西索米星(Sisomicin)菌種工藝規(guī)程

原料藥事業(yè)部**生物工程題目：題目：西索米星〔Sisomicin〕菌種工藝規(guī)程1頁(yè)共11頁(yè)制定人：黃啟鵬日期：編碼：STP-JZGY-005-01審核人：日期：生效日期：批準(zhǔn)人：日期：頒發(fā)部門(mén)：質(zhì)量部分發(fā)部門(mén)：生產(chǎn)副總、總工程師、生產(chǎn)部、質(zhì)量保證部、菌種中心l目的作程序的依據(jù)。適用范圍菌種中心西索米星菌種生產(chǎn)工藝。責(zé)任者負(fù)責(zé)。目 錄\l“_TOC_250002“產(chǎn)品概述… 2\l“_TOC_250001“原材料質(zhì)量規(guī)格… 4\l“_TOC_250000“生化反響及工藝流程圖… 5工藝過(guò)程及質(zhì)量掌握… 6菌種保存… 8菌種選育… 8主要設(shè)備一覽表… 10技術(shù)安全及防火… 119附頁(yè)… 1110修訂簡(jiǎn)歷… 11第2頁(yè)共第2頁(yè)共11頁(yè)STP-JZGY-005-00西索米星〔Sisomicin〕菌種工藝規(guī)程產(chǎn)品概述西索米星〔Sisomicin〕70糖苷類，以其為母核可合成另一種抗生素奈替米星〔Netilmicin，它具有療效好，副作用小的特點(diǎn)。與大多數(shù)抗生素一樣，西索米星也是一種由微生物發(fā)酵產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，國(guó)外氏小單孢菌澄江變種產(chǎn)生。目前我公司主要生產(chǎn)菌種為Y系列白色變株，其發(fā)酵生物效價(jià)可達(dá)1450u/ml[抗生素名稱][化學(xué)名稱]O—3—4—C——3—β—L—(1—4)—O—[2,6—二氨基—2,3,4,6—α—D—甘油基—4—烯己吡喃糖基—(1—6)]—2—去氧—L—鏈霉胺[構(gòu)造式]2OO23CH NH NH2OO23OH2HN O O2HOHOHC3NHCH3R1R2R1R2R3合成方式西索米星HC--3--OH--H生物合成主組分奈替米星HC----OH--CH半合成66-40B3HO----H25--H生物合成小組分66-40DH----OH--H生物合成小組分[主要產(chǎn)品]產(chǎn)品名稱產(chǎn)品名稱分子式分子量西索米星堿〔用于半合成〕CHNO193757447.72硫酸西索米星 (CHNO).5HSO 1385.431937572 2 4硫酸奈替米星 (CHNO).5HSO 1441.542141572 2 4[抗菌譜]西索米星是一種廣譜抗菌素,與慶大霉素(Gentamicin)相像，對(duì)G+細(xì)菌〔除鏈霉菌G—細(xì)菌，包括多數(shù)綠膿桿菌具有相當(dāng)活性。NetiG--桿菌都有較強(qiáng)抗菌活性。原材料質(zhì)量規(guī)格生化試劑〔分析純或化學(xué)純〕工業(yè)〔規(guī)格〕序號(hào) 原材料名稱 規(guī)格 外觀土豆淀粉 工業(yè) 含量水分外觀

潔白的粉末，具有光澤。 78％ 20％黃色至棕褐色濃稠液體，無(wú)結(jié)塊。40.0%玉米漿 黃豆餅粉 工業(yè)酵母粉

干物質(zhì)外觀水分外觀灰份

40.0%淡黃色粉末(無(wú)霉味)37.0％12％913％熱榨：10.0％80目通過(guò)72％淡黃色至淺黃棕色顆?；蚍勰?.5%44.0%8%外觀蛋白胨 工業(yè) 其他 —

淺黃色至土黃色粉末7.0%13.0%—碳酸鈣 工業(yè)

白色粉末97.0%生化反響及工藝流程圖化學(xué)反響過(guò)程〔西索米星生物合途徑〕2—去氧鏈霉胺 a 巴龍霉胺 b 慶大霉素A2抗生素JI—20A e 慶大霉素X2

cd Af g西索米星 h 抗生素66—40B參加D—葡萄糖胺D—葡萄糖C—3//：N—甲基胺化C—4//：甲基化和差向異物化C—6/：胺化〔f〕3/，4/--(OH)2

和4/--5/--不飽化〔g〕C—6/：胺化和4/--5/--不飽化〔h〕C—4//：甲基化和差向異物化工藝流程圖341C

332C120h冷凍管

482h

341C斜面5－6d生產(chǎn)力量測(cè)定341C種子482h

并瓶 車間一級(jí)罐設(shè)備流程圖第6第6頁(yè)共11頁(yè)STP-JZGY-005-00西索米星〔Sisomicin〕菌種工藝規(guī)程a〕冷凍管〔b〕250ml〔c500ml〔d〕500ml〔e〕1000ml〔用于車間進(jìn)罐〕〔f〕250~500ml工藝過(guò)程及質(zhì)量掌握搖瓶發(fā)酵培育基〔％〕6.0搖瓶發(fā)酵培育基〔％〕6.01.04酵母粉0.10.5原料名稱固體培育基〔％〕搖瓶種子培育基〔％〕土豆淀粉1.52.0葡萄糖0.50.5KHPO2 40.05干酪素0.20.2玉米漿——MgSO0.05第7頁(yè)共第7頁(yè)共11頁(yè)STP-JZGY-005-00西索米星〔Sisomicin〕菌種工藝規(guī)程CaCOCaCO30.50.60.6瓊脂粉2.3黃豆餅粉3消前pH7.10.17.10.1生產(chǎn)力量測(cè)定110－130pH，并鏡檢菌絲形態(tài)，估量生物效價(jià)。用HSOpH2.02 4KOHpH7.0裝量規(guī)格名稱名稱種子瓶發(fā)酵瓶固體斜面瓶子規(guī)格500ml△500ml△試管裝量規(guī)格90ml80ml80ml17ml通氣量每只棉塞兩層紗布內(nèi)包一層絨布棉花做成的棉塞生產(chǎn)用供種斜面的制備0.7－1.0ml5－64℃冰箱確定符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后備用。生產(chǎn)用菌絲瓶的制備取190ml種子培育基的500ml生產(chǎn)。試、鏡檢確認(rèn)無(wú)菌，符合質(zhì)量要求可用于生產(chǎn)。質(zhì)量掌握標(biāo)準(zhǔn)各級(jí)工藝掌握點(diǎn)項(xiàng) 目項(xiàng) 目工 藝 控 制 點(diǎn)培育溫度：34±1℃ 培育時(shí)間5－6天供種斜面保存溫度：4℃冰箱 使用期限≤45天搖瓶種子2.5220—240rpm偏心距25mm各級(jí)質(zhì)量掌握標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng) 目搖瓶種子

外觀外觀無(wú)菌度

質(zhì) 量 要求姜黃色800u/ml無(wú)雜菌姜黃色鏡檢及無(wú)菌試驗(yàn)無(wú)雜菌菌種保存〔承受冷凍管保存〕為了防止生產(chǎn)菌種形態(tài)和生產(chǎn)力量的變異，以保持菌種的原始形態(tài)和特定的生產(chǎn)能司承受此法。冷凍管制備18×200mm121±1℃25冷凍管保藏菌種在無(wú)菌室內(nèi)以嚴(yán)密的無(wú)菌操作，吸取6ml種子液，移入已滅菌的試管中。塞好橡膠塞，粘上膠布，并搖勻菌液18℃至－25℃保藏。菌種選育篩選程序〔流程〕STP-JZGY-005-00西索米星〔STP-JZGY-005-00西索米星〔Sisomicin〕菌種工藝規(guī)程第9頁(yè)共11頁(yè)動(dòng)身菌株誘變分別在平皿上選擇菌落(100初篩復(fù)篩202—4高產(chǎn)埋冷凍管進(jìn)罐考察3/株菌懸液的制備10ml306層擦鏡紙的漏斗過(guò)濾。濾液用作純化或誘變處理。菌種純化將菌懸液，按10倍的稀釋法，逐一稀釋至10-3—10-6，從適當(dāng)濃度的稀釋管中吸取34±1℃培育。培育開(kāi)頭〔一菌落移入一斜面34±1℃6－810%2-4做傳代試驗(yàn)。同時(shí)測(cè)定產(chǎn)物活性〔組分變化狀況。最終確定遺傳性狀穩(wěn)定菌株留作生產(chǎn)備用。同時(shí)也降低了原來(lái)環(huán)境條件的適應(yīng)力量。所以對(duì)突變株選擇適應(yīng)環(huán)境至關(guān)重要?！蚕鄬?duì)而言、遺傳性狀穩(wěn)定、生產(chǎn)力量強(qiáng)、產(chǎn)孢子豐富、發(fā)酵性能好、周期短、有效組分高、廣泛適應(yīng)環(huán)境條件等。誘變、化學(xué)誘變、復(fù)合因子處理等方法與純化操作所不同的是利用誘變劑處理微生物，以誘變 造成突變，微生物菌種突變的頻率比自發(fā)突變有大幅度提高。物理誘變劑較廣泛應(yīng)用的有紫外線、X射線、快中子等。5－氟尿嘧啶、氮芥等。絕大多數(shù)化學(xué)誘變劑具有毒性，其中90％以上是致癌物質(zhì)或極毒藥品，使用時(shí)要格外留神，不要直接用口吸，要避開(kāi)與皮膚直接接觸，也要防止污染環(huán)境，造成公害。第10頁(yè)共第10頁(yè)共11頁(yè)STP-JZGY-005-00西索米星〔Sisomicin〕菌種工藝規(guī)程主要設(shè)備一覽表設(shè)備名稱設(shè)備名稱型號(hào)規(guī)格數(shù)量備注用途無(wú)菌凈化臺(tái)SW—CJ—1CUSW—CJ—2G52蘇凈蘇凈科研試驗(yàn)顯微鏡雙目CH201日本產(chǎn)Olympus鏡檢電熱鼓風(fēng)箱DHG-9123AGZX-DH-30X3511上海**醫(yī)療器械廠搖瓶機(jī)ZHWY-3122C500mlZHWY-31221000ml88上海智城山東魯抗深層液體培育深層液體培育電冰箱SC-238KQ-1013C-50E1111存放斜面、試劑、沙土管等離心機(jī)80－21上海**器械廠離心圓形臥式壓力蒸汽滅菌器RZZ-065-20231上海**儀器滅菌酸度計(jì)pHS—251上海pH技術(shù)安全及防火關(guān)系到每個(gè)人的生命安危。〔一周一次大掃除，每天安排值日生負(fù)責(zé)當(dāng)天事宜，