抗病毒藥物療效等有重要意義。cccDNA半衰期長，在體內(nèi)難以清除，因此檢測cccDNA對于了解病毒的復(fù)制和感染有同樣的價(jià)值。1、PCR法

傳統(tǒng)PCR方法檢測HBVDNA的靈敏度可以達(dá)到ng級水平，檢測結(jié)果能直接反應(yīng)HBV病毒的復(fù)制程度，為臨床提供從分子水平上對病原體進(jìn)行診斷提供依據(jù)。2、核酸分子雜交

將待測標(biāo)本點(diǎn)狀加樣于硝酸纖維素薄膜上，與標(biāo)記的HBVDNA寡核苷酸探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，從而檢測待測標(biāo)本中是否存在HBVDNA。HBV-DNA常用的分子生物學(xué)檢驗(yàn)方法以下不能對探針進(jìn)行標(biāo)記的物質(zhì)是？A：

生物素B：

多糖C：

磷32D：地高辛3、熒光定量PCR法熒光定量PCR法的應(yīng)用，可以在在進(jìn)行HBVDNA檢測的同時(shí)使其進(jìn)行相對的量化，這對于乙肝患者體內(nèi)HBV的復(fù)制及傳染性有更直接的了解，能準(zhǔn)確地反映HBVDNA的復(fù)制水平、病程變化和治療恢復(fù)情況等。4、支鏈DNA技術(shù)(bDNA技術(shù))

bDNA技術(shù)的最大特點(diǎn)是對目標(biāo)核酸直接進(jìn)行檢測，放大倍數(shù)確定，穩(wěn)定性及重復(fù)性高。用bDNA信號放大系統(tǒng)檢測標(biāo)本中的核酸時(shí)，靶核酸本身不被擴(kuò)增，而是通過多個(gè)探針組成逐級信號放大，以檢測核酸。合成3個(gè)探針和bDNA分子，3個(gè)探針分別稱為捕獲探針、靶探針1和靶探針2。將捕獲探針固相化在微孔板上，靶探針1可分別與待測核酸及固相化的探針雜交，而靶探針2可分別與待測核酸及bDNA雜交。這樣，在雜交反應(yīng)完成后，就形成了固相~捕獲探針~靶探針1~待測序列~靶探針2~bDNA復(fù)合物，借助酶的催化反應(yīng)就能定量檢測待測核酸的含量。其基本原理為：該系統(tǒng)采用特異的RNA探針與靶分子HBVDNA

雜交形成RNA-DNA雜交分子。多個(gè)RNA-DNA雜交分子用通用抗體捕獲于微孔中，然后采用偶聯(lián)有堿性磷酸酶的多克隆抗體檢測雜交分子（該過程產(chǎn)生信號放大）。偶聯(lián)的堿性磷酸酶采用發(fā)光底物來檢測。其信號可以被放大3000倍，檢測限為4.7×103copies/ml。5、雜交捕獲系統(tǒng)根據(jù)HBV高度保守的特異性基因序列設(shè)計(jì)寡核苷酸探針制備基因芯片，將待測病人的樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，雜交結(jié)果經(jīng)掃描儀讀數(shù)并輸出圖像，然后通過計(jì)算機(jī)分析，從而檢測病人是否有病毒感染、感染病毒的種類。6、基因芯片技術(shù)

（二）乙型肝炎病毒的基因分型HBV基因序列差異的多少，可將HBV劃分為不同的基因型，至今為止已發(fā)現(xiàn)A、B、C、D、E、F、G、H共8種基因型：A型主要存在于白人，B型和C型主要存在于亞洲人群E型主要存在于西非F型僅見于中南美洲的土著人G型和H型很少見不同基因型序列長度不同，主要是前S1區(qū)的不同。我國流行的主要是B和C基因型，長江以北以C型為主，長江以南以B型為主，另又少量的A型、D型和混合型。西北和西南尤其是西北有較高比例的D型1、序列特異引物PCR法（PCR-SSP）2、PCR-RFLP法3、線性探針反向雜交法（LiPA）4、基因序列分型方法（SBT）5、基因芯片法6、PCR微板核酸雜交酶聯(lián)免疫反應(yīng)法（PCRmnh- ELISA）目前對HBV進(jìn)行基因分型的方法主要有：

1、PCR-SSP12345678PCR12345678引物特異性2、PCR-RFLP法3、線性探針反向雜交法（LiPA）常用的抗HBV藥物為核苷（酸）類似物，如拉米夫定、阿德福韋等。拉米夫定抗病毒治療的靶點(diǎn)在HBVDNAP的逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)。用藥機(jī)制：核苷（酸）類似物與HBVDNAP的自然底物（dNTP）競爭性結(jié)合酶的結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致HBVDNA合成終止，達(dá)到抑制HBV復(fù)制的目的。因此與DNAP結(jié)合力的強(qiáng)弱決定了該類藥物的療效?？顾帣C(jī)制：當(dāng)HBVDNAP氨基酸序列改變并影響到其空間結(jié)構(gòu)變化時(shí)，使HBVDNAP與核苷（酸）類似物結(jié)合能力明顯下降，于是產(chǎn)生耐藥性。（三）乙型肝炎病毒的耐藥性分析HBVYMDD變異耐藥機(jī)制第552位的甲硫氨酸（M）被纈氨酸（V）或異亮氨酸（I）替代后，使此側(cè)鏈縮短，結(jié)合位點(diǎn)變大，不在適合拉米夫啶結(jié)合而耐藥。Met--------ATGValIle----------------GTGATTYMDDYVDDYIDD1、SBT法是最直接最有效的檢測點(diǎn)突變的方法，可以對單一位點(diǎn)或者對多位點(diǎn)變異進(jìn)行檢測，結(jié)果可靠。2、PCR-RFLP法

分別設(shè)計(jì)探針對YMDD野生型和突變型特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切電泳，通過酶切圖譜鑒別HBV野生株和變異株。3、線性探針反向雜交法（LiPA）是一種用于拉米夫定和阿德福韋誘導(dǎo)HBVDNAP基因突變的檢測方法，利用逆轉(zhuǎn)錄酶基因型雜交探針檢測野生株、突變株逆轉(zhuǎn)錄酶編碼區(qū)內(nèi)多態(tài)性密碼子。4、熒光定量PCR方法（Real-timeRCR）確定探針特定的Tm值來區(qū)分是否突變

YIDDYMDDYVDD46.91℃54.64℃50.74℃A.加熱變性時(shí)DNA溶液A260達(dá)到最大值一半時(shí)的溫度稱為熔解溫度(Tm)B.加熱變性時(shí)DNA溶液A260達(dá)到最大值時(shí)的溫度稱為熔解溫度(Tm)C.A+T比例越高，Tm值越高D.以上都不對Tm值？三、分子生物學(xué)檢驗(yàn)的臨床意義1、病毒載量檢測HBVDNA的檢測是判斷HBV復(fù)制水平和傳染性強(qiáng)弱的直接標(biāo)志。對病毒載量進(jìn)行測定，可用于確定感染者感染程度，DNA拷貝數(shù)越高，病毒復(fù)制越活躍，傳染性超強(qiáng)，肝臟損害和肝臟組織炎癥反應(yīng)可能越重。HBV基因型與HBV流行病學(xué)特點(diǎn)、HBV標(biāo)志物的表達(dá)、致病性、乙型肝炎的病程、轉(zhuǎn)歸及對藥物的敏感性有關(guān)。2、病毒分型檢測HBV耐藥性的檢測在臨床上主要是對HBVDNA多聚聚P基因的檢測，即鑒別是野生型(YMDD)還是存在耐藥突變型(YVDD或YIDD)檢測結(jié)果可為抗病毒藥物治療中HBV耐藥性產(chǎn)生提供依據(jù)。拉米夫定耐藥突變主要集中在552位氨基酸的YMDD→YVDD/YIDD，并且M552V是拉米夫定耐藥突變的主要形式，可導(dǎo)致病毒復(fù)制反彈，HBVDNA及ALT水平升高。目前,YMDD的檢測技術(shù)雖多,但尚無”金標(biāo)準(zhǔn)”。3、耐藥突變檢測基因組結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)檢測基因分型檢測耐藥性檢測HBV部分單鏈區(qū)環(huán)狀雙鏈DNAPCR、核酸雜交，雜交捕獲法，基因芯片、熒光定量PCR等PCR-SSP、PCR-RFLP、反向雜交基因芯片SBT、PCR-RFLP、線性探針反向雜交HCV單鏈正鏈RNART-PCR、SBT、PCR-RFLP、PCR-SSOHPV雙鏈閉環(huán)DNA核酸雜交、PCR（多重PCR、realtime-PCR）核酸雜交、PCR（多重PCR、realtime-PCR）HIV雙鏈RNA（正義RNA）RT-PCRSBT、PCR-RFLP、基因芯片、多重PCR、DEIA流感病毒單鏈RNA（負(fù)鏈RNA）RT-PCR、多重PCR、PCR-RFLPPCR、SBT病毒病的分子生物學(xué)檢驗(yàn)第十一章

細(xì)菌感染的分子生物學(xué)檢驗(yàn)細(xì)菌感染性疾病分子生物學(xué)檢驗(yàn)的意義1、不易培養(yǎng)的病原菌（營養(yǎng)苛求菌）難以培養(yǎng)的病原菌（生長緩慢）2、鑒定病原菌（特異的分子標(biāo)志物）3、檢測病原菌的耐藥基因，鑒別耐藥株4、基因分型，流行株分型一、細(xì)菌感染的一般性檢出策略細(xì)菌感染性的分子生物學(xué)檢驗(yàn)的一般性檢出就是以感染病原體的特異核酸序列作為檢測目標(biāo)序列，利用分子生物學(xué)技術(shù)對目標(biāo)序列進(jìn)行檢測，從而直接判斷有無細(xì)菌感染和是何種病原體感染。第一節(jié)細(xì)菌感染的分子生物學(xué)檢驗(yàn)策略二、細(xì)菌感染的完整性檢出策略完整性檢出策略，即不僅對病原體作出快速準(zhǔn)確診斷，還需要對其進(jìn)行分型（包括亞型）和耐藥性等方面的檢測，盡可能地為臨床診療提供更為詳盡的細(xì)菌病原體的相關(guān)信息。第二節(jié)細(xì)菌感染的廣譜分子生物學(xué)檢測一、16SrRNA基因序列分析鑒定細(xì)菌16SrRNA為核糖體的RNA的一個(gè)亞基，16SrDNA就是編碼該亞基的基因。細(xì)菌rRNA按沉降系數(shù)分為3種，分別為5S、16S和23SrRNA。16SrDNA(核糖體RNA)是細(xì)菌染色體上編碼rRNA相對應(yīng)的DNA序列，存在于所有染色體基因中。1、細(xì)菌16srRNA基因結(jié)構(gòu)特征多拷貝多信息長度適中設(shè)計(jì)通用引物 PCR擴(kuò)增擴(kuò)增產(chǎn)物序列分析，測序及可變區(qū)進(jìn)行分子雜交，可鑒定病原菌種類新生兒敗血癥新生兒化膿性腦膜炎慢性前列腺炎2、16srRNA基因序列分析鑒定細(xì)菌原理3、細(xì)菌16S-23SrRNA基因序列分析鑒定細(xì)菌16S-23SrRNA基因位于16SrRNA基因和23SrRNA基因之間的區(qū)間序列，具有高度變異及相對保守性，對于菌種間的鑒別，還可以分辨16srRNA不能鑒別的非常接近的菌種具有重要意義。二、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)鑒定細(xì)菌（MALDI-TOF-MS）1、原理：細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)含量高，種類及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，且大多數(shù)蛋白質(zhì)的分子量處于MALDI-TOF-MS分析的范圍。因此細(xì)菌鑒定過程中，蛋白質(zhì)也是重要的分子標(biāo)志物。細(xì)菌核糖體蛋白是細(xì)菌鑒定重要的分子標(biāo)志物2、

MALDI-TOF-MS蛋白質(zhì)量指紋圖譜（PMF）將受檢微生物PMF與數(shù)據(jù)庫中已知微生物PMF進(jìn)行比較，即可得到鑒定結(jié)果第三節(jié)

結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌(TB)，簡稱結(jié)核桿菌，是引起結(jié)核病的病原體。隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降。近年，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口廣泛流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情死灰復(fù)燃。TB是一種革蘭氏陽性菌，G+C含量高，其細(xì)胞壁除肽聚糖層外，還含有另外一層由特殊脂質(zhì)、糖脂和多糖組成的附加層。TB呈細(xì)長略彎曲，常聚集成團(tuán)，用抗酸性染色被染成紅色。對陪養(yǎng)要培求特殊條件，一般要經(jīng)4-6周才出現(xiàn)肉眼可見的菌落。TB通過呼吸道、消化道和破損的皮膚粘膜侵入機(jī)體，它被吞噬后能在吞噬細(xì)胞內(nèi)繁殖，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞裂解，還可在細(xì)胞外繁殖。TB天然地對很多抗生素有抵抗力，使得治療極其困難。該菌的藥物抵抗力主要由于其具有高度疏水的細(xì)胞壁充當(dāng)滲透屏障。同時(shí)，在基因組中還發(fā)現(xiàn)有許多藥物抗性決定因子的編碼序列，包括水解酶或者藥物修飾酶，例如乙酰轉(zhuǎn)移酶和很多藥物外排泵系統(tǒng)。目前結(jié)核桿菌常規(guī)檢測方法痰涂片法陽性率低，且易受非結(jié)核桿菌的污染。培養(yǎng)法目前認(rèn)為是診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”但結(jié)核桿菌生長緩慢，不利于臨床上的及時(shí)診斷和治療。TBH37Rv全基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，長約4.4Mb，G+C平均值65.6%，其基因序列高度保守。一、結(jié)核分枝桿菌的基因組結(jié)構(gòu)特征TBH37Rv基因組中共有3924個(gè)開放閱讀框，其中91%有潛在的編碼能力，ORF中最常見的起始密碼子61%為ATG，35%為GTG。所編碼的蛋白約有40%的為功能性蛋白，44%的與已知蛋白有相似性信息，16%的則為未知蛋白?；蚪M中有3個(gè)毒力因子：mce、過氧化氫酶-過氧化物酶和sigA。除了這些單基因毒力因子，細(xì)菌的胞壁也對致病性起著重要的作用。TB不同菌株之間存在多個(gè)差異基因。（一）TB特異基因檢測方法可采用PCR、Real-timePCR、PCR-RFLP、線性探針雜交、鏈替代擴(kuò)增技術(shù)、擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌直接試驗(yàn)（AMTDT）、基因芯片技術(shù)、全自動(dòng)結(jié)核檢測平臺等方法檢測標(biāo)本中的TBDNA。二、結(jié)核分枝桿菌的分子生物學(xué)檢測方法常規(guī)PCRPCR擴(kuò)增所選靶序列主要有65kD抗原基因、MPB蛋白基因、rRNA基因、TBIS6110插入序列、染色體DNA的重復(fù)序列等。常規(guī)PCR的不足：產(chǎn)物的交叉污染、假陽性、假陰性、實(shí)驗(yàn)室污染。Real-timePCR與傳統(tǒng)PCR相比，有敏感度、特異性高及方便快速等優(yōu)點(diǎn)，特別是對難以培養(yǎng)與生長緩慢的結(jié)核桿菌的檢測更有優(yōu)勢。1、PCR基本原理：靶DNA序列加熱變性后引物與其互補(bǔ)DNA單鏈退火，在DNA引物與靶DNA序列上對應(yīng)的DNA單鏈雜交，在聚合酶作用下產(chǎn)生帶酶切識別位點(diǎn)的目的DNA序列，該雙鏈DNA進(jìn)入SDA循環(huán)。SDA法以IS6110和16SrRNA基因?yàn)閿U(kuò)增靶點(diǎn)，該方法特異性好。2、鏈替代擴(kuò)增技術(shù)（SDA）SDA是一種基于酶促反應(yīng)的新的DNA體外等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)3、線性探針雜交

其原理是應(yīng)用生物素標(biāo)記的特異引物進(jìn)行靶核酸的擴(kuò)增，將產(chǎn)物變性后與固定在尼龍膜上的特異寡核苷酸探針雜交，通過酶免疫顯色法顯示結(jié)果，一次雜交可以檢測多種靶序列。簡便、快速、敏感。4、焦磷酸測序廣泛用于鑒定分型；是檢測基因突變的金標(biāo)準(zhǔn)。5、基因芯片以結(jié)核桿菌16SrRNA基因和耐藥基因?yàn)闄z測對象。高通量，可實(shí)現(xiàn)對TB的分類鑒定及耐藥基因的快速檢測，成本較高。6、Xpert全自動(dòng)結(jié)核桿菌檢測技術(shù)該方法以半巢式熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，能夠直接從病人痰液中同時(shí)檢測TB以及利福平耐藥基因rpoB，檢測過程自動(dòng)化。被認(rèn)為是目前最先進(jìn)的一種檢測TB及其耐藥性的方法。647、RT-PCR檢測TB活菌前述分子生物學(xué)檢測方法均是基于對TBDNA的擴(kuò)增，對TB活菌或死菌的檢測結(jié)果都會是陽性，無法鑒定死菌和活菌。由于細(xì)菌mRNA半衰期很短，因此TBmRNA被認(rèn)為是活菌檢測的理想分子標(biāo)志物。對樣本處理要求較高。65（二）結(jié)核分枝桿菌的耐藥基因檢測1、TB耐藥檢測意義近年來，由于TB耐藥菌株的不斷出現(xiàn)和傳播造成耐藥結(jié)核病的流行，特別是耐多藥結(jié)核病(multidrug-resistanttuberculosis,MDR-TB)的增加，給結(jié)核病的防治帶來嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。672、TB的耐機(jī)制TB產(chǎn)生耐藥性的分子機(jī)制主要是其染色體特定基因變異所導(dǎo)致。利福平、異煙肼、鏈霉素等防治結(jié)核病的一線藥物，在結(jié)核病臨床治療中均可以產(chǎn)生耐藥。TB耐藥相關(guān)基因主要是一些編碼代謝酶、16SrRNA等基因，這些基因的突變造成結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生耐藥性。耐利福平分子機(jī)制：是由于其作用靶標(biāo)-結(jié)核桿菌DNA依賴RNA聚合酶β亞單位的編碼基因（rpoB）突變所致。當(dāng)rpoB中507-533位密碼子的核心區(qū)域—耐利福平?jīng)Q定區(qū)(RRDR)發(fā)生突變時(shí)，使DNA依賴RNA聚合酶β亞單位酶結(jié)構(gòu)改變利福平不能與細(xì)菌的RNA聚合酶β亞單位結(jié)合而表現(xiàn)為耐藥。其中以編碼531位氨基酸的堿基TCG→TTG和編碼526