細胞實驗操作基本流程

細胞試驗操作根本流程〔基于明確的細胞試驗打算〕試驗物品預備試驗耗材預備操作預備：物品清洗、枯燥、打包滅菌、合理放置。試驗試劑預備書面預備：明確列出訪用物品名稱、數(shù)量，報請教師批準。有無滅菌需要提前配好；需要無菌配制的試劑在無菌操作要求下配制。試驗預約操作預約：401室在預約本上登記；分析測試中心向屈教師交申請單后在預約本上登記。細胞凍存復蘇預約：每周定時開放液氮罐，由負責同學在群里通知。細胞檢測預約：填寫申請單，向主管教師申請。細胞房環(huán)境檢查10-15分鐘。儀器設(shè)備：運行是否正常，有無燈光閃耀報警或標志警示，有無特別狀況。臺面：是否干凈無污垢，有無多余物品放置，必要物品是否放置齊備。清潔預備洗手：肥皂洗——510秒——70%酒精噴手大鑷子、酒精棉球瓶、打火機、移液器；左上方：；右上方：廢液缸試驗操作根本操作：換液、傳代、凍存、接板、復蘇、細胞計數(shù)、細胞觀看垃圾筐中試驗善后清洗。不行回收試驗廢物處理酸堿類廢液分類倒入廢液瓶存放，由學院通知處理無害廢液棄入水槽，大量流水沖洗固體垃圾放入垃圾袋，丟入垃圾桶按標準流程進展細胞凍存，以待后續(xù)使用。按試驗廢物處理。需要告知負責同學或教師進展修理。清潔值周和安全檢查要按要求進展清潔并在值周表上登記及拍照。狀況需要準時上報。留意事項：1、試驗打算三原則：要做什么、為什么這么做、預備怎么做2、試驗操作三原則：多看、多問、多想3、突發(fā)大事處理：準時向負責同學、教師匯報狀況細胞操作相關(guān)儀器設(shè)備使用恒溫枯燥箱使用留意事項留意事項留意事項(一)(一)枯燥箱恒溫枯燥時恒溫室下方的散熱板上，不能放置物品，以免烤壞物品或引起燃燒。(二)放入箱內(nèi)的物品不應過多、過擠。(四)假設(shè)覺察枯燥箱箱門下方紅燈報警必需盡快切斷電源。二氧化碳培育箱使用箱門應輕開輕閉，避開粗暴開關(guān)。取出細胞時應避開箱門長時間放開，以免培育箱內(nèi)環(huán)境不穩(wěn)定，孵箱中的水盆應定期〔2周左右〕更換無菌雙蒸水，并30分鐘。二氧化碳氣瓶更換先關(guān)閉總閥和分壓閥，更換后先開總閥，再漸漸調(diào)整分壓閥，指針總閥在5分鐘左右，分壓閥指針在0.15左右。超凈臺使用使用超凈臺工作15分鐘前開紫外燈進展照耀滅菌，在進入操作之前應關(guān)掉紫外燈，10分鐘左右后進入。超凈臺上力求簡潔，以利于保持無菌狀態(tài)，每一步操作均應用酒精擦拭，不宜對著超凈臺說話。倒置相差顯微鏡使用3點：相差裝置的調(diào)換與安裝。卸下一般顯微鏡使用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，它可以吸取紅色和藍色光，使波長范圍小的單色光線進展照明，并有吸熱作用，能使相差觀看獲得良好的效果。再從轉(zhuǎn)換器上旋下一般物鏡，換上相差物鏡?！皁”準標示孔，使一般聚光器局部進進光路。先使用低倍相差物鏡，按一般顯微鏡操縱方法進展對光和調(diào)焦。旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應。合鈾調(diào)整。拔出目鏡，插進合鈾看遠鏡，一邊從看遠鏡內(nèi)內(nèi)觀看，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動看遠鏡內(nèi)筒使其下降，當對準焦點就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的黑環(huán)，此時可將看遠鏡固定住。再升降集光器并調(diào)整其下的螺旋使亮環(huán)的大小與黑環(huán)全都，然后左右前后調(diào)整環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)整鈕，使兩環(huán)完全重合，如亮環(huán)比黑環(huán)小而位于內(nèi)側(cè)時，應降低集光器使亮環(huán)放大；反之，則應上升聚光器，使亮環(huán)縮小。如假設(shè)升到最高限度仍不能完全重合，則可能是載玻片過厚之故，應更換。合抽調(diào)整完畢，抽出看遠鏡，換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進展觀看。在更換不同倍率的相差物鏡時，每一鏡，換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進展觀看。在更換不同倍率的相差物鏡時，每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌和重合抽調(diào)整。使用油鏡時，集光器上透鏡外表與載玻片之間要同時加上香柏油。低速離心機使用將需要離心的樣品對稱放入離心機內(nèi)，關(guān)好蓋子，接上電源，調(diào)整轉(zhuǎn)速和運轉(zhuǎn)0000后，翻開蓋子，取出樣品。傳遞窗使用LED顯示燈，一只開門按鈕和一只殺菌燈開關(guān)。顯示燈為綠色時，為開門指示燈，滅表示對面的門衛(wèi)開狀態(tài)，制止此門翻開，按開門按鈕無法翻開門。亮表示允許開門，按開門按鈕，門鎖翻開，開門傳遞物件。殺菌開關(guān)可以掌握箱內(nèi)的殺菌燈的亮和滅。酸缸、酸筒使用酸缸分為內(nèi)缸和外缸，外缸里面放液體，內(nèi)缸里面放要清洗的器皿，浸泡完畢后，將內(nèi)缸向上提出，內(nèi)缸上面有很多的小孔，液體從內(nèi)缸體小孔流出，取出物品，蓋上蓋子。移液器使用一、標準操作適用的液體：水、緩沖液、稀釋的鹽溶液和酸堿溶液。按到第一檔，垂直進入液面3-5毫米。體積削減。1s后，待剩余液體聚攏后，再按到其次檔將剩余液體全部壓出。二、黏稠或易揮發(fā)液體的移取在移取黏稠或易揮發(fā)的液體時，很簡潔導致體積誤差較大。為了提高移液準確性，建議實行以下方法：移液前先用液體預濕吸頭內(nèi)部，即反復吸打液體幾次使吸頭預濕，吸液或排出(如1000~1)，建議將吸頭預濕后再移取。局部液體殘留在吸頭內(nèi)。微量移液器使用使用方法同移液器的使用。3點：

細胞計數(shù)板使用將計數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板上。將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液布滿蓋片和計數(shù)板之間，靜置3min，留意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。計數(shù)板四大格細胞總數(shù)，壓線細胞只計算左側(cè)和上方的。然后依據(jù)公式計算：細胞數(shù)/ml=四大格細胞總數(shù)/4*高壓滅菌鍋使用6點：首先將內(nèi)層滅菌筒取出，再向外層鍋內(nèi)參加適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。放回滅菌筒，并裝入待滅菌物品。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌筒的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊全都，勿使漏氣。用電爐或煤氣加熱，并同時翻開排氣閥，使水沸騰以排解鍋內(nèi)的冷空氣。待當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，掌握熱源，維持壓力至所需時間。滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，壓力0時，翻開排氣閥，旋松螺栓，翻開蓋子，取出滅菌物體。將取出的滅菌培育基放入37℃恒溫培育箱內(nèi)培育24小時，經(jīng)檢驗無雜菌生長，即可待用。酶標儀使用冰箱使用冰箱中試劑藥品分類放置，關(guān)閉冰箱時檢查是否關(guān)好。液氮罐使用使用前，檢查容器內(nèi)部是否清潔枯燥，充液氮前要用少量液氮預冷。不能在容器蓋上放置物體和密封頸口，放進或取出冷凍物品時，要盡量使罐口翻開時間短，以削減液氮消耗，也不要把提桶完全提出來。嚴防沖擊和碰撞。嚴謹用硬物去除頸管內(nèi)的凍霜，以免損傷頸管。超低溫冰箱使用一般制冷溫度設(shè)置為-60度，過濾網(wǎng)每個月必需清洗一次。存取樣品時門開得不要過大，存取時間盡量要短。留意常常要存取的樣品放在上面兩層，需要長期保存不常常存取的樣品放在下面兩層，保證開門時冷氣不過度損耗。定期除霜。細胞試驗根本液體配制培育基配制PBS配制成安排比為：1%〔w/v〕